自噬对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察自噬对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度雷帕霉素诱导人宫颈癌HeLa细胞,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测自噬相关基因LC3B以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。应用自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌细胞自噬后,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。构建带有绿色荧光蛋白的LC3B质粒,转入HeLa细胞,通过G418药物筛选转染阳性细胞,荧光显微镜观察LC3B的细胞定位,Western blot检测LC3B表达。RTCA仪器实时检测野生型和LC3B过表达HeLa细胞的增殖能力,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达。结果雷帕霉素诱导后,宫颈癌HeLa丑细胞自噬水平增高,增殖和迁移能力有所下降;PI3K/Akt/rnTOR通路蛋白表达改变(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA诱导HeLa细胞增殖和迁移水平下降(P<0.05)。荧光显微镜和Westem blot结果显示构建的LC3质粒成功转入Hela细胞中并且能够抑制宫颈癌细胞的增殖(P<0.05)。结论在一定范围内,随着自噬水平的升高,HeLa细胞增殖和迁移能力降低,可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。通过基因靶向扰乱自噬关键基因(如LC3等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可能为宫颈癌的治疗带来新策略。

碱性磷酸酶对肌钙蛋白Ⅰ测定干扰的评价

目的 评价ALP对cTnI测定的干扰.方法 制备1份正常混合血浆和2份不同浓度cTnI的异常混合血浆,各分成8组,第1组为对照组,另7组加入不同浓度ALP,分别在ACCESS2 （Beckman Coulter公司）及AXSYM（美国Abbott公司）上测定每组标本的cTnI和ALP,并与对照组cTnI比较,评价ALP是否对cTnI测定产生干扰.结果 ACCESS cTnI测定正常血浆时,ALP浓度高达3 716 U/L时测定结果为（0.04±0.01）μgL,与正常血浆组的（0.04±0.01）μg/L比较差异无统计学意义（t=0.40,P＞0.05） ALP高于917 U/L时,AXSYM cTnI测定结果为（0.08±0.01）μg/L,高于正常血浆组的（0.04±0.01）μg/L,差异有统计学意义（t=-4.89,P＜0.01） ACCESS cTnI测定异常血浆时,ALP浓度高达3 534 U/L时,cTnI测定结果为（13.41±0.17）μg/L,与正常血浆组的（13.48±0.16）μg/L比较,差异无统计学意义（t=0.52,P＞0.05）.结论 高浓度ALP对ACCESS cTnI测定无干扰,不会导致假阳性结果,但高浓度ALP（917 U/L以上）会造成AXSYM cTnI检测干扰导致假阳性结果.