武汉东湖水体中病毒和指示细菌的研究

本文报导了武汉东湖水体中病毒和指示细菌存在的水平。研究结果表明东湖水体中病原体污染严重。所检测的56个样品中,有24个样品检出病毒,检出率为42.8%.含量范围为0～167.5Pfu/L,平均为4.97Pfu/L.已鉴定出的病毒有脊髓灰质炎病毒,柯萨奇 B 组病毒和腺病毒。由于东湖水体的病毒和细菌严重污染,它已影响了作为饮用水水源和旅游用水的功能。

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白，经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实，表达产物既能发射易于检测的绿色荧光，又具有ＨＣＶ的抗原活性，实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原，为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．

伪狂犬病毒蛋白激酶基因的PCR扩增及其克隆鉴定

以ＢＨＫ－２１细胞单层上增殖的伪狂犬病毒（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ），经离心浓缩后，用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ消化法分离纯化ＰＲＶ基因组ＤＮＡ。参照ＰＲＶＫａ株和ＮＩＡ－３株蛋白激酶（ＰＫ）基因的ＤＮＡ序列，设计并合成了一对长度为２６ｂｐ和３２ｂｐ的引物，以纯化的ＰＲＶ基因组ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术成功地扩增出我国伪狂犬病毒地方株的ＰＫ基因，并将它克隆于ｐＵＣ１９载体。酶切分析结果表明，所获ＰＫ基因克隆在ＰｓｔＩ、ＳｍａＩ、ＸｈｏＩ和ＳａｌＩ上的切点与ＰＲＶＮＩＡ－３株相同。为下一步进行ＰＫ基因的体外缺失和重组，以构建减毒的ＰＫ缺失疫苗株奠定了基础。

蓖麻蚕蛹卵巢细胞的离体培养及其病毒感染试验

本文采用不同的培养液在体外培养蓖麻蚕蛹卵巢细胞,比较观察细胞生长,发现这些细胞能连续传代。开始细胞生长相当慢,13代以后,生长加快,趋于稳定。并且发现这些细胞对蓖麻蚕核型多角体病毒十分敏感。

猪瘟病毒的分子免疫学研究进展

猪瘟病毒的分子免疫学研究进展王宁朱燕张楚瑜（武汉大学生科院病毒系，４３００７２）猪瘟病毒属于黄病毒科瘟病毒属［１，２］，是一种有囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒。其基因组大小约为１２．３ｋｂ，含有１个大的开放读码框架（ＯＲＦ）。它编码１个由３８９８个氨基酸残...

昆虫杆状病毒基因的表达与调控

昆虫杆状病毒(Insect baculovirus,简称IBV)作为生物杀虫剂曾普遍受到人们的重视。自八十年代初期Mocarski等用苜蓿尺蠖核型多角体病毒(Autographa californicanuclear polyhedrosis virus,AcNPV)构建基因工程转移载体以来,IBV在分子生物学上又起着另一种新的作用。据不完全统计,全世界进行IBV研究的实验室多达150余家,一般均以AcNPV作为模型系统。本文仅就IBV基因表达调控和转移载体构建的最近研究进展作一简要综述。

昆虫病毒多角体蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

将含有大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)多角体蛋白基因(ocu)的BamHI-H片段克隆到表达载体pDR 540的BamHI位点,得到能抗高浓度氨苄青霉素(200μg/ml)的两个阳性重组体,其胞外总蛋白比亲本质粒高1.1—1.4倍。在大肠杆菌细胞中,BsNPV ocu基因在原核杂合启动子tac驱动下能高水平的表达,表达量达到0.8和4.7mg/ml。免疫沉淀反应证明,表达蛋白为BsNPV的包涵体蛋白,凝胶过滤法测定的平均分子量为32.1×10~3道尔顿。

