运用多媒体技术上好医学微生物学

从医学微生物学专业特点出发 ,论述了多媒体教学在医学微生物学教学中的优越性和作用 。

人骨肉瘤多药耐药细胞模型建立及生物学形状分析

目的 :建立人骨肉瘤细胞多药耐药 (MDR)细胞亚系。方法 :采用多柔比星间断冲击法诱导骨肉瘤细胞 ,并用免疫荧光法检测P 糖蛋白 (P gp)的表达、四唑蓝 (MTT)比色法对MDR表型鉴定和多柔比星结合实验法检测肿瘤细胞耐药性及耐药逆转药。结果 :该实验建立 6株MDR细胞亚系MG 63 R1～ 6 ,免疫荧光术可以检测到P gp的表达 ,MTT比色法、多柔比星结合试验方法显示各亚系细胞的多药耐药性明显增加 ,并且维拉帕米可以拮抗P gp的作用。结论 :Mdr 1 P gp在MDR的特性上起着至关重要的作用 ,这些骨肉瘤MDR细胞亚系模型为进一步研究骨肉瘤耐药特征及逆转方法奠定基础。

芝加哥大学医学教育改革模式下的PBL教学实践与思考

为了适应现代医学教育的改革进程,培养能够适应医疗卫生事业发展需要,具有国际视野、创新、创造、创业精神和能力的拔尖创新人才。自2009年起,武汉大学与芝加哥大学合作,进行了临床医学专业教育改革。打破了原来以学科为单位的教学方式,坚持以临床为导向有机整合课程,并在教学中引入以问题为导向的PBL教学方法,推行小组病案讨论模式,参与式学习并进行形成性评价。教学改革至今已有八年制毕业生一届,从基础过渡到临床的学生四届。在教学实践的过程中,各学科已摸索出了适合本校学生和本学科课程的PBL教学方法及课程设置。

甲泼尼龙对肺炎支原体诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α的影响

目的观察甲泼尼龙(MPL)对肺炎支原体(MP)诱导A549细胞产生细胞因子白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为临床在MP肺炎中合理应用糖皮质激素(GCs)提供理论依据。方法体外培养A549细胞和MP,用不同感染复数的MP诱导A549细胞,将0.015%的MPL加入到MP诱导的A549细胞中共同孵育,采用双抗体夹心ELISA法检测MPL作用于A549细胞后细胞分泌的IL-8和TNF-α的含量。结果MP能显著诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α,0.015%MPL能明显抑制A549细胞分泌IL-8和TNF-α(P<0.01),随着MP感染复数的增加,MPL的抑制作用降低。结论GCs可抑制MP诱导的A549细胞IL-8和TNF-α的分泌,提示在重症MP肺炎早期,适当应用合理剂量的GCs可减轻炎症反应的强度。

二苯胺法定量检测细胞凋亡

目的 :建立二苯胺定量检测细胞凋亡的实验方法。方法 :以地塞米松体外作用 5h的小鼠胸腺细胞作为凋亡阳性细胞 ,应用二苯胺法测定细胞片段化DNA和总DNA的含量 ,二者的比值定义为细胞凋亡率。结果 :地塞米松 (1× 10 - 5mol L)处理 5h后 ,细胞凋亡率为 30 .2 4 %。此与流式细胞仪分析结果 (2 7.10 % )基本一致。结论 :建立了一种简单、经济。

肺炎支原体诱导A549细胞分泌白细胞介素-8及核因子-κB阻断剂的抑制作用

目的:观察肺炎支原体(Mp)体外诱导A549细胞产生细胞因子白细胞介素-8(IL-8)的水平以及核因子-κB(NF-κB)阻断剂二硫氨基甲酸吡啶(PDTC)对IL-8产生水平的影响。方法:将A549细胞与不同感染复数和不同刺激时间的Mp共同孵育,用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-8的含量;用不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC预处理A549细胞,然后再以Mp诱导,测定细胞培养上清液中IL-8的含量。结果:A549细胞经Mp刺激后,IL-8的产生水平明显高于正常细胞对照组(P<0.05),且IL-8的产生水平与Mp的感染复数和感染时间具有依赖性。NF-κB抑制剂PDTC一定程度上可抑制Mp诱导的A549细胞IL-8的产生(P<0.05)。结论:Mp可诱导A549细胞产生炎性细胞因子IL-8,NF-κB阻断剂可有效降低Mp诱导的IL-8的产生,抑制NF-κB活化有望成为新的治疗靶点。

