空心莲子草微乳体外抗柯萨奇病毒B3的实验研究

目的:观察空心莲子草微乳在体外抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用,为将纳米技术应用于该药的研发提供理论依据。方法:提取空心莲子草抗病毒活性成分并制备成微乳制剂,以高效液相法测定微乳中空心莲子草浓度,测定微乳的粒径及其分布,考察微乳的稳定性,通过细胞实验评价药物的抗病毒作用。结果:微乳的平均粒径为32 nm,具有很好的稳定性,有明显抑制CVB3的作用,治疗指数27.31。结论:空心莲子草微乳有显著的抗CVB3的作用,微乳化的空心莲子草安全性比未经微乳化的高。

盐酸阿比朵尔抗腺病毒7型的实验研究

目的:明确抗病毒新药盐酸阿比朵尔体外抗腺病毒7型(ADV-7)的作用方式。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性、病毒滴定3种方法从药物抗病毒生物合成、药物直接杀伤病毒以及药物抗病毒吸附3方面检测盐酸阿比朵尔的作用方式。结果:盐酸阿比朵尔对ADV-7无直接杀伤作用,也不能阻止ADV-7的吸附和穿入,各用药组均出现典型的CPE,但盐酸阿比朵尔能明显抑制ADV-7的生物合成作用,对细胞的半数毒性浓度(CC50)为85.37 mg/L,对ADV-7的半数有效浓度(IC50)为15.39 mg/L,治疗指数(TI)为5.55,且随着药物浓度的增加,病毒所致的CPE效应逐渐减弱,培养液中的病毒滴度也逐渐降低,而病毒抑制率则明显升高。结论:盐酸阿比朵尔在体外通过抑制病毒生物合成而发挥抗ADV-7的作用,其具体作用机制有待进一步研究。

草血竭抗流感病毒的研究

目的:为研究草血竭体外抗流感病毒作用机理。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性及空斑减数实验测定病毒滴度,以确定草血竭两个有效成分细胞内抗流感病毒的作用。结果:实验发现草血竭水煮醇沉干浸膏和草血竭纯化部分既不能阻断流感病毒侵入细胞,也不能抑制流感病毒的生物合成,且各药物浓度组均出现典型的细胞病变效应(CPE);但草血竭水煮醇沉干浸膏与草血竭纯化部分能够明显杀灭病毒,即随药物浓度的增加,CPE特征逐渐减弱,病毒滴度也逐渐降低,而空斑减数率明显升高。结论:草血竭在体外通过直接灭活作用发挥抗流感病毒作用。

空心莲子草类盐抗汉坦病毒作用研究

目的 明确空心莲子草类盐抗汉坦病毒（HV）的作用机制。方法 采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞活性、免疫荧光法（IFA）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测病毒滴度和病毒核酸，以确定空心莲子草类盐细胞内抗HV作用。结果 空心莲子草类盐对HV无直接灭活作用，也不能阻止HV的吸附，这表现在各药物浓度组病毒滴度均在5．7以上；空心莲子草类盐有抑制HV生物合成作用，在质量浓度为40-320mg·L^-1内，随着药物质量浓度的增加，病毒滴度、细胞培养液中病毒核酸的阳性稀释度逐渐降低，抗病毒指数逐渐增加，并表现出量效关系，药物治疗组的病毒滴度明显低于病毒对照组（P〈0.05）。结论 空心莲子草类盐在体外通过抑制病毒生物合成而发挥抗HV作用。

湖北地区汉滩病毒与普马拉病毒及多布拉伐病毒的血清学交叉反应研究

目的研究湖北地区汉滩病毒(hantaan virus,HTNV)与普马拉病毒(Puumala virus,PUUV)、多布拉伐病毒(Dobrava virus,DOBV)血清学交叉反应。方法以酵母菌表达的PUUV、DOBV、HTNV重组核衣壳蛋白(recombinant nucleocapsid protein,rNP)为包被抗原,ELISA法定性、定量分析湖北地区HTN型急性/恢复期血清中IgA、IgG、IgM抗体,比较疾病早晚期血清学交叉反应变化。结果DOB-rNP与HTN型血清中IgA、IgG、IgM抗体交叉反应性较高,PUU-rNp对HTN型血清交叉反应很低;IgA、IgG抗体交叉反应在恢复期血清中均增高,且IgA抗体交叉反应更多更强。结论湖北地区HTN型血清与DOBV存在广泛交叉反应,与PUUV交叉反应少。各交叉反应在恢复期增高对汉滩病毒血清学研究具重要意义。

