面向创新人才培养的基础医学实验教学模式的探索

武汉大学基础医学实验教学中心深化实验教学改革,推动中心自我建设的思路与实践总结。通过实验教学管理体系调整、实验教学理念更新和实验教学模式改进,改善了实验教学环境,加强了实验教学队伍建设,最终促进了实验教学质量的提高。中心对实验教学在医学人才培养环节中不可或缺的作用和意义进行了有益的探索。

武汉大学校园环境整治

东湖之滨,珞珈山麓,武汉大学风景秀丽,具有天造地设的灵气。湖水荡漾,植被茂盛,四季鸟语花香,校园充满特色与活力,是莘莘学子放飞梦想的理想园地。1938年来过武汉大学的郭沫若,在其回忆录《洪波曲》中,把珞珈山校园誉为武汉三镇的“物外桃源”。然而,武汉大学“流风甚美”的校园,一度出现的环境状况,与其美誉形成巨大的反差。

基础医学专业科研轮转实习方法初探及思考——以《机能学》站点为例

以《机能学》站点为例,探究实验室轮转方法和效果,为基础医学专业学生选择研究方向及导师做好准备。方法 选取2020级武汉大学基础医学专业学生利用课余时间进行实验室轮转学习,应用调查问卷和出站考核探究《机能学》站点教学效果。结果 所有学生都认为实验室轮转很重要,几乎所有人表示其有利于培养学生科研综合能力,但大部分人认为此次轮转时间设置过于碎片化,且轮转时间偏短。结论 实验室轮转教学方法值得进一步推行,但其时间设置方面尚需进一步优化。

混合式案例教学模式下的《药理学》教学改革对医学生创新能力的影响

探究基于混合式案例教学模式下的《药理学》教学改革对医学生创新能力的影响,为设置教学计划、开展教学实践提供指导。方法 选取武汉大学2016级临床医学专业(八年制、5+3及五年制)学生,采用混合式案例教学模式进行教学,在学期前、末进行关于创新能力的问卷调查,分析学生创新能力的变化。结果 教学改革后,学生评估、控制并避免风险的能力提高,随机应变能力有所改善,且学生独立思考能力提高,并能提出独特性的想法。结论 混合式案例教学模式有利于培养学生的自主学习、独立思考能力,开拓学生的思维,提高学生创新能力。

主动脉夹层法医学伤病关系35例案例回顾分析

目的 通过案例分析不同原因导致的主动脉夹层(aortic dissection, AD)特征,为AD的法医学鉴定案例提供鉴定思路。方法 收集35例AD的法医学鉴定案例(包括32例死亡鉴定,3例法医临床鉴定),对被鉴定人的外伤史、年龄、性别、发病经过、医疗过程、尸体解剖、病理检验等进行分类分析。结果 35例AD案件中患者平均年龄为47岁,男性居多(32例);涉及外伤的案件13例,其中交通事故最多(8例);被鉴定人首发症状主要为胸痛或呼吸困难(18例),余依次为腹痛或呕吐(8例)、头晕或头痛(3例)、意识丧失(4例)、腰痛或下肢不适(2例);97%(31例)的被鉴定人在急性期死亡;27例合并高血压或心脏肥大,24例合并动脉粥样硬化症。结论 法医鉴定创伤性AD案件时应进行伤病关系分析,先检查被鉴定人的自身基础疾病,再评估外伤的作用力,最后考虑医疗等中介因素对死亡或损伤的影响。

医学研究生思维模式升维分析及教学方法研究

医学研究生毕业后将面临日益复杂的生存环境,二元思维使得他们无法很好地面对未来的挑战,迫切需要进行思维模式升维。本文通过分析了二元思维中的简化思维、技术思维和牛顿思维,三元思维中的批判思维、成长思维和管理思维,多元思维中的复杂思维、悖论思维、灰度思维和量子思维,期待对教学方法研究来促进医学研究生高阶思维的形成和固化。

基于“学生画像”和“微媒体”的课程教学模式研究——以“医学免疫学”为例

学生画像可以实现对学生分类管理的作用,精准判断学生知识需求和研究兴趣。微媒体是以腾讯课堂、QQ、微信等社交软件传播信息和知识的媒体,其优势为内容简单易懂、互动性强、传播速度快、影响力广等。在医学免疫学授课过程中,通过学生画像的构建,精准分析学生知识需求,分类管理学生研究兴趣,并通过微媒体等教学方法快速传播知识,取得了良好的授课效果,全面提升了医学免疫学的教学质量。

