武汉市儿童医院婴幼儿腹泻轮状病毒的VP4型别分析

目的 研究武汉市儿童医院腹泻门诊A组轮状病毒VP4基因的分子流行病学特征。 方法 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,将检测出的A组轮状病毒阳性样利用多重RT -PCR技术对VP4基因进行分型研究。 结果 武汉地区793份腹泻患儿粪便样本经检测轮状病毒阳性 2 5 7例 ,阳性率为 3 2 .4%。其中P [8]型 2 3 2例 ( 90 .3 % ) ,P [4 ]型 3例( 1.2 % ) ,P [8]与P [4 ]混合感染 15例 ( 5 .8% ) ,尚有 7例 ( 2 .7% )未能分出型别。对检测结果按采样时间、年龄和性别分布分别进行了分析。 结论 武汉地区A组轮状病毒以P[8]型为主要流行基因型 ,患儿以 6月至 1岁为主 ,男女性别差异不大 ,武汉地区婴幼儿腹泻A组轮状病毒VP4基因分型研究将为轮状病毒疫苗的研制提供基础。

武汉市2007年麻疹暴发流行情况及流行因素分析

目的探讨武汉市2007年麻疹暴发流行的因素，总结控制疫情的经验，以利更好地预防控制麻疹流行。方法研究2007年武汉市传染病医院收治的702例麻疹病例的人群分布、月份分布、传播情况、预防接种史、以及麻疹的基因分型。结果发病年龄主要集中在8月龄以下儿童，以6—8月龄小儿发病者最多；发病时间主要集中在1-2月份，有明确免疫接种史的仅占6．48％；主要传播场所为医院和诊所，占56．55％；基因分型主要是H1a型，另有2株核蛋白基因变异率达2．6％。结论2007年武汉市麻疹暴发流行的原因与婴幼儿麻疹抗体免疫力达不到有效的保护水平以及对麻疹病人忽视及时隔离而导致的传播，另外麻疹基因发生变异对麻疹暴发流行的影响尚需密切观察与监测。加强对育龄妇女的麻疹抗体监测，必要时进行加强免疫，以提高新生儿的抗体水平，减少小月龄婴儿麻疹的发病；加强对医疗机构的管理，控制麻疹的传播。

武汉市2007年麻疹暴发流行情况及流行因素分析

目的探讨武汉市2007年麻疹暴发流行的因素，总结控制疫情的经验，以利更好地预防控制麻疹流行。方法研究2007年武汉市传染病医院收治702例麻疹病例的人群分布、月份分布、传播情况、预防接种史、以及麻疹的基因分型。结果发病年龄主要集中在8月龄以下儿童，以6～8月龄小儿发病者最多；发病时间主要集中在1～2月份，有明确免疫接种史的仅占6．48％；主要传播场所为医院和诊所，占56．55％；基因分型主要是H1a型，另有2株核蛋白基因变异率达2．6％。结论2007年武汉市麻疹暴发流行的原因与婴幼儿麻疹抗体免疫力达不到有效的保护水平以及对麻疹病人忽视及时隔离而导致的传播，另外麻疹基因发生变异对麻疹暴发流行的影响尚需密切观察与监测。加强对育龄妇女的麻疹抗体监测，必要时进行加强免疫，以提高新生儿的抗体水平，减少小月龄婴儿麻疹的发病；加强对医疗机构的管理，控制麻疹的传播。

婴幼儿腹泻A组轮状病毒VP7基因型别的研究

目的 研究武汉地区A组轮状病毒基因VP7基因分型情况。方法 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳法将检测出的A组轮状病毒阳性样本用一步多重RT PCR技术对其进行VP7基因分型研究。结果 武汉地区 793份腹泻患儿粪便样本经检测轮状病毒阳性 2 5 7份 ,阳性率为 32 .4 %。其中G1型 5例 (1.9% ) ,G2型 6例 (2 .3% ) ,G3型 2 0 2例 (78.6 % ) ,G1与G3混合感染 10例 (3.9% ) ,G2与G3混合感染 1例 (0 .4 % ) ,G3与G8混合感染 1例 (0 .4 % ) ,2 2例 (8.6 % )未能分出型别 ,另外发现非正常G3型 10例 (3.9% )。结论 武汉地区A组轮状病毒以G3型为主要流行基因型 ,轮状病毒阳性患儿年龄以 7～ 12个月为主 。

