表达mFasL的新型双顺反子逆转录病毒基因转移体系的建立

为建立表达小鼠 Fas配体 (m Fas L)的内部核糖体进入位点 (IRES)串联的双顺反子新型逆转录病毒基因转移体系 ,用基因重组技术将 m Fas L c DNA基因构建到 IRES双顺反子逆转录病毒载体 (PL XIN)中 ,脂质体法将此重组质粒 PL FIN和空载体 PL XIN分别转染包装细胞 (PA317) ,经 G418筛选出抗性包装细胞克隆 ,基因组 DNA PCR测定基因整合情况。并将抗性 PA317克隆培养上清感染小鼠成纤维细胞系 (NIH3T3) ,筛选出高滴度的 PA317细胞系 ;用流式细胞术测定筛选的 NIH3T3细胞目的基因表达状况 ;以抗性 NIH3T3和 Fas+Yac- 1细胞共培养法检测目的基因的生物学活性。筛选出 12个 PL FIN转染的 PA317细胞克隆中 ,最高产毒效价为 8.5× 10 5CFU(colony- form ing- unit) ;经此上清感染、筛选出的 NIH3T3细胞 ,高表达 m Fas L (阳性率高于对照组 5 2 .5 4% ) ;且能显著诱导 Fas+Yac- 1细胞凋亡 (凋亡率高于对照组 49% )。说明成功建立了表达 m Fas L

不同时期应用胰岛素样生长因子-1对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白表达的影响

目的探讨不同时期应用胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(BCL-2)和BCL-2关联X蛋白(BAX)的影响。方法Balb/c雄性小鼠50只,随机分为对照组、柯萨奇B3病毒感染组(感染组)及病毒感染早期治疗组(0～6d)和急性期治疗组(7～13d),后2组腹腔注射外源性IGF-130μg/(kg.d),连用7d。d14处死动物,留取心肌标本,免疫组织化学法检测其心肌组织BCL-2和BAX蛋白的表达。结果与对照组和治疗组相比,感染组BCL-2表达减少,BAX表达增加(Pa<0.01);感染早期治疗组较急性期治疗组BCL-2表达明显增多、BAX表达明显减少(Pa<0.01)。结论病毒感染早期应用IGF-1对小鼠病毒性心肌炎的疗效优于急性期。

肺泡型细胞培养方法的改良及其应用

目的研究不同方法对体外培养肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响。方法采用不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微镜观察细胞生长,检测细胞活力,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞。结果两种方法消化、分离组织,肺泡型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异。结论不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡型上皮细胞功能的需要,从而简化了体外培养肺泡型上皮细胞的程序。