嗜麦芽假单胞菌质粒pSH1的限制图谱及km^r标记的克隆

对嗜麦芽假单胞菌Ｐ２菌株（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｍａｌｔｏｏｈｉｌｉａＰ２）的质粒ｐＳＨ１进行了限制酶切分析，确定了ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲⅠ、ＰｓｔⅠ、ＸｂａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、及ＰｖｕⅡ共７种限制性内切酶在ｐＳＨ１、质粒上的切割位点，前４种酶均为单一切点；后３种依次为２、７、５个切点．通过双酶切和部分酶切的方法绘制了ｐＳＨ１质粒的限制酶切图谱．将ｐＧＰ１－２质粒上的卡那霉素抗性基因（ｋｍｒ）片段插入ｐＳＨ１，获得了重组质粒ｐＳＨ２．ｐＳＨ２是由ｐＧＰ１－２质粒上大小为２．９０ｋｂ的ＤＮＡ片段（含ｋｍｒ）和ｇｈＨ１经ＢａｍＨⅠ－ＰｓｔⅠ双酶切产生５．７０ｋｂ大片段组成，它能够重新转化到喀麦芽假单胞菌受体（ｋｍｒ）中，其ｋｍｒ标记能够得到稳定的表达．

引物差示PCR法快速检测乙型肝炎病毒前C区点突变

目的乙型肝炎病毒(HBV)前C区第1896位核苷酸(nt)G_(1896)→A_(1896)的突变是HBeAg阴性HBV感染主要原因。方法利用PCR引物3′末端碱基选择性配对的原理建立了引物差示PCR快速检测HBV前C区G_(1896)→A_(1896)点突变的方法。结果实验结果表明,引物差示PCR系统对相应模板均能高效扩增。该系统对HBV检测具有较高的特异性,对野生型模板与突变型模板的选择性均达到了预期要求,可以用于对临床标本的分型检测。结论该方法的建立,对于e抗原阴性的慢性乙型肝炎病人体内病毒复制状况监测以及e抗原阴转机理的研究均具有一定的指导意义。