肺炎支原体膜脂蛋白诱导A549细胞mICAM-1表达上调

目的 :观察肺炎支原体膜脂蛋白 (Mp -LAMP)对肺腺上皮癌细胞 (A5 4 9细胞 )mICAM - 1表达的影响并探讨膜脂蛋白中的活性成分 ,为阐明肺炎支原体感染所致炎性反应奠定基础。方法 :用流式细胞术检测Mp -LAMP不同浓度刺激组、不同时间刺激组及消化酶处理组的A5 4 9细胞mICAM - 1的表达水平。结果 :与正常细胞相比 ,A5 4 9细胞受到Mp -LAMP作用后 ,mICAM - 1的表达水平明显上调 (P <0 .0 1) ,且对Mp -LAMP具有浓度依耐性。随着Mp -LAMP作用时间的延长 ,A5 4 9细胞mICAM - 1表达水平逐渐上升 ,作用 16h时达到高峰 ,然后开始下降。酶消化试验证实Mp -LAMP的活性成分是其脂质部分。 结论 :肺炎支原体膜脂蛋白中的脂质成分可以诱导A5 4 9细胞mICAM - 1表达水平的上调 ,在很大程度上影响着肺炎支原体所致炎性反应的强弱。

肺炎支原体肺炎患儿血清IL-4、IL-18及IFN-γ检测及意义

目的:探讨小儿肺炎支原体肺炎(Mycoplasmal pneumonia,MPP)血清IL-4、IL-18及IFN-γ的变化及其临床意义。方法:住院确诊的MPP患儿24例及正常对照组儿童21例。用ELISA测定MPP急性期、恢复期、正常对照组血清IL-4、IL-18及IFN-γ。结果:MPP患儿血清IL-4、IL-18含量急性期明显高于恢复期和正常对照组,差异有非常显著意义(P<0.01);恢复期和正常对照组比较,无统计学意义(P>0.05);重症组明显高于轻症组(P<0.05);血清IFN-γ含量急性期轻度高于恢复期和正常对照组,但无统计学意义;血清IL-4/IFN-γ比值急性期高于恢复期和正常对照组,差异有显著意义;MPP患儿急性期血清IL-4含量重症组明显高于轻症组,急性期IFN-γ含量重症组稍高于轻症组,但无统计学意义;恢复期IFN-γ、IL-4、IL-4/IFN-γ重症组和轻症组比较无统计学意义;MPP患儿血清IL-4,IL-8呈显著正相关(P<0.001)。结论:MPP患儿存在THl/TH2失衡,TH2反应占优势,IL-4及IFN-γ参与MPP患儿的免疫状态改变,在MPP发病机制中起一定作用。IL-18在肺炎支原体肺炎患儿血清中明显增高,且与IL-4呈正相关,IL-18可能在促进IL-4的分泌中起到一定的作用。

念珠菌性外阴阴道炎阴道分泌物中IL-10和IFN-γ的表达水平测定

目的:测定念珠菌性阴道炎阴道分泌物中白细胞介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)的表达水平,探讨不同类型细胞因子的表达水平与念珠菌性阴道炎发病的关系。方法:ELISA法检测初发组和复发组念珠菌性阴道炎的妇女阴道分泌物中IL-10I、FN-γ的表达水平,以健康体检妇女为对照组。结果:初发和复发念珠菌性阴道炎的阴道分泌物中IL-10的表达水平均显著高于健康对照组,复发组较初发组的表达水平也有显著性差异(P<0.05);初发和复发念珠菌性阴道炎的阴道分泌物中IFN-γ的表达水平无显著性差异(P>0.05),但均高于健康对照组(P<0.05)。结论:Th1型和Th2型细胞因子的表达异常可能与念珠菌性阴道炎发病和复发有关。