蓝舌病毒HbC_3株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式的研究

目的:研究蓝舌病毒湖北株致人宫颈癌HeLa细胞死亡方式及其作用机制。方法:原位末端标记(TUNEL法)观察病毒诱导细胞凋亡情况;激光扫描共聚焦显微镜检测荧光标记的细胞核及内质网变化;萤光照度仪检测病毒诱导细胞Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性变化。结果:凋亡染色未见明显凋亡细胞,共聚焦检测见细胞核膜不完整,染色质分散,有的凝集在核膜周围,部分染色质外溢,内质网分散,混浊不清,细胞与细胞之间分界不清;萤光照度仪检测酶活性可见Caspase-3/7,Caspase-8,Caspase-9活性均无明显变化。结论:蓝舌病毒湖北株诱导HeLa细胞胀亡而发挥其抑瘤作用。

中国湖北地区汉坦病毒M片断基因变异的研究

目的:了解中国湖北地区汉坦病毒的遗传学特征.方法:采集2000～2001年肾综合征出血热(HFRS)患者的血液标本,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增汉坦病毒M片断基因.22例IgM阳性患者中,从 5例患者的血凝块中扩增得到特异性PCR产物.结果:对550bp和403bp扩增产物进行的系统进化分析揭示汉坦病毒至少存在3个不同分支.W613株和W1141株与原型株HTN76-118,CUMC-B11(韩国),cl-l和cl-2(日本)同一分支;W1219株和H8205同一分支;另外两株与A9和HV114同一分支.结论:首次发现湖北地区人类汉坦病毒株与韩国和日本的HTN型具有高度序列同源性.

盐酸阿比朵尔抗呼吸道合胞病毒机制初探

目的:明确盐酸阿比朵尔抗吸道合胞病毒(RSV)Long株的活性并探讨其抗病毒机制。方法:通过细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察盐酸阿比朵尔抗RSV的作用。结果:盐酸阿比朵尔的半数毒性浓度(TD50)为85.39 mg/L,当该药浓度为25 mg/L时,药物抗病毒生物合成组、药物直接作用组、药物抗吸附4 h组、药物抗病毒吸附8 h组的病毒抑制率分别能达到81.61%,79.57%,40.39%和78.60%。4组相应的药物半数有效浓度(ED50)为11.52,8.74,25.36和10.40 mg/L。结论:盐酸阿比朵尔在体外能明显抑制RSV引起的CPE效应,病毒抑制率随药物浓度的增加而增高,盐酸阿比朵尔能通过多种途径发挥抗RSV的作用。

发热患者SARS冠状病毒抗体分析

目的了解临床发热患者中是否存在严重急性呼吸综合征（SARS）冠状病毒（SARS-CoV）隐性感染或亚临床感染。方法对2003年5月～7月，SARS流行期间湖北地区临床发热患者373例血清进行SARS冠状病毒（SARS-CoV）抗体（IgG、IgM、N蛋白抗体）酶联免疫吸附法（ELISA）检测和分子生物学（RT—PCR）检测。结果373例发热患者中，检出冠状病毒抗体阳性者24例，阳性率6．43％（24／373），其中SARSIgG抗体、IgM抗体、N蛋白抗体阳性率分别为0．54％，1．34％和5．09％，但SARS-CoVRT—PCR检测均为阴性。结论临床发热患者可能存在SARS-CoV隐性或亚临床感染，患者体内产生针对SARS-CoV的保护性抗体，应具有免疫力和抵抗力。

猪脾细胞干扰素在细胞中对疱疹病毒的抑制作用

目的:体外评价猪脾细胞干扰素抗疱疹病毒的活性,为疱疹病毒感染寻找新的治疗手段。方法:主要通过观察细胞病变效应(CPE)、噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率和病毒抑制率来评价猪脾细胞干扰素体外对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和2型(HSV-2)的抑制作用。结果:猪脾细胞干扰素对HeLa细胞的半数毒性浓度(TC50)为535.3 IU/ml,对HSV-1和HSV-2的半数有效浓度(IC50)分别为24.6×103IU/L和25.9×103IU/L,治疗指数(TI)为21.8和20.7;其抗病毒效果与人白细胞干扰素及喷昔洛韦一致。结论:猪脾细胞干扰素具有很好的体外抗疱疹病毒作用。