一种简便快速提取和透析昆虫杆状病毒DNA的方法

经几次蔗糖梯度离心纯化的多角体病毒或颗粒体病毒,在0.05MNa_2CO_3-0.01M EDTA-0.17M NaCl(pHl0.9)的碱解液中碱解之后,直接用苯酚抽提,乙醇沉淀DNA,DNA在照有透析膜的Enpendorf离心管内以TE缓冲液透析,这样提取的DNA用凝胶电胶检查仅为单一DNA带,其2600D/2800D的比值为1.82。

伪狂犬病病毒gⅢ基因的克隆及其鉴定

以质粒ｐＵＣ１８和ｐＧＥＭ３Ｚｆ（＋）为载体，克隆了伪狂犬病病毒Ｓ株基因组ＤＮＡ的ＰｓｔⅠ酶切４．３ｋｂ片段，该片段含有完整的ｐｒｖ４３基因和ｇⅢ糖蛋白基因。经酶切分析和对转化菌融合蛋白的免疫反应性及免疫原性分析，鉴定了重组质粒ｐＵＣ４．３和ｐＧｅ４．３，从而证实其插入片段含有完整的ｇⅢ糖蛋白基因。

分目扇舟蛾颗粒体病毒DNA与杨扇舟蛾颗粒病毒DNA限制性内切酶酶解图谱的比较

现已发现分目扇舟蛾颗粒体病毒与杨扇舟蛾颗粒体病毒可发生交叉感染,本文用限制性内切酶EcoR-I酶切,在琼脂糖凝胶上分目扇舟蛾粒体病毒DNA呈现出22条片段带谱;杨扇舟蛾颗粒体病毒DNA呈现出15条片段带谱.以λDNA作参照,求得分目扇舟蛾颗粒体病毒DNA的分子量为90×10~6d;杨扇舟蛾颗粒体病毒DNA的分子量为58×10~6d。结果表明分目扇舟蛾颗粒体病毒与杨扇舟蛾颗粒体病毒是不同的病毒株。

昆虫杆状病毒多角体基因的增强序列及其增强机制的新见解

一般相信,增强子是生物基因表达调控的普遍机制。1983年Cochran等发现昆虫杆状病毒AcNPV基因组中有5个同源序列(hrl—5)。1986年,Guarino等证明,它们有增强功能,其中以hr5活性最强。 1990年,武汉大学病毒及分子生物学系齐义鹏、张生家发现,大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)启动子上游有增强子序列。

黑胸大蠊浓核症病毒(P_fDNV)的研究——Ⅲ 最佳感染液回感效果测定

本气报道:从已制备的11种黑胸大蠊浓核症病毒(P_fDNV)感染液中,测定出最佳感染液为第一次分离出的上清液,其LT_(50)比其它感染均短,仅44天;死亡率高达97.92％。

人巨细胞病毒立即早期基因功能的研究进展

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）是一种重要的病毒，属于疱疹病毒科，在普通人群中的感染率为８０％以上，对于某些特殊地区和人群，其感染率可高达１００％。人群感染ＨＣＭＶ后，通常呈隐性感染，但对于孕妇和免疫能力低下者（如器官移植病人、艾滋病患者），该病毒易导致严重...

云南省森林昆虫病毒资源及其开发研究

在回顾我国，我省昆虫病毒研究历史的基础上，对云南省森林昆虫病毒资源、松毛虫病毒资源及其生物防治的研究、应用、病毒杀虫剂的产业化与开发利用前景等方面作了综合详尽的分析；就存在问题和解决途径也作了有益的讨论．

腮腺炎病毒的多肽及其在感染细胞中的合成

以差异离心和蔗糖密度梯度离心法提纯了在鸡胚尿囊腔中繁殖的腮腺炎病毒粒子。并用DS-PAGE分析病毒粒子的结构多肽,发现其结构多肽为11种,分子量在35K到72K之间。同时还检测到HN蛋白的多聚体和F蛋白的大亚基F1。将腮腺炎病毒分别感染Hela、Vero和CE细胞,比较这三种细胞对ME株腮腺炎病毒的敏感性,发现CE细胞是ME株的敏感宿主。用[^(35)S]蛋氨酸标记病毒感染的CE细胞,以SDS-PAGE及放射自显影法检测到腮腺炎病毒在宿主细胞中合成了至少8种多肽,分子量在26.5K到94K之间。对这些多肽在细胞中不同时期合成情况进行了研究。还用脉冲追踪(Pulsechase)技术在感染细胞中发现了F0到F这一转译后加工(Posttranslational procession)现象。此外也研究了放线菌素D和高浓度氯化钠对细胞蛋白质合成的抑制作用。