结核分枝杆菌急性感染小鼠模型的建立

目的 比较两种不同感染途径的结核分枝杆菌（MTB）急性感染小鼠动物模型，观察结核分枝杆菌在体内的定植及其肺组织的病理变化。方法 54只小鼠（C57BIM6）随机分为对照、尾静脉注射和腹腔注射3组；感染鼠分别通过尾静脉注射或腹腔注射H37Rv标准株结核分枝杆菌菌液2×10^6CFU，以生理盐水尾静脉注射为对照；在感染后3周、6周及9周取小鼠脾脏和肺脏做细菌计数和肺组织病理学检测，并观察小鼠体重，存活状况。结果 结核菌感染鼠中，以尾静脉注射组小鼠的活动状态及体重均差于腹腔注射组；两组脾脏和肺脏组织中结核菌计数差异具有显著性（P〈0．05）；组织中结核结节及干酪样坏死病灶亦以尾静脉注射组为明显。结论 以尾静脉注射法建立结核分枝杆菌急性感染的小鼠模型更为有效。

脂肪肝与谷丙转氨酶、血糖及血脂的相关性分析

目的探讨脂肪肝与谷丙转氨酶(ALT)、血糖(FBG)、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)的相关性,为预防脂肪肝提供依据。方法2006年10月对某高校816名高级知识分子、高级干部进行健康体检,B超检查诊断脂肪肝218例,同时空腹抽血进行谷丙转氨酶、血糖、甘油三酯、总胆固醇的测定,并对结果进行分析。结果脂肪肝患者血清谷丙转氨酶、血糖、甘油三酯和总胆固醇的异常率均高于非脂肪肝组,且随着脂肪肝程度的加重,血清谷丙转氨酶、血糖和甘油三酯的异常率越高。结论脂肪肝与患者血清谷丙转氨酶、血糖、甘油三酯和总胆固醇的异常有关。

转化生长因子β_1基因转染对大鼠胰岛移植的功能和存活时间的影响

目的 :研究转化生长因子 (TGF - β1)对大鼠同种胰岛移植物体内外的内分泌功能及存活的影响。方法 :构建TGF - β1的真核表达载体 pcDNA3-TGF ,纯化后转染Wistar大鼠胰岛 ,RT -PCR检测TGF - β1和大鼠胰岛素 1(Ins1)在实验组和对照组胰岛中的表达 ,放射免疫法 (radioimmunologicalassay ,RIA)检测体外培养液中的胰岛素含量 ;链脲霉素 (streptozotocin ,STZ) 6 0mg·kg-1腹腔内注射制作SD大鼠模型 ,分别将上述两组胰岛移植到受体SD大鼠的肾包囊下 ,观察其在体内逆转糖尿病的作用以及作用时间 ,并检测受体大鼠的糖耐量。结果 :实验组胰岛有TGF - β1和Ins1的表达 ,而对照组仅有Ins1的表达 ;实验组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为 (3.86± 1.2 4 )ng·ml-1和 (8.4 3± 1.5 9)ng·ml-1,对照组体外培养液中的胰岛素含量在基础相和刺激相分别为(4 .13± 1.4 5 )ng·ml-1和 (8.95± 1.74 )ng·ml-1,组间无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,而组内有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;实验组平均正常血糖维持时间 (2 6 .8± 2 .9)d比对照组 (13.2± 4 .5 )d显著延长。对照组糖耐量曲线均明显高于实验组。结论 :TGF - β1对胰岛移植物的内分泌功能无损害作用 ,但是可以延长胰岛移植物体内存活时间。

维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导细胞mICAM-1表达的调控

目的 观察维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白(Mp- L AMP)诱导A5 4 9细胞、ECV30 4细胞表达m l CAM- 1的影响;探讨维生素C对肺炎支原体膜脂蛋白诱导的炎症反应的抑制作用。方法 用流式细胞术检测不同浓度维生素C作用于2 5 ug/ m1膜脂蛋白刺激的A5 4 9细胞、ECV30 4细胞后ml CAM- 1的表达水平。结果 与对照组相比,不同刺激浓度的维生素C对膜脂蛋白刺激的A5 4 9细胞ml CAM- 1的表达水平无显著性差异(P>0 .0 5 ) ,但对膜脂蛋白刺激ECV30 4细胞的ml CAM- 1的表达具有抑制作用(P<0 .0 5 ) ,维生素浓度越高,抑制作用越明显。结论 维生素C能抑制肺炎支原体膜脂蛋白诱导的ECV30 4细胞m l CAM- 1表达的上调,对A5 4 9细胞m ICAM- 1的表达水平无影响。维生素C抑制血管内皮细胞m l CAM- 1的表达。

