目的探讨石见穿多糖(polysaccharides from salvia chinensis,PSSC)作用对γδT细胞增殖以及对骨肉瘤细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法分别采用不同质量浓度的PSSC处理γδT细胞和骨肉瘤细胞24、48、72 d,然后以细胞计数试剂盒(CCK...目的探讨石见穿多糖(polysaccharides from salvia chinensis,PSSC)作用对γδT细胞增殖以及对骨肉瘤细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法分别采用不同质量浓度的PSSC处理γδT细胞和骨肉瘤细胞24、48、72 d,然后以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测PSSC对γδT细胞和骨肉瘤细胞增殖的影响,确定PSSC最佳诱导条件。后续实验均采用最佳条件诱导γδT细胞。酶连免疫吸测定(ELISA)检测PSSC诱导前后γδT细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的水平;流式细胞术细胞术检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NK细胞受体G2D(NKG2D)的表达变化。乳酸脱氢酶释放法检测PSSC对γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞活性的影响。流式细胞术检测PSSC对γδT细胞诱导骨肉瘤细胞凋亡作用的影响。结果 5.00、10.00、20.00、40.00 mg/L的PSSC均可促进γδT细胞增殖,以20.00 mg/L的PSSC诱导48 h时作用最为明显(P<0.05)。经PSSC诱导后的γδT细胞TNF-α、IFN-γ、穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NKG2D的表达显著高于对照组(P<0.05),对骨肉瘤细胞的杀伤率和诱导凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。结论石见穿多糖能够促进γδT细胞增殖,并增强其对骨肉瘤细胞的杀伤作用和凋亡诱导作用,其机制可能与促进细胞表面穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NKG2D的表达和增加TNF-α和IFN-γ的分泌有关。展开更多
目的研究富含AT序列的特异结合蛋白1(special AT rich sequence binding protein 1,SATB1)对甲状腺癌细胞侵袭转移的影响,探讨SATB1促进甲状腺癌侵袭转移的分子机制。方法构建针对SATB1基因的过表达质粒,转染甲状腺癌SW-579细胞,qRT-PCR...目的研究富含AT序列的特异结合蛋白1(special AT rich sequence binding protein 1,SATB1)对甲状腺癌细胞侵袭转移的影响,探讨SATB1促进甲状腺癌侵袭转移的分子机制。方法构建针对SATB1基因的过表达质粒,转染甲状腺癌SW-579细胞,qRT-PCR和Western blotting方法测定转染效率及上皮细胞标志蛋白E-钙粘素(E-cadherin)和间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin)的表达变化;qRT-PCR进一步检测转录因子Twist1和Snail1,基质金属蛋白酶MMP2和MMP9,以及炎性因子IL-6和IL-8的表达变化;倒置显微镜观察细胞形态改变;细胞创伤愈合实验及Transwell方法检测过表达SATB1后甲状腺癌细胞迁移、侵袭能力变化。Western blotting检测SATB1增强表达后Akt磷酸化表达变化,PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理细胞后观察过表达SATB1的SW579细胞迁移侵袭能力变化。结果细胞迁移实验结果显示,过表达SATB1后每个视野下迁移细胞数(196±10)个,较对照组(107±12)个明显增加(P<0.01);侵袭实验结果显示,过表达SATB1后穿过基质胶的细胞数(158±12)个,较对照组(86±15)个明显增加(P<0.01)。Western blotting结果显示转染SATB1后,在总Akt蛋白无改变的情况下,SW-579细胞磷酸化Akt(p-Akt)明显增加。而通过加入PI3K/Akt通路抑制剂LY294002后,细胞迁移及侵袭能力明显减弱。结论 SATB1与甲状腺癌侵袭转移有关;其高表达具有促进甲状腺癌细胞上皮细胞间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用;PI3K/Akt信号通路可能参与了SATB1的促转移过程。展开更多
文摘目的探讨石见穿多糖(polysaccharides from salvia chinensis,PSSC)作用对γδT细胞增殖以及对骨肉瘤细胞杀伤活性的影响及其分子机制。方法分别采用不同质量浓度的PSSC处理γδT细胞和骨肉瘤细胞24、48、72 d,然后以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测PSSC对γδT细胞和骨肉瘤细胞增殖的影响,确定PSSC最佳诱导条件。后续实验均采用最佳条件诱导γδT细胞。酶连免疫吸测定(ELISA)检测PSSC诱导前后γδT细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的水平;流式细胞术细胞术检测γδT细胞穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NK细胞受体G2D(NKG2D)的表达变化。乳酸脱氢酶释放法检测PSSC对γδT细胞杀伤骨肉瘤细胞活性的影响。流式细胞术检测PSSC对γδT细胞诱导骨肉瘤细胞凋亡作用的影响。结果 5.00、10.00、20.00、40.00 mg/L的PSSC均可促进γδT细胞增殖,以20.00 mg/L的PSSC诱导48 h时作用最为明显(P<0.05)。经PSSC诱导后的γδT细胞TNF-α、IFN-γ、穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NKG2D的表达显著高于对照组(P<0.05),对骨肉瘤细胞的杀伤率和诱导凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。结论石见穿多糖能够促进γδT细胞增殖,并增强其对骨肉瘤细胞的杀伤作用和凋亡诱导作用,其机制可能与促进细胞表面穿孔素、颗粒酶素B、CD107a和NKG2D的表达和增加TNF-α和IFN-γ的分泌有关。