组织育人背景下医学专业研究生会组织建设与管理的思考

近年来,随着高等教育的不断深化改革与发展,我院研究生规模也逐渐扩大,如何做好研究生思想价值引领、培养研究生的全面成才成为关键。作为高校基层学生组织的重要组成部分,研究生会在思想教育、带头引领、校园文化建设以及学生管理方面都有着举足轻重的作用。本文是基于组织育人背景下,通过对比医学专业与其他专业的区别,分析医学专业研究生会存在的问题与不足,最后提出对研究生会组织建设与管理的建议。

过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型的建立

为构建稳定表达人源TLR2分子的B淋巴细胞系模型,将编码人TLR1、TLR2和TLR6的基因分别克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-puro慢病毒载体上,测序正确后经293T细胞包装成完整具备感染性的病毒颗粒,转染Nalm-6细胞(TLR2^(-)),嘌呤霉素筛选获得稳定表达TLR2分子的Nalm-6细胞(TLR2^(+))。利用倒置荧光显微镜观察细胞状态和绿色荧光表达情况,通过蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测相关蛋白表达水平,采用CCK-8以及流式细胞术检测细胞存活率和细胞增殖水平。结果显示:倒置荧光显微镜下可见成功转染慢病毒的Nalm-6细胞表达绿色荧光和嘌呤霉素抗性。Western Blot检测到TLR2在Nalm-6细胞中成功表达,且TLR2信号的激活明显增强PI3K-AKT信号轴分子的磷酸化水平。CCK-8和流式细胞术发现TLR2活化可提升细胞存活率,促进细胞增殖。研究成功构建了过表达TLR2分子的B淋巴细胞系模型,并在此基础上验证TLR2活化不仅能够增强B细胞PI3K-AKT信号通路传导,还可促进细胞增殖。此模型为进一步探究TLR2通路对B细胞抗感染免疫功能的影响奠定基础。

基础医学专业国际化教育现状分析与思考

在高等教育国际化背景下,拥有全球胜任力的基础医学人才的培养至关重要。通过对武汉大学基础医学院2016—2022级基础医学专业学生国际化教育的现状进行分析,发现基础医学生对国际化教育有较为积极的态度,然而,在国际化教育实现的过程中,存在学生外语能力不足和家庭经济能力不够两个主要影响因素。根据调查中的相关数据,探索背后的原因以及基础医学专业国际化人才培养的方法和途径,为医学院校做好国际化教育工作提供更全面、更高质量的参考。

CYP2C9对肝细胞癌的迁移、侵袭和增殖的影响

目的探究CYP2C9是否参与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生发展及其对肝癌细胞迁移、侵袭和增殖的影响。方法从TCGA数据库中提取HCC的转录组数据,分析CYP2C9在HCC中的表达和预后相关性;构建HepG2和MHCC97H的CYP2C9稳定过表达细胞系,通过Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验和Western Blot实验分别检测过表达CYP2C9对肝癌细胞系迁移、侵袭能力以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响;通过CCK-8实验、平板克隆形成实验和Western Blot实验检测过表达CYP2C9对肝癌细胞系增殖能力的影响。结果通过生信分析发现,CYP2C9在HCC中的表达显著下调,且CYP2C9的表达与HCC患者的临床预后呈正相关;细胞及分子实验结果显示,过表达CYP2C9显著抑制HepG2细胞和MHCC97H细胞的迁移、侵袭能力和EMT过程,而对细胞的增殖能力没有显著影响。结论CYP2C9可能通过抑制肝癌细胞的迁移、侵袭以及EMT过程,进而影响HCC的进展。

