苯甲酸雌二醇对大鼠睾丸组织发育的影响

目的:研究苯甲酸雌二醇(E2B)对雄性大鼠睾丸组织发育的影响。方法:选取新生雄性SD大鼠40只,随机均分为实验组和对照组,在生后1d分别皮下注射E2B(0.2mg/5g体重)、等体积的溶剂玉米油,分别于生后14、21、28、42、56d取睾丸并称重。测量头段及尾段生精小管管径(TD)及上皮高度(SEH),并计算头段及尾段TD/SEH比值、尾段SEH/头段SEH比值,分析生精小管内生精细胞发育状况。结果:各年龄段实验组大鼠睾丸重量显著下降(P<0.01),睾丸始终停留在腹腔。睾丸网内始终有液体潴留,从出生后21d开始,实验组大鼠头段睾丸的生精小管的TD/SEH比值明显大于对照组(P<0.01),尾段SEH/头段SEH比值也显著增加(P<0.01);实验组生精细胞发育明显迟滞于对照组(P<0.01)。结论:E2B可以造成雄性大鼠睾丸内液体潴留、隐睾,从而阻滞睾丸组织的正常发育。

Aquaporin-1在大鼠睾丸输出小管的免疫组织化学定位研究

目的 研究正常大鼠睾丸输出小管上皮细胞上Aquaporin 1(AQP 1)的定位分布以期了解其在水重吸收上的作用机制。方法 对正常Wistar大鼠睾丸输出小管进行常规免疫组织化学方法染色观察。结果 在睾丸输出小管非纤毛上皮细胞的刷状缘及基侧部AQP 1阳性表达强烈 ,核上区的胞内体的质膜上也有阳性表达 ;纤毛上皮细胞的纤毛亦呈阳性反应。结论 Aquaporin 1可能与睾丸输出小管非纤毛上皮细胞水重吸收功能有密切关系。

ICR小鼠胚胎及生后不同阶段睾丸内生殖细胞的发育

目的 :观察ICR小鼠胚胎及出生后的睾丸内生殖细胞在不同阶段的发育情况 ,了解雄性生殖细胞分化、发育和成熟的过程。方法 :采用半薄切片甲苯胺蓝染色法 ,对雄性胚胎第 13,16 ,18d和出生后第 1,3,7,10 ,15 ,19d、4 ,6周及成年 (8周 )睾丸生殖细胞进行观察。结果 :原始生殖细胞向精原细胞的演化经历了一个分散 居中 分散靠边的过程。出生后第 7d ,支持细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,原始生殖细胞出现一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,间质细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 15d ,出现初级精母细胞 ;出生后第 4周 ,产生精子细胞 ,同时间质细胞出现另一个增殖高峰并保持在一个高水平 ;出生后第 6周 ,开始有精子出现。结论 :当精原细胞大量增殖和生成精子细胞与精子时 ,生殖细胞可能需间质细胞提供大量激素相辅助 ;支持细胞在支持生精细胞、促进生精细胞转位及精子生成过程中起了一定作用。

β_1整合素在生后不同年龄阶段小鼠睾丸生精细胞分布的研究

目的 观察 β1 整合素在出生后不同年龄阶段小鼠睾丸生精细胞中的免疫组化定位。方法 用免疫组织化学观察 β1 整合素在生后 1d、4d、7d、1 1d、2周、3周、4周、5周、6周和成年昆明小鼠睾丸生精细胞中的分布。结果 出生后 1～ 1 0d的小鼠睾丸生精小管上皮细胞未见 β1 整合素的表达 ;出生后 1 1d到成年小鼠的不同年龄阶段均可检测到 β1 整合素在睾丸生精小管上皮细胞中的表达。在生后 1 1d到 4周小鼠 ,β1整合素主要表达于增殖能力旺盛的精原细胞的胞膜 ,5周后 β1整合素主要表达于精原细胞和拉长期精子细胞头部细胞膜。结论 β1 整合素是生后 1 1d～