德昌松毛虫质型多角体病毒杀虫剂的生产工艺

经1987年至1992年对德昌松毛虫质型多角体病毒(CPV)杀虫剂试制研究,得出加工生产工艺,即:在增殖获得大量虫尸后,经捣碎过滤,以差异离心与NS法相结合分离提取病毒,再经含量标定后,加入淀粉、茶枯粉、活性碳、木钙粉、硫酸铜、硫酸镁助剂后制成可湿性粉剂和水剂成品。由此成批生产并应用于10余万亩生产防治,效果为73.5％至98.0％。

引物差示PCR法快速检测乙型肝炎病毒前C区点突变

目的乙型肝炎病毒(HBV)前C区第1896位核苷酸(nt)G_(1896)→A_(1896)的突变是HBeAg阴性HBV感染主要原因。方法利用PCR引物3′末端碱基选择性配对的原理建立了引物差示PCR快速检测HBV前C区G_(1896)→A_(1896)点突变的方法。结果实验结果表明,引物差示PCR系统对相应模板均能高效扩增。该系统对HBV检测具有较高的特异性,对野生型模板与突变型模板的选择性均达到了预期要求,可以用于对临床标本的分型检测。结论该方法的建立,对于e抗原阴性的慢性乙型肝炎病人体内病毒复制状况监测以及e抗原阴转机理的研究均具有一定的指导意义。

细胞松弛素D对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用

本文研究了细胞松弛素D(CD)对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用,统计了在0.4微克/毫升CD作用下的多核细胞形成率,并与HEp2细胞及正常婴兔肾原代培养细胞进行比较。结果表明:CD处理48小时后,肿瘤细胞形成大量的多核,≥3核的细胞数在MA782/5S-8102细胞中为37.05%,在HEp2细胞中为18.37%。正常婴兔肾原代培养细胞经同样处理后≥3核的细胞数只有0.059%。肿瘤细胞多核形成的比例会随CD处理时间的延长而显著增高,并出现排核现象。CD处理96、144小时后的多核细胞数,MA782/5S-8102细胞分别为47.90%,53.12%,HEp2细胞分别为43.94%,51.94%,而正常婴兔肾原代培养细胞则仅为0.26%和0.39%,亦未见排核现象,肿瘤细胞和正常细胞对CD的不同反应,有可能作为鉴别肿瘤细胞与正常细胞的一个简便易行的工具。

农杆菌介导的苏云金杆菌毒蛋白基因转基因油菜的初报

油菜(Brassica.L)是具有重要经济价值的油料作物,生产上经常采用的传统杂交育种极大地改良了作物,但是,油菜种属间不亲和性和萌发后幼苗早期夭亡等原因给常规育种带来很大困难。为了克服了此类困难,自1985年开始有科技工作者利用植物基因工程技术改良油莱品种,并且成功地获得了转基因油菜植株,只是表型(皱叶)异常。

卫星RNA研究新进展:结构与功能表达

植物病毒卫星通常是指那些如果没有特定辅助病毒的帮助就不能复制,而它本身对于辅助病毒的复制是不必需的,且与辅助病毒的基因组无序列同源性的一类RNA分子。到目前为止,已报道有六组共26种植物病毒带有卫星。这些植物病毒卫星有的具有编码自身外壳蛋白的遗传信息,称卫星病毒;有的无此编码功能称为病毒卫星RNA。病毒卫星RNA在其发现的早期,其生物学功能尚不为人重视。然而,七十年代早期,在法国阿尔萨斯爆发的由黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus,CMV)侵染引起的番茄作物坏死病被确定与CMV卫星RNA有关,至此。