茶黄素对ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化和氧化应激的影响

[目的]探索茶黄素对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化和氧化应激的影响及机制。[方法]使用50μmol/L茶黄素、10μmol/L核因子E2相关因子2(NRF2)抑制剂ML385预处理THP-1来源的巨噬细胞,随后加入100 mg/L ox-LDL刺激细胞24 h建立泡沫细胞模型。通过CCK-8法和LDH释放量检测茶黄素对THP-1巨噬细胞活力的影响。通过RT-qPCR和Western blot检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;ELISA法检测炎症因子的释放。采用油红O染色检测细胞内脂质积累,DiL标记氧化型低密度脂蛋白(DiL-ox-LDL)染色检测脂质摄取,DCFH-DA探针检测活性氧(ROS)水平。通过Western blot和RT-qPCR检测脂质摄取、胆固醇外排及氧化应激相关蛋白的表达。[结果]经100 mg/L的ox-LDL处理,THP-1巨噬细胞活力明显降低,脂质摄取、积累明显增加,脂质摄取相关蛋白表达增加,胆固醇外排相关蛋白表达明显减少,炎症与ROS水平明显增加,髓过氧化物酶(MPO)和NADPH氧化酶2(NOX2)表达增加(P<0.05);加入茶黄素后,细胞活力升高,细胞内脂质积累明显减少,脂质摄取相关蛋白的表达明显减少,胆固醇外排相关蛋白表达明显增多,炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的表达与释放明显降低,ROS水平降低,MPO与NOX2表达减少(P<0.05)。茶黄素预处理改变了NRF2信号通路中NRF2、血红素加氧酶1(HO-1)、Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)的表达,增加了NRF2核易位,减缓了细胞内氧化应激。ML385预处理细胞后,NRF2、HO-1、KEAP1和CD36蛋白表达水平明显降低。[结论]茶黄素可以显著抑制THP-1巨噬细胞泡沫化,抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞炎症并通过NRF2/HO-1信号通路减缓了氧化应激。

单克隆抗体在耐多药细菌感染治疗中的研究进展

在新型冠状病毒感染大流行时期,世界卫生组织发布指南提出,除非临床怀疑有细菌感染,否则不建议对疑似或确诊的轻度新型冠状病毒感染患者使用抗生素。然而,最近有统计学研究指出,感染新冠病毒的患者使用非必需抗生素的比例非常高,导致了大量细菌产生耐药性,造成众多生命的死亡和巨大的经济损失,针对耐药菌引发的疾病治疗问题,抗生素的作用越发局限,成为了后疫情时代紧迫的社会性问题。近年来,随着生物技术的进步以及肿瘤研究领域中单抗药的广泛应用,耐多药细菌感染治疗的单克隆抗体开发逐渐受到重视,目前在实验室内的研究已经取得了一定进展,部分产品的临床试验也取得了良好的结果,但在临床上还未实现广泛应用。本文综述了目前抗菌性单克隆抗体的类型、优势、相关临床试验的研究进展,并对未来的发展和挑战进行了展望。

基于转录组分析揭示斑马鱼elov4b在LC-PUFAs生物合成过程中的作用

为探究脂肪酸延长酶4b(elovl4b)基因在淡水鱼长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFAs)合成中的作用机制,研究首先使用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated systems)系统成功构建elovl4b基因第2外显子上缺失2个碱基的基因突变纯合子模型(elovl4b^(-/-)),并分析elovl4b基因敲除后斑马鱼肝脏的脂肪酸组成变化。分析发现,相比于野生型(WT)斑马鱼,elovl4b^(-/-)斑马鱼肝脏总脂肪酸占比、C22PUFA占比显著上升,多种LC-PUFAs组成占比出现显著变化。进一步进行斑马鱼肝脏的转录组测序,创建基因文库,筛选出差异表达基因进行富集分析和数据库功能注释分析,用qPCR技术对KEGG通路中的差异表达基因(P<0.05)进行验证。结果显示,基因表达谱变化显著,共有809个基因表达出现显著性差异(485个下调,324个上调),包括磷酸戊糖途径在内的多条通路显著富集。脂肪酸合成等通路显著上调,花生四烯酸代谢、初级胆汁酸合成等通路显著下调。随机选取12条基因通过qPCR(Real-time Quantitative PCR)进行验证,基因的表达趋势与转录组测序所得结果基本一致。上述结果说明elovl4b缺失后,机体内各类LC-PUFAs的组成及包括花生四烯酸代谢、脂肪酸代谢、脂肪生成和代谢在内的许多重要的机体生命过程发生了相应性的变化,进一步揭示了elovl4b在LC-PUFAs合成过程中的作用,能为相关的心血管、慢性肥胖等疾病的治疗提供理论依据。

