新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

目的:构建IL-24真核表达质粒,并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其表达,用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果:pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后,LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制,G2-M期细胞比例增高,细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比,IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长,具有明显的抗肿瘤作用。

2010年湖北恩施地区和武汉地区肠道病毒71型VP1基因特征分析

目的了解湖北恩施地区和武汉地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)病原体肠道病毒71型(EV-A71)VP1的基因特征。方法收集2010年来自于恩施地区和武汉地区的78例HFMD患儿的咽拭子标本。通过标本接种病毒易感Vero细胞,对产生明显细胞病变效应的阳性标本进行初筛。利用PCR法对初筛阳性标本进行进一步鉴定,对阳性毒株VP1基因序列进行扩增,将其构建到pMD18-T载体上,最后对VP1全长序列进行测序。通过构建系统进化树分析2010年湖北恩施地区和武汉地区EV-A71病毒株的基因型,并分析探讨其与2010年中国大陆其他地区EV-A71病毒株之间的进化关系。结果从78例手足口病标本中分离得到9株EV-A71,进一步对其VP1序列进行系统进化分析发现所有EV-A71分离株均属于C4亚型。2010年恩施地区和武汉地区EV-A71病毒株与2010年中国大陆其他地区EV-A71病毒株在同一进化分支。本研究中分离自伴随震颤患者的EV-A71病毒株(wh64-CHN-10)的VP1-240位点氨基酸残基为丙氨酸,而其余分离自轻症手足口病患者的8株EV-A71病毒株的VP1-240位点为苏氨酸。结论 EV-A71是2010-2011年恩施和武汉地区手足口病的重要病原体之一,属于C4基因型,VP1-240位点的氨基酸可能影响EV-A71的毒力。

SETDB1和HDAC1抑制原型泡沫病毒转录的机制研究

目的:探究组蛋白甲基化转移酶SETDB1及组蛋白去乙酰化酶HDAC1对原型泡沫病毒(prototype foamy virus, PFV)转录的影响。方法:通过qPCR检测下调SETDB1或下调HDAC1对病毒蛋白基因mRNA表达的影响;通过Western Blot检测下调SETDB1或下调HDAC1对病毒蛋白表达的影响;通过ChIP-qPCR检测下调宿主蛋白Trim28的表达对SETDB1在PFV LTR启动子U5区域富集的影响;通过双荧光素酶报告基因实验检测抑制HDACs活性对病毒反式激活因子Tas功能的影响。结果:qPCR和Western Blot结果显示,下调SETDB1或下调HDAC1促进病毒蛋白基因gag和tas的mRNA水平及病毒蛋白Gag和Tas的表达;ChIP-qPCR结果显示,下调Trim28表达抑制SETDB1在LTR启动子U5区域的富集;双荧光素酶报告基因实验结果显示,TSA(trichostatin-A)抑制HDACs活性促进病毒反式激活因子Tas的转录激活活性。结论:SETDB1和HDAC1可负向调控原型泡沫病毒基因转录和病毒蛋白表达。

一种潜在的新肿瘤分子标志物RASSF4的研究进展

RAS相关结构域家族(RASSFs)由10个成员组成,这些家族成员已被确认为抑癌基因,可以通过多种途径调控细胞增殖、促进细胞凋亡和衰老,维持微管的稳定性、调节细胞的黏附和运动性。研究发现RASSF4在正常组织中广泛表达,而在人类肿瘤细胞中由于启动子甲基化表达下调,RASSF4还可诱导细胞凋亡,其关于信号转导途径的研究也有了一定发展。本文就其研究进展进行综述。

泡沫病毒Gag蛋白的研究进展

Gag蛋白在逆转录病毒复制周期的许多阶段中发挥重要作用。泡沫病毒基因组结构与其它逆转录病毒类似,但它们的基因组成分和生活周期存在明显差异,这在一定程度上是由其Gag蛋白的结构和功能所决定的。本文对18种不同株型的泡沫病毒gag基因序列进行进化树分析,探究不同来源的泡沫病毒的亲缘关系;并以典型的原型泡沫病毒为代表,阐述泡沫病毒Gag蛋白的结构和功能以及对病毒复制不同阶段的影响。

柯萨奇病毒与细胞自噬相互作用的研究进展

自噬是机体内一种重要的代谢过程,对维持细胞内环境稳态至关重要。自噬通常被认为是机体抵御病原微生物入侵的免疫保护机制,目前有研究表明自噬能被肠道病毒等利用以促进其自身复制。柯萨奇病毒(coxsackievirus)属于肠道病毒,是心肌炎、无菌性脑膜炎、手足口病等多种疾病的主要病原体之一。本文综述了细胞自噬与柯萨奇病毒关系的近期研究,概述了柯萨奇病毒能够诱导多种细胞自噬及其诱导自噬的不同类型,归纳了不同细胞影响柯萨奇病毒诱导自噬的不同机制,关注了自噬对不同疾病的细胞炎性反应所起的作用,以期为疾病治疗提供新思路。