参麦注射液对小鼠大脑皮层神经细胞损伤的影响

目的 研究缺氧 /复氧对小鼠大脑皮层神经细胞的损伤及参麦注射液的保护作用。方法 取体外原代培养 6d的小鼠大脑皮层神经细胞 ,置于 95 %N2 和 5 %CO2 的缺氧罐中造成神经细胞不同时间的缺氧 /复氧。用神经细胞存活率及神经细胞线粒体活性来评价神经细胞活力 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)释放率作为评价损伤的指标 ,并进行形态学观察。结果 原代培养小鼠大脑皮层神经细胞缺氧 6h ,再给氧 1 8h后 ,神经细胞存活率及线粒体活性明显降低 (P均 <0 .0 1 ) ,LDH释放量显著增加 (P <0 .0 1 )。结论 参麦注射液可显著对抗缺氧 /复氧致小鼠大脑皮层神经细胞的损伤 ,浓度依赖性地抑制LDH释放量的增加 ,并能减轻细胞的形态学损伤。对大脑皮层神经细胞缺氧

雌二醇对大鼠睾丸输出小管水重吸收功能的影响

目的:研究苯甲酸雌二醇(E2B)对大鼠睾丸输出小管水重吸收功能的影响。方法:选取新生雄性SD大鼠为实验对象,皮下注射E2B(0.2 mg/5 g体重),分别于出生后14、21、28、42、56 d取材;对照组大鼠皮下注射玉米油。各年龄段实验和对照组大鼠各取4只,光镜下观察睾丸输出小管的组织形态改变,并测量其上皮细胞高度的变化;透射电镜下观察上皮细胞超微结构的变化;免疫组化方法观察水通道蛋白AQP-1在睾丸输出小管上皮细胞中表达的改变。结果:与对照组相比,各年龄段实验组大鼠睾丸输出小管管腔明显扩张(P<0.05),上皮细胞高度显著下降(P<0.01),非纤毛上皮细胞微绒毛短而稀少,参与水重吸收的细胞器缺乏,不表达AQP-1。结论:E2B破坏了大鼠睾丸输出小管的水重吸收功能。

体外培养大脑皮质神经元加入淀粉样β蛋白25～35诱导细胞周期蛋白的异常表达

目的:观察加入神经毒性较强的淀粉样β蛋白25～35多肽片断诱导神经元表达细胞周期相关蛋白的变化,以及细胞周期相关蛋白表达与神经损伤之间的关系。方法:实验于2004-10/12在武汉大学医学院神经生物学实验室完成。取妊娠18d昆明小鼠,在无菌条件下分离胚脑皮质,制成单细胞悬液,在有血清培养基中培养。神经细胞进行神经元特异性烯醇化酶免疫荧光检测呈阳性后,第4天实验组加入4μL淀粉样β蛋白25～35(2g/L)继续培养,对照组加入4μL生理盐水,在第7天行免疫荧光检测,并分析细胞周期相关蛋白A和B1的表达。结果:实验组加入淀粉样β蛋白25～35继续培养3d后,神经元行细胞周期相关蛋白A和B1免疫荧光染色,神经元内分别出现蓝色颗粒(FITC荧光素标记二抗)和红色颗粒(Cy3荧光素标记二抗),即细胞周期相关蛋白A、细胞周期相关蛋白B1在神经元内呈阳性表达。对照组细胞周期相关蛋白A和B1在神经元内呈阴性表达。结论:在体外神经细胞培养过程中,加入淀粉样β蛋白25～35后,细胞周期相关蛋白A和B1在神经元内异常表达,提示淀粉样β蛋白的毒性机制中有细胞周期机制或部分机制的异常激活。

新生大鼠神经干细胞的分离培养与分化

目的 从新生SD大鼠脑室下区分离并培养神经干细胞 ,观察神经干细胞的生长、增殖及分化的特点。方法 利用无血清培养和单细胞克隆技术 ,采用原代贴壁及传代悬浮的方法 ,培养获得细胞克隆。应用免疫细胞化学方法及透射电镜检测技术 ,鉴定神经干细胞和分化的神经细胞。结果 从新生SD大鼠脑室下区分离的组织 ,经原代和传代培养均可形成细胞克隆 ,并具有增殖的能力。原代和传代细胞Nestin抗原呈阳性 ,分化后的细胞可表达NSE、GFAP、GC特异性抗原。结论 本法从新生SD大鼠脑室下区分离的细胞具有自我更新和分化潜能 ,有很强的增殖能力 。