小鼠睾丸特异表达蛋白GM1142抗体制备与应用

目的制备睾丸特异性表达蛋白GM1142的多克隆抗体,研究其小鼠睾丸组织的表达与定位情况,为进一步探究其在精子发生中的功能奠定基础。方法通过生物信息学分析选取小鼠GM1142 N端1-153个氨基酸为抗原肽,通过分子克隆技术构建重组原核表达载体pET42b-T7-GM1142N153-8×His,诱导表达后纯化并用以免疫新西兰大白兔和小鼠制备GM1142的多克隆抗体。蛋白免疫印迹和免疫荧光染色检测GM1142在小鼠各组织、不同发育时期的睾丸、以及睾丸中各细胞类型中的表达与定位特征。结果GM1142在睾丸中特异性高表达;免疫荧光染色结果显示GM1142在小鼠精原细胞和早期精母细胞的胞质中呈现强荧光信号。结论GM1142在睾丸中特异性高表达并可能在精原细胞发育和精母细胞减数分裂中具有重要作用。

几种重组腺相关病毒亚型载体对小鼠睾丸细胞感染和外源基因表达的特性研究

目的评估几种重组腺相关病毒载体rAAV1、rAAV2、rAAV2/8和rAAV6对小鼠睾丸细胞的感染特性。方法使用HEK293T细胞进行rAAV包装制备病毒颗粒,经生精小管内注射或睾丸间质注射给小鼠睾丸接种病毒,术后第7天用颈椎脱臼法处死小鼠,取睾丸制作冰冻切片,通过免疫荧光染色检测和评估重组腺相关病毒载体对睾丸细胞的感染情况和外源蛋白表达情况。结果rAAV1、rAAV2、rAAV6三种亚型均可感染支持细胞和生殖细胞,rAAV2对支持细胞感染能力更强,rAAV2/8在经生精小管接种病毒时特异地感染支持细胞,在经间质接种时特异性感染间质细胞。结论rAAV1、rAAV6在睾丸细胞感染中并未表现出明显的偏好性;rAAV2在可以感染生殖细胞和支持细胞的同时表现出对支持细胞的偏好性;rAAV2/8无法穿越血睾屏障,在经生精小管接种时特异性感染支持细胞,在经间质接种时特异性感染间质细胞。

布地奈德联合肺表面活性物质治疗新生儿胎粪吸入综合征有效性与安全性的系统评价

目的系统评价布地奈德联合肺表面活性物质(PS)治疗新生儿胎粪吸入综合征(MAS)的有效性与安全性。方法计算机检索PubMed、Cochrane Central Register of Controlled Trials(Central)、Embase、Web of Science、SinoMed、VIP、WanFang Data和CNKI数据库,搜集关于布地奈德联合PS治疗新生儿MAS的随机对照试验(RCT),检索时限均从建库至2023年9月2日。由2位研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后,采用RevMan 5.4软件进行Meta分析。结果共纳入6个RCT,包括544例患儿。Meta分析结果显示,与单用PS相比,布地奈德联合PS治疗患儿的总有效率较高[RR=1.29,95%CI(1.17,1.41),P<0.001]、住院时间较短[MD=-6.35,95%CI(-9.25,-3.46),P<0.001]、吸氧时间较短[MD=-1.61,95%CI(-2.23,-0.98),P<0.001]、呼吸机使用时间较短[MD=-26.46,95%CI(-35.98,-16.95),P<0.001],治疗后各时段患儿的血气分析指标均改善(P<0.05);布地奈德联合PS组患儿总并发症及不良反应发生率明显低于单用PS组[RR=0.35,95%CI(0.25,0.47),P<0.001]。亚组分析显示,布地奈德联合PS组患儿的持续肺动脉高压(PPHN)发生率[RR=0.38,95%CI(0.19,0.74),P=0.004]、肺出血发生率[RR=0.26,95%CI(0.10,0.69),P=0.007]均低于单用PS组;两组心力衰竭、败血症发生率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论当前证据显示,布地奈德联合PS治疗新生儿MAS可改善患儿的症状、体征、血气分析指标,加快病情康复,缩短病程,有助于降低并发症、PPHN、肺出血的发生风险,而不会增加心力衰竭、败血症的发生风险。但受纳入研究数量的限制,上述结论尚需更多高质量、大样本的RCT予以验证。

