己酮可可碱对间充质干细胞修复糖尿病肾病小鼠肾小球内皮细胞损伤的促进作用

目的探讨己酮可可碱(PTX)对间充质干细胞(MSCs)修复糖尿病肾病小鼠肾小球内皮细胞损伤的促进作用。方法体外培养MSCs细胞和肾小球内皮细胞,并用1 mmol·L^-1 PTX对MSCs和肾小球内皮细胞进行亚毒性实验检测。高糖诱导构建肾小球内皮细胞损伤模型,并用Transwell完成损伤内皮细胞与MSCs细胞的共培养,实验分为6组:正常对照组、损伤组、MSCs组、MSCs+0.1 mmol·L^-1 PTX组、MSCs+0.3 mmol·L^-1 PTX组和MSCs+1 mmol·L^-1 PTX组。采用噻唑蓝(MTT)实验检测各组内皮细胞的增殖水平;流式细胞仪检测各组内皮细胞的凋亡率;Western blotting检测内皮细胞损伤标志物内皮素(ET)、血管性血友病因子(vWF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平。结果与正常对照组比较,损伤组细胞增殖能力明显减弱,凋亡率增加,内皮细胞损伤标志物表达水平显著升高。与损伤组比较,MSCs组及不同浓度PTX干预后的MSCs组细胞增殖能力增强,凋亡率下降,损伤标志物表达水平降低。与MSCs组比较,MSCs+PTX组内皮细胞增殖能力增强,凋亡率降低,损伤标志物表达水平降低。结论PTX可促进MSCs细胞对糖尿病肾病小鼠肾小球内皮细胞增殖,抑制凋亡,对肾小球内皮细胞损伤具有修复作用,并在小剂量范围内呈现浓度依赖性。

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡及氧化应激的影响

目的探讨己酮可可碱(PTX)联合骨髓间充质干细胞(MSC)对高糖诱导下小鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激的影响。方法葡萄糖30 mmol·L^-1刺激培养12 h的小鼠肾小球系膜细胞,肾小球系膜细胞分为细胞对照组、高糖组、高糖+MSC组(高糖系膜细胞与MSC按1∶10共培养)、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L^-1组,孵育48 h。酶联免疫法检测系膜细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;流式细胞术检测系膜细胞凋亡;Western印迹法检测系膜细胞中Bcl-2,Bax,胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,高糖组系膜细胞的SOD活性显著降低,MDA和ROS含量显著升高(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L^-1组SOD活性显著升高,MDA和ROS含量显著降低(P<0.01)。与细胞对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L^-1组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论PTX联合MSC可通过减少肾小球系膜细胞凋亡以及抑制其氧化应激来改善糖尿病肾病。

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞降低高糖诱导的肾小球系膜细胞纤维化倾向及糖基化终末产物聚集的体外研究

为探讨己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)联合骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)对高糖条件下肾小球系膜细胞纤维化及糖基化终末产物(advanced glycation end product,AGE)聚集的影响,将体外高糖培养的小鼠肾小球系膜细胞分为6个组:正常组、损伤组、MSC组、MSC+PTX 0.1mmol/L组、MSC+PTX 0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组。MSC组将MSC和肾小球系膜细胞共培养。MSC+PTX 3组在MSC和肾小球系膜细胞共培养时分别加入0.1、0.3和1mmol/L的PTX。采用ELISA检测各组肾小球系膜细胞AGE水平,Western blotting检测各组肾小球系膜细胞中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、果蝇抗同源序列蛋白3(drosophila mothers against decapentaplegic 3,SMAD3)、SMAD7及转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGF-β)的表达。结果显示,与正常组比较,损伤组肾小球系膜细胞的AGE水平显著升高(P<0.01)。与损伤组比较,MSC组、MSC+PTX 0.1 mmol/L组、MSC+PTX0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组肾小球系膜细胞的AGE水平显著降低(P<0.01),加入PTX后肾小球系膜细胞的AGE水平降低得更为显著,且呈现一定的浓度依赖性。与正常组比较,损伤组CTGF、SMAD3及TGF-β的蛋白表达量显著升高(P<0.01),SMAD7表达量显著降低(P<0.01)。MSC+PTX 0.1mmol/L组、MSC+PTX 0.3mmol/L组和MSC+PTX 1mmol/L组的CTGF、SMAD3和TGF-β蛋白表达量显著低于损伤组(P<0.05),但SMAD7蛋白表达量显著高于损伤组(P<0.01),且呈现PTX浓度依赖性。提示PTX联合MSC可能具有通过降低共培养肾小球系膜细胞中AGE的聚集以及多靶点抑制TGF-β/SMAD信号通路来抑制细胞纤维化的潜能,且呈现PTX浓度依赖性。