脂肪来源干细胞对cyclin-D1、c-myc、p53、ATM和γ-H2AX蛋白在辐射诱发胸腺损伤修复中的影响

目的:明确脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)在辐射诱发的C57小鼠胸腺瘤的形成过程中是否通过增强DNA损伤修复功能进而影响辐射诱导胸腺瘤的形成。方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组8只,仅以假照射;照射组8只,采用深部X射线治疗机照射;照射+ADSCs组8只,收集转染EGFP表达质粒48h后的ADSCs,将ADSCs的浓度调整为2.0×106个/mL,取0.5mL经尾静脉注射入末次照射后第1天的胸腺瘤模型小鼠;假照射+ADSCs组8只,ADSCs的注射方法同照射+ADSCs组。末次照射第7天后分别处死4组小鼠,各组小鼠胸腺组织中的细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、p53、c-myc、毛细血管共济失调突变期(ATM)和γ-H2AX蛋白水平采用Western blot进行检测。结果:照射组小鼠胸腺组织中ATM、γ-H2AX、cyclin-D1和c-myc水平高于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,而p53水平低于照射+ADSCs组小鼠胸腺组织,且差异有统计学意义(P<0.05)。通过流式细胞术检测,照射组小鼠胸腺G1期细胞的百分比相比于对照组明显降低(P<0.05),而照射+ADSCs组小鼠胸腺G1细胞的百分比较照射组增多。结论:ADSCs可能通过减轻DNA损伤程度,减少p53和c-myc蛋白的表达,使细胞G1期增加,并阻滞在G1期,修复胸腺细胞的DNA,抑制肿瘤的形成。

脂肪干细胞对肺部气道疾病的治疗作用

目的 探讨脂肪干细胞对肺部气道疾病的治疗作用.方法 选取自愿接受研究的志愿者共20例(治疗组),抽取脂肪组织并培养脂肪干细胞,注入大鼠体内;对比空白对照组各项指标(对照组).结果 细胞接种首日为静止期,之后为对数生长期,4～5d阶段达到顶峰,之后进入平台期,P5、P10、P15代细胞生长速度无统计学差异,P＞0.05.空白对照组治疗前后W/D水平无明显变化,治疗组治疗前W/D明显高于对照组同期,治疗后明显较治疗前得到改善(P＜0.05),且与同期对照组无明显差异,P＞0.05.治疗组治疗前eNOS蛋白含量54±0.02,明显高于对照组同期(P＜0.05),治疗后明显较治疗前得到改善(P＜0.05),且与同期对照组无明显差异(P＞0.05).结论 脂肪干细胞的培养移植利于降低肺湿/干重比、提升肺组织eNOS蛋白含量,可促进肺部、气道组织修复,在肺部气道疾病治疗中有广阔应用前景.

ADSCs对辐射诱发C57小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其机制

目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分别处死4组小鼠,计算小鼠胸腺指数。刀豆素A(ConA)诱导的胸腺淋巴细胞转化率采用MTY法测定,运用流式细胞仪检测胸腺淋巴细胞的细胞周期以及T淋巴细胞亚群的变化。结果:照射+ADSCs组相对于照射组小鼠的胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数显著增高(P<0.05),并且CD4+T淋巴细胞的含量显著增加(P<0.05),CD8+T淋巴细胞明显下降(P<0.05),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P<0.05)。结论:ADSCs可能通过调节小鼠胸腺内细胞水平的变化,保护小鼠胸腺细胞的免疫功能。

脂肪干细胞的免疫学性质分析

目的分析脂肪干细胞的免疫学性质分析。方法选取5名符合抽脂要求的健康志愿者,抽取25g脂肪组织并培养,以流式细胞术查看目标细胞分化群表面抗原与人体组织相容性抗原表达特点,并观察淋巴细胞、异体脂肪干细胞共同培养下增殖情况。结果脂肪干细胞表面CA29、CD40、CD90与组织相容性抗原Ⅰ均可阳性表达,CD31、CD34、CD45与组织相容性抗原Ⅱ均阴性表达;对照组平均CPM值为1805±152,研究组平均CPM水平为1811±164,两组平均CPM对比无统计学差异,P>0.05。结论脂肪干细胞无内皮细胞、造血系统污染问题,异体脂肪干细胞并未诱发淋巴细胞增殖,表明脂肪干细胞排斥反应小,可尝试应用于组织工程、细胞治疗工作的主要同种异体细胞应用。

ADSCs抑制辐射诱生胸腺瘤的作用分析

目的:探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)对辐射诱导形成胸腺瘤的影响。方法:清洁级C57BL/6小鼠160只随机分为4组:假照射组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各40只,末次照射后第1、3、7、14天后分别处死4组小鼠,荧光显微镜下观察ADSCs在胸腺瘤组织中的定位;末次照射第1、7、14、21、28天及6个月后分别处死4组小鼠,石蜡包埋HE染色观察胸腺组织的病理变化,并行免疫组化分析。结果:照射组小鼠胸腺瘤的发生率(75%,12/16)明显高于ADSCs注射组(20%,3/15)(P<0.05)。在X线照射后第7天和6个月后,照射组和照射+ADSCs组胸腺组织中CD31染色阳性的血管管状结构及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数较假照射组和假照射+ADSCs组明显增多,并且照射+ADSCs组小鼠胸腺组织的PCNA阳性细胞数相对于照射组小鼠胸腺组织较低(P<0.05)。结论:本实验成功建立辐射诱发的小鼠胸腺瘤模型。ADSCs具有保护胸腺辐射损伤,抑制辐射诱发胸腺瘤的作用。

脂肪干细胞修复辐射诱导的肠血管损伤实验室研究

目的观察脂肪干细胞修复辐射诱导的肠血管损伤实验室研究。方法取辐射相关肠血管损伤患者脂肪组织以酶消化法处理后获取ADSCs,免疫荧光标记并体外培养、扩增后,注射至肠血管内,观察60d后肠血管修复情况,并分析体外培养、诱导下免疫荧光、流式细胞仪检测,并予以RT-PCR检测。结果诱导后肠血管特异标记Calponin、MHC、α-SMA,细胞核为红色荧光,细肌丝阳性表达可见绿色荧光。脂肪干细胞诱导后Calponin、MHC、α-SMA阳性表达率分别为39.26±2.54%、45.42±5.12%、48.22±4.48%,均相比诱导前阶段有明显差异(P<0.05)。脂肪干细胞Calponin、MHC、α-SMA、SM-22αm RNA诱导后均发现相应m RNA表达。脂肪干细胞诱导情况下受损肠血管修复70%占比为100%,明显优于无诱导组(P<0.05)。结论脂肪干细胞适当培养、诱导下可促进血管平滑及修复,利于消除血管损伤。