Hepatology|小鼠肝细胞限制HBV感染的分子机制

2023年4月,病毒学国家重点实验室/武汉大学泰康医学院(基础医学院)医学病毒学研究所夏宇尘教授团队系统性地探究了HBV在小鼠肝细胞中的感染过程。在实验方法上,该研究构建了多种稳定表达人源牛磺胆酸钠共转移多肽(hNTCP)的人及小鼠肝细胞,并进行了HBV及其卫星病毒HDV的感染;体外合成了HBV前基因组RNA(pgRNA)、共价闭合环状DNA(cccDNA)及不同形式的松弛环状不完全双链DNA(rcDNA)修复中间体;采用DNA体外修复体系及小鼠高压尾静脉注射模型探究了rcDNA修复形成cccDNA的能力;通过Southern blotting及原位杂交技术对感染过程中HBV DNA的形式及定位进行了检测。实验结果表明,HDV可以在表达hNTCP的小鼠肝细胞中建立感染,而HBV不能;pgRNA转染人肝细胞可以建立HBV感染,转染小鼠肝细胞则不能;HBV复制型质粒、cccDNA及重组cccDNA可以在小鼠肝细胞中进行转录;小鼠肝细胞支持不同形式的rcDNA修复中间体修复形成cccDNA;rcDNA可以被转运至小鼠肝细胞核;核酸酶敏感实验中小鼠肝细胞质中的蛋白结合rcDNA表现出完全的耐受性,这与在人肝细胞中有明显差异。

免疫分子的糖基化修饰与重要感染性疾病

蛋白质糖基化是最常见的蛋白质翻译后修饰(post-translational modification,PTM)之一,其广泛存在于生命体中。真核细胞中,糖基化修饰对蛋白质的折叠、构象、分布、稳定性和活性具有重要的影响。研究表明,糖蛋白的糖链对于维持多细胞生物所有分化细胞间相互作用的秩序至关重要。蛋白质糖基化的功能障碍可能导致疾病的发生和感染性疾病的发展。迄今已有许多蛋白质的N/O-聚糖改变被确定为肿瘤和某些传染性疾病发展的生物标志物。因此,本文针对B细胞受体(B-cell receptor,BCR)、T细胞受体(T-cell receptor,TCR)、细胞因子(cytokines,CK)、补体(complement)和免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)等主要的免疫分子的糖基化修饰,以及相关糖基化修饰与传染性疾病之间的关系进行综述,旨在阐释免疫分子的糖基化与传染性疾病之间的关联,为治疗感染性疾病提供新思路和策略。

LAMC2通过PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨层粘连蛋白γ2(LAMC2)通过PI3K/Akt对胃癌细胞增殖的影响。方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)及基因表达综合数据库(GEO)联合分析胃癌中与细胞增殖相关差异基因,根据差异倍数确定候选基因LAMC2。UALCAN及Kaplan-Meier plotter在线数据库分析LAMC2在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系,采用蛋白印迹(Western blot)法检测人胃癌细胞株(HGC-27、NCI-N87、SNU-1)中LAMC2的表达。构建LAMC2敲减胃癌细胞模型,Western blot检测LAMC2的表达,确定模型构建效果。将HGC-27及NCI-N87细胞分成空白对照(Control)组、阴性对照(si-NC)组及LAMC2敲减(si-LAMC2)组,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine, EdU)及平板克隆实验分析细胞增殖及克隆形成能力,Western blot检测细胞增殖蛋白(CyclinD1、PCNA、c-Myc)表达及PI3K/Akt通路激活情况。结果 LAMC2是胃癌中与细胞增殖相关的差异倍数最大的差异基因,其在胃癌中的表达显著上调,与胃癌的分期、分级及生存等临床病理相关。LAMC2在人胃癌细胞(HGC-27、NCI-N87、SNU-1)中的表达均显著高于GES-1细胞(均P<0.01)。与si-NC组比较,si-LAMC2显著抑制HGC-27及NCI-N87细胞增殖,降低细胞克隆形成率(P<0.01),细胞增殖蛋白(CyclinD1、PCNA及c-Myc)表达均被显著降低(均P<0.01),PI3Kp85及Akt磷酸化水平均被显著下调(均P<0.01)。结论 LAMC2在胃癌中的表达上调,与胃癌的分期、分级及生存等临床病理相关,其可通过激活PI3K/Akt通路促进细胞增殖。