维生素A在肺炎支原体肺炎疾病中的作用

肺炎支原体肺炎的治疗一直是临床医师关注的热点,而维生素A是临床常用的营养补充剂,本文从维生素A对机体免疫功能的影响和肺炎支原体肺炎的发病机制入手,介绍了维生素A在感染性疾病中的应用,重点论述维生素A通过细胞因子在肺炎支原体肺炎疾病中的作用。

Bcl-2和p53基因蛋白在原发性肝癌诊断中的应用价值

目的研究Bcl-2和p53基因蛋白在原发性肝癌诊断中的应用价值。方法用免疫组化的方法分别检测炎症组、非典型增生组、癌变组的肝组织Bcl-2和p53蛋白的阳性表达情况。结果p53蛋白在非典型增生组开始表达(58.3%),与癌变组的阳性表达率(69.7%)无显著差异(P>0.05);Bcl-2蛋白在炎症组低表达(12.5%),在癌变组高表达(57.6%),两组间有显著性差异(P<0.05);并且两种蛋白的阳性程度随病变的恶性程度逐渐增加。结论Bcl-2和p53基因在原发性肝癌诊断中有较高的应用价值。

猪鼻支原体抗原对K562细胞增殖的影响

目的 探讨猪鼻支原体抗原对肿瘤细胞的作用。方法 以MTT法测定猪鼻支原体抗原对肿瘤细胞增殖的影响 ;琼脂糖凝胶电泳定性检测细胞凋亡 ;TUNEL法定量检测细胞凋亡。结果 猪鼻支原体抗原呈浓度依赖性抑制K5 6 2细胞的增殖 ;在有效浓度的猪鼻支原体抗原作用下 ,DNALadder显示K5 6 2细胞以凋亡方式死亡 ,TUNEL法获得凋亡率为 38.6 % ,显著高于正常对照组 (10 .2 % )。结论 猪鼻支原体抗原可通过诱导K5 6 2细胞凋亡的方式抑制其增殖。

Granulysin真核表达载体的构建与鉴定

目的:构建颗粒溶解素(granulysin)cDNA真核表达载体。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出颗粒溶解素蛋白cDNA,经限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1(-)的相应酶切位点,将此重组质粒进行序列测定,并将重组质粒转染COS7细胞,进行基因表达鉴定。结果:重组质粒插入基因序列测定证实为颗粒溶解素cDNA,并能在COS7细胞稳定表达。结论:成功构建颗粒溶解素真核表达载体,为进一步研究其抗结核作用奠定了基础。

齿密螺旋体对小鼠T细胞IL-2 mRNA表达水平及活性的影响

目的 :研究齿密螺旋体 (T .d)免疫对小鼠T细胞中IL - 2mRNA表达水平及活性的影响作用。方法 :以RT -PCR和凝胶图像吸收度分析系统检测检测T .d对小鼠脾脏T细胞IL - 2mRNA表达的影响 ;用MTT法对T细胞培养上清中IL - 2活性进行测定。结果 :T .d能在转录水平抑制静息T细胞IL - 2mRNA的表达 ,并抑制T细胞培养上清中IL - 2样活性。结论 :T .d免疫抑制作用的基础与其在转录水平抑制T细胞中IL - 2mRNA的表达有关。

肺炎支原体对宿主细胞黏附机制的研究进展

肺炎支原体通过其末梢尖端结构即黏附细胞器与呼吸道黏膜上皮细胞受体(唾液酸共轭物或糖脂结构域)结合并定植于人体呼吸道,引起原发性非典型性肺炎等疾病。因此,其黏附机制引起了人们的重视。本文着重阐述了肺炎支原体黏附细胞器的形态、结构,黏附素与黏附辅助蛋白的种类、定位、功能及在黏附过程中的协同作用。

发酵支原体M161Ag的研究进展

发酵支原体是一类没有细胞壁的原核细胞型微生物。作为艾滋病的协同刺激因子,其作用机制至今未明。近年来研究发现发酵支原体的膜表面有一种膜脂蛋白抗原物质,称M161Ag。它可激活单核/巨噬细胞系统的细胞,从而释放多种促炎性细胞因子,如白细胞介素1β,肿瘤坏死因子α,白细胞介素6、10、12,一氧化氮;还可通过旁路途径激活补体系统,致宿主细胞产生炎症反应和天然免疫。另外,M161Ag还促使未成熟的树突细胞成熟。通过树突细胞的抗原呈递作用,介导宿主细胞的特异性免疫应答。本文重点介绍M161Ag的功能及其与配体相互作用的信号传递途径。