用新型汉坦病毒通用引物检测HFRS患者血清中病毒核酸

目的:提高汉坦病毒(HV)的检出率。方法:设计了两对新的汉坦病毒(HV)通用引物,建立新的RT-PCR方法,对流行于湖北省不同地区的肾综合征出血热(HFRS)患者血清进行了检测。结果:在对166份血清中HV RNA的检测显示HTN型阳性率为80.1%(133/166),SEO型为19.9%(33/166);对不同浓度的HV RNA检测结果显示,本法最低可检测出血清中72 pg病毒基因组。结论:说明本法用于检测HFRS患者血清中HV RNA的特异性和敏感性均很高,且我国中部地区HFRS流行以HTN为优势型,这一结果不仅为HFRS的诊断提供了新的手段,也为HFRS的防治提供了新的依据。

乙型肝炎病毒X基因真核表达的载体构建及鉴定

目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物序列分析等,鉴定所构建的真核表达载体。结果:以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知HBV X基因大小相同,酶切也得到目的基因片段,测序结果也显示与已知X基因序列相同。结论:成功构建了HBV X基因的真核表达载体,为进一步研究HBVX基因及其产物的功能奠定了基础。

牛眼眼科新糖蛋白opticin研究

目的:制备opticin特异性抗体并探讨opticin在牛眼中的分布。方法:将合成的多肽链免疫兔以获得OPT-C抗体,运用该抗体从玻璃体提取物中检测opticin,用免疫组织化学方法检测opticin在牛眼中的分布。结果:牛眼玻璃体提取物Western blot在40-50 kU可看到2个清晰可辨的分离的条带。牛眼免疫组织化学发现opticin存在于牛眼视网膜、玻璃体和睫状体无色素上皮中。结论:Opticin存在于睫状体中,支持opticin可能由睫状体无色素上皮细胞分泌这一推测。Opticin与玻璃体胶原纤维相连,可能与玻璃体结构的稳定有关。

大黄素与白藜芦醇合用抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的药效学研究

目的：探讨大黄素与白藜芦醇合用时抗疱疹病毒Ⅰ型的药效及最佳合用比。方法根据中效作用原理，采用不同比例合用大黄素与白藜芦醇，用噻唑蓝（MTT）比色法检测药物对细胞的毒性，用空斑减数试验检测药物抗疱疹病毒Ⅰ型的药效。结果在 Hep -2细胞中，大黄素与白藜芦醇均无抗病毒吸附的作用。药物直接杀灭病毒作用结果显示，当大黄素与白藜芦醇以1Dm/1Dm、2Dm/1Dm、1Dm/2Dm 比例合用时的ED50分别为1.18μg/ ml、0.653μg/ ml、7.271μg/ ml，治疗指数分别为19.502、39.386、3.653；抗病毒生物合成作用的 ED50分别为3.549μg/ ml、2.289μg/ ml、2.755μg/ ml，治疗指数分别为6.484、11.236、9.641。结论大黄素与白藜芦醇合用比两种药物单用疗效更好，治疗指数较高。而在三种合用比例中，以2Dm 大黄素/1Dm 白藜芦醇为最佳合用比。

BRCA2在散发性乳腺癌组织中的表达及意义

目的:探讨乳腺癌易感基因2(BRCA2)在散发性乳腺癌组织中的表达及意义,了解BRCA2蛋白的表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及原癌基因C-erbB-2之间的相关性。方法:采用免疫组化法(SABC)对32例乳腺癌患者癌组织、癌旁组织及正常乳腺组织中BRCA2、C-erbB-2、ER、PR蛋白的表达进行检测并结合年龄、病理组织学分级、腋淋巴结转移情况进行相关性分析。结果:BRCA2在乳腺癌组织中表达的阳性率为56%,而在癌旁及正常乳腺组织中无阳性表达(P<0.05)。BRCA2蛋白的表达在乳腺癌不同组织学分级中有差异(r=0.372 8,P<0.05);与腋下淋巴结转移之间比较差异有显著性(r=0.362 2,P<0.05),但与发病年龄、ER、PR、C-erbB-2表达之间未见相关性。结论:BRCA2蛋白的表达与组织学分级高、腋淋巴结转移相关。BRCA2蛋白的检测有可能成为评估乳腺癌生物学行为和预后的新指标。

荔枝核黄酮体外抗单纯疱疹病毒的作用

目的:探讨荔枝核黄酮类提取物(FLC)体外抗单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的作用。方法:以阿昔洛韦为阳性药物对照,以不同剂量的荔枝核黄酮类提取物分别作用于HSV-1病毒复制周期的各个环节分成3个实验组,以病毒半数感染量(TCID50)、细胞病变效应(CPE)、MTT染色细胞存活率(MTT法)作为评价指标,判断的FLC抗病毒效果。结果:FLC对HEp-2细胞的半数细胞毒浓度(TC50)为239.25 mg/L,FLC对HSV-1病毒有直接杀伤作用和抗HSV-1生物合成作用,其直接杀伤HSV-1的半数有效浓度(IC50)为32.76 mg/L,治疗指数(TI)为7.30,抗HSV-1生物合成作用的半数有效浓度(IC50)为12.72 mg/L,治疗指数(TI)为18.81。结论:荔枝核黄酮类化合物在HEp-2细胞中对单纯疱疹病毒1型有明显抑制作用。

