双歧杆菌在儿童口腔中的分离及其分子生物学鉴定

目的：通过分离鉴定不同患龋情况儿童口腔中双歧杆菌的存在情况，奠定研究口腔双歧杆菌与儿童龋病发生关系的基础。方法：选取18例3-6岁高龋患儿为实验组，15例3-6岁无龋健康儿童为对照组，采集两组儿童龈上混合菌斑和口内非刺激性唾液，采用双歧杆菌特异性选择培养基对其进行专性厌氧分离培养；采用双歧杆菌特异性引物对培养后形成的单菌落进行分子生物学鉴定。结果：双歧杆菌特异性选择培养基上形成典型菌落，部分菌落通过革兰氏染色后光镜观察可见典型的Y或V状分又，也有棍棒状和匙状；实验组双歧杆菌检出率为83．3％，对照组检出率为0，两组双歧杆菌检出率的差异有统计学意义（P〈0．05）；实验组检出双歧杆菌的样本中通过随机挑取单菌落行PER扩增后测序，其结果为：实验组菌斑60个菌落中齿双歧杆菌占83.3％、殊形双歧杆菌占10％、栖牙双歧杆菌占6．7％；唾液样本60个菌落中齿双歧杆菌占90．0％、殊形双歧杆菌占6．7％、栖牙双歧杆菌占3-3％。结论：高龋儿童双歧杆菌的检出率均高于无龋儿童；口腔双歧杆菌中含有的菌种主要为齿双歧杆菌、殊形双歧杆菌、栖牙双歧杆菌；齿双歧杆菌在口腔双歧杆菌中所占比例最大，是高龋儿童口腔中的活跃菌种。

牙龈卟啉单胞菌对人滋养层细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测牙龈卟啉单胞菌感染对人胎盘滋养层细胞(HTR-8细胞)增殖以及凋亡的影响。方法:用不同感染复数(MOI)的牙龈卟啉单胞菌体标准菌ATCC 33277体外感染HTR-8细胞,未感染牙龈卟啉单胞菌的HTR-8细胞作为空白对照组。感染后,用Cell Counting Kit(cck-8)检测HTR-8细胞增殖情况,用线粒体膜电位凋亡检测试剂(JC-1)检测HTR-8细胞凋亡情况。结果:MOI=10组,感染72h内,HTR-8细胞增殖未受抑制(P>0.05)。而MOI=100组和MOI=200组,感染24h开始,HTR-8细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。并且与MOI=100组相比,MOI=200组在感染48h(P<0.05)和72h(P<0.01)时,HTR-8细胞增殖明显降低。牙龈卟啉单胞菌感染24h,MOI=200组HTR-8细胞凋亡率显著高于空白对照组(P<0.01)。感染48h,MOI=100组HTR-8细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。MOI=10组在感染24h和48h时细胞凋亡率与空白对照组相比差异无统计学意义。结论:在体外感染模型中,牙龈卟啉单胞菌标准菌ATCC 33277感染可抑制滋养层细胞增殖,且促进其凋亡。提示早产低体重儿与牙龈卟啉单胞菌感染引起滋养层细胞增殖和凋亡失衡有关。

舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞耐药性研究

目的:探讨舌鳞状细胞癌中肿瘤干细胞对化疗的耐受作用。方法:用磁珠分选技术、细胞免疫荧光染色和药物毒性试验等方法,研究经分选后得到的肿瘤干细胞和阴性细胞在化疗药物作用后其细胞增殖活性的差异。结果:细胞免疫荧光结果显示,CD133和CD44在分选出来的CD133+/CD44+细胞高表达而在CD133-/CD44-细胞基本不表达。CCK8实验结果显示分选出来的CD133+/CD44+细胞较CD133-/CD44-细胞在化疗药物作用下有更高的细胞成活率。结论:经磁珠分选出来的舌癌肿瘤干细胞(CD133+/CD44+细胞)更能耐受化疗药物的作用。

雌激素缺乏对大鼠根尖周炎病变区TLR4表达的影响

目的:探究雌激素缺乏对大鼠根尖周炎病变区TLR4表达的影响。方法:30只大鼠随机分为两组:OVX组、SHAM组,暴露下颌第一磨牙髓腔,分别于开髓后0、7、14、21d处死大鼠。HE染色、酶组织化学染色、免疫组织化学法观测根尖周组织骨吸收范围,破骨细胞数及TLR4的表达。结果:与SHAM组相比,OVX组根尖周炎病变区骨吸收范围增大、破骨细胞数升高、TLR4的表达增强。结论:雌激素缺乏可增强大鼠根尖周炎病变区TLR4的表达。

p-Akt对牙龈卟啉单胞菌诱导的人胚胎滋养层细胞凋亡的影响

目的:探讨牙龈卟啉单胞菌对胚胎滋养层细胞的影响及p-Akt在此过程中的作用。方法:牙龈卟啉单胞菌ATCC33277(Porphyromonas gingivalis)以感染复数(MOI)为200∶1与人胚胎滋养层细胞(HTR-8)共培养,以单纯培养人胚胎滋养层细胞为对照组;采用siRNA失活PI3K;选择倒置显微镜和共聚焦显微镜记录人胚胎滋养层细胞的形态变化;采用流式细胞术检测感染后人胚胎滋养层细胞凋亡的情况;用Real Time-PCR检测PI3K siRNA敲低的效果。结果:牙龈卟啉单胞菌感染人胚胎滋养层细胞12h时,细胞的凋亡率与正常组相比无统计学意义;感染24h时,细胞凋亡明显增多(P<0.01);感染48h时,细胞凋亡与对照组相比更为明显(P<0.001)。siRNA预先处理HTR-8细胞再与牙龈卟啉单胞菌共培养48h后,siRNA处理组的PI3K mRNA的相对量明显低于干扰组(P<0.01);同时,细胞凋亡率>45%,明显高于单纯感染牙龈卟啉单胞菌组(P<0.01),而干扰组的细胞凋亡率与单纯刺激组相比无统计学差异。结论:牙龈卟啉单胞菌能够诱导胚胎滋养层细胞发生凋亡。在此过程中,p-Akt被激活,并对凋亡有一定的抑制作用。提示,牙周炎促使早产低体重儿的娩出与牙龈卟啉单胞菌诱导胚胎滋养层细胞凋亡有关。