DDOD综合征ATP6V1B2基因新发变异及遗传学分析

目的对一例DDOD综合征先证者进行基因突变检测和遗传学分析,探讨ATP6V1B2致病基因突变与先证者临床特征的联系,为该家系的遗传咨询提供依据。方法收集一例先天性感音神经性聋伴指骨、牙齿发育异常的先证者(女,6岁)及其父母的临床资料,提取先证者及父母的外周全血基因组DNA,采用二代测序(next-generation sequencing,NGS)法筛查先证者的潜在致病基因位点,用Sanger测序法对变异位点进行验证,用遗传学数据库资料和生物信息学分析软件对变异位点进行分析。结果二代测序和Sanger测序结果共同显示先证者存在ATP6V1B2 c.1517G>A (p.R506Q)杂合突变,其父母表型均正常且未检出相应的异常突变;遗传学数据资料和相关文献检索显示ATP6V1B2 c.1517G>A (p.R506Q)为新发突变;生物信息学软件分析显示,ATP6V1B2 c.1517G>A突变会对蛋白质的二级结构和理化性质产生一定影响,从而导致DDOD综合征者指骨和牙齿发育不全等表型异常。结论先证者ATP6V1B2 c.1517G>A (p.R506Q)为新发的致病性突变,该突变可能导致先天性聋伴甲发育不全综合征的发生。

《神经病学》教学改革初探

我院神经病学教研室根据自己多年的教学经验,在遵循现代临床发展需求是教学改革源泉的原则基础上,结合本校的实际,针对神经病学传统教学方法存在的问题进行了改革探索,取得了较好的教学效果。

日本血吸虫酚氧化酶同工酶分析

目的观察日本血吸虫成虫单酚氧化酶(monophenoloxidase,MPO)和二酚氧化酶(diphenoloxidase,DPO)的同工酶酶谱形式。方法将收集到的42d活成虫置含0.05%戊巴比妥钠的RPMI1640培养基中,23℃孵育8h,分别研磨雌、雄成虫呈匀浆,显色单酚氧化酶的样品匀浆时另加5%的TX-100。超声粉碎、低温高速离心取上清(含PO),进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析两种酚氧化酶同工酶酶谱形式。结果单酚氧化酶的同工酶酶谱与二酚氧化酶的同工酶酶谱基本一致,电泳位置相同,表现为迁移率相同的一条带,但是单酚氧化酶的酶谱谱带较二酚氧化酶的酶谱显色弱。同时,雌虫及雄虫的单酚氧化酶和二酚氧化酶亦表现为迁移率相同的一条主带;但雄虫的酶带显色反应较雌虫弱。结论日本血吸虫成虫体内酚氧化酶存在两种形式:单酚氧化酶和二酚氧化酶。而且不仅雌性虫含有酚氧化酶,雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有少量酚氧化酶的生理意义有待进一步研究。

日本血吸虫酚氧化酶抗原诱导免疫对病鼠肝脏病理变化的影响

目的 观察日本血吸虫酚氧化酶天然蛋白抗原诱导免疫对病鼠肝脏的病理变化。方法 将 4 2 d活成虫置于含 0 .0 5 %戊巴比妥钠的 RPMI 16 4 0培养基中孵育 8h后洗净 ,匀浆 ,超声粉碎、低温高速离心 ,将含酚氧化酶的上清液进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,嗣后分别在两侧切取胶宽约 1cm进行酶染色 ,解剖刀准确切下相应的未染色的凝胶。冻干后碾成粉末 ,高速电动匀浆成浆糊状 ,冷浸过夜。高速离心得上清即为日本血吸虫酚氧化酶粗抗原。设立 3组进行免疫实验 :实验组、佐剂对照组和空白对照组。初次免疫后第 2、4周 ,各重复 1次加强免疫 ,最后 1次免疫 10 d后用新鲜逸出尾蚴 (4 0± 1)条 /鼠进行攻击感染。 4 2 d剖杀动物 ,观察日本血吸虫感染小鼠肝脏的病理变化。结果 与对照组相比 ,酚氧化酶免疫实验组小鼠肝脏表面较光滑 ,隐约可见少量灰白色小点 ,肝色泽略带灰色 ,质地较软 ;压片观察小鼠肝脏内虫卵集聚数量明显减少 ,且以未成熟虫卵为主。肝脏内伴少量肝细胞坏死 ,细胞浸润不明显 ,可见较多未成熟卵周围无肉芽肿反应。小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积比对照组小鼠肝组织内虫卵肉芽肿的平均直径和面积明显减小 ,两组间差异有非常显著性 (P<0 .0 1)。结论 日本血吸虫酚氧化酶蛋白具抗原性 。