儿科住院患者巨细胞病毒感染调查

目的通过调查住院患儿中巨细胞病毒（cytomegalovirus，CMV）感染的流行率及临床特点，探讨CMV在儿科感染中的临床意义。方法对380例儿科住院患儿的咽拭子样本采用巢式多聚酶链反应（polymerasechainreac—tion，PCR）法检测CMVDNA，微粒子酶免化学发光法定量检测血清CMVIgM和IgG，并收集相关临床资料。结果380例住院患儿中，CMV现症感染者占36．6％0。对不同年龄段CMV感染的研究结果显示，新生儿CMV感染率为60％，高度疑诊为先天性CMV感染。1～3月龄、4～6月龄、7～12月龄的CMV感染率分别为48．6％、60．0％和50．8％；1～2岁感染率为38．6％，2～3岁和3～10岁CMV感染率逐渐下降至19．3％和22．7％。在102例单纯CMV感染患儿中，除2例无症状CMV感染新生儿外，其他100例患儿均有CMV感染导致的器官损伤，表现为CMV感染性疾病。最常见的CMV感染性疾病是肺炎（35．3％）、支气管炎（33．3％）和肝炎（26．5％）。（）～6月龄组患儿CMV肝炎的发病率为55％，显著高于各年龄组患儿总发病率（P〈0．05）；新生儿的贫血发病率达50％，显著高于各年龄组患儿的总发病率（P〈0．05）。3～10岁年龄组患儿CMV感染最常见的临床表现是肺炎（52．6％）和支气管炎（57．9％），显著高于其他年龄组（P〈0．05）。结论CMV感染在儿科住院患儿中，特别是12月龄内的患儿中的流行率高，是该年龄段患儿住院治疗的主要原因之一。60％住院新生儿可能为先天性CMV感染，对新生儿应常规进行CMV感染的筛查。在住院患儿中CMV感染性疾病常见于呼吸道感染、肝炎、贫血、心肌炎、胃肠炎。0～6月龄患儿CMV感染最常见表现为肝炎，50％的CMV感染的新生儿有贫血表现。其他病原体与CMV的共感染可加重CMV导致的器官损伤。

实验性SARS-CoV灭活疫苗对恒河猴的免疫原性与安全性研究

目的 利用恒河猴评价实验性SARS冠状病毒灭活疫苗免疫原性与安全性。方法 动物免疫分3组,分别为肌肉注射0.5μg、5μg、50μg疫苗组及磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,同时设超大剂量(5000μg)观察疫苗安全性,并于初次免疫后7 d再次免疫,监测免疫前后动物体液免疫、黏膜免疫及血清细胞因子变化,观察临床症状及生化指标。结果 0.5μg和5μg剂量组可诱导部分免疫应答,50μg剂量组则能诱导针对SARS CoV的特异性免疫应答,且各免疫组动物均未出现不良反应。结论SARS CoV灭活疫苗在恒河猴体内能有效诱导针对SARS CoV感染的体液和黏膜免疫应答并且安全性较好。

新型干扰素——IFN-λ抗HIV-1感染

目的研究干扰素λ（IFN-λ）是否对HIV-1感染人巨噬细胞有抑制作用，并对可能介导IFN-λHIV-1作用的受体和辅助受体表达水平进行研究，初步探讨其抗HIV-1感染的机制。方法HIV-1毒株感染人巨噬细胞前用IFN-λ理细胞24h，感染后第4天、第8天以及第12天分别检测感染细胞上清中HIV-1逆转录酶（RT）活性和p24蛋白水平，并用实时定量PCR检测细胞上IFN-λ体、CD4、CCR5、CXCR4的表达。结果IFN-λHIV-1感染人巨噬细胞具有明显抑制作用，且此作用与乓剂量及作用时间呈正相关。但IFN-λCD4、CCR5、CXCR4的表达影响无统计学意义。结论IFN-入能有效抑制HIV-1感染人臣噬细胞，并证实这一作用是通过其受体发挥功能的。但IFN-λ介导的抗HIV-1作用不是通过CD4、CCR5、CXCR4起作用而是存在有其他的抗病毒机制。