武汉市外环境中禽流行性感冒病毒分布及禽类职业暴露人群H5N1抗体水平调查

目的 监测武汉市外环境中禽流行性感冒（简称禽流感）病毒的分布情况,了解禽类职业暴露人群高致病性禽流感病毒（H5N1）的感染状况.方法 2010年从3个野生候鸟柄息地和5个城乡活禽市场采集78份外环境标本（水、禽类粪便及笼具表面标本）,从13个禽流感监测点采集禽类职业暴露人群的血清标本249份.采用实时荧光定量RT-PCR方法,对禽流感外环境标本进行甲型流感病毒检测,对于甲型流感病毒阳性的标本,进一步采用多重RT-PCR方法,进行H3、H5、H7、H9亚型禽流感病毒分型.采用马红细胞凝集抑制试验和2种禽流感灭活抗原（A/Hubei/1/10和A/Anhui/1/05）对职业暴露人群血清中高致病性禽流感H5N1抗体水平进行检测.结果 采自城乡活禽市场的50份外环境标本中,17份（34.0％）为甲型流感病毒阳性,其中H5亚型单纯阳性标本4份,H9亚型单纯阳性标本3份,H3、H5亚型混合阳性标本4份,H3、H9亚型混合阳性标本2份,H5、H9亚型混合阳性标本2份,H3、H5、H9亚型混合阳性标本2份,未检测到H7阳性标本.采自野生候鸟栖息地的28份外环境标本,未检测到甲型流感病毒阳性标本.不同类型外环境标本甲型流感病毒阳性率分别为：水标本37.5％ （6/16）,笼具表面标本16.7％（ 5/30）,粪便标本l8.8％ （6/32）.对A/Hubei/1/10抗原抑制效价≥40的血清标本共100份,占标本总数的40.2％,而对A/Anhui/1/05抗原抑制效价≥40的血清标本共36份,占标本总数的14.5％,两组间差异有统计学意义（x2=41.433,P＜0.05）.249份职业暴露人群血清标本中,针对A/Hubei/1/10抗原的H5N1抗体阳性标本5份（抑制效价≥160）,均来自城乡活禽市场,而针对A/Anhui/1/05抗原则无H5N1抗体阳性标本.结论 武汉市城乡活禽市场内流行着多种亚型禽流感病毒,外环境禽流感病毒分布与禽类职业暴露人群H5N1抗体水平检测结果一致.

2008--2012年武汉市儿童流行性感冒病毒及呼吸道合胞病毒流行特征

目的了解2008--2012年武汉市14岁及以下流行性感冒（简称流感）样症状患儿流感病毒和呼吸道合胞病毒（ItSV）的感染情况及病毒流行特征。方法于2008年7月至2012年6月在武汉市某医院门诊和急诊患者中，选择14岁以下的流感样病例作为研究对象，共2854例。研究对象各采集1份咽拭子标本，共采集2854份。从流感样病例咽拭子标本中提取病毒核酸，应用实时荧光定量逆转录PCR（RT—PCR）对流感病毒和RSV进行核酸检测和亚型鉴定，分析两种病毒感染的时间和年龄特征。结果2854例患儿检测流感病毒阳性758例，阳性率为26．6％。其中，甲型流感病毒阳性547例（19．2％）、乙型流感病毒阳性211例（7．4％）。流感病毒每年流行呈双峰特征，即夏季峰和冬春季峰。6～14岁组患儿流感病毒检测阳性率为48．0％（275／573），明显高于3～5岁组[26．6％（213／801）]和3岁以下组[18．3％（270／1480）]，差异有统计学意义（x。=187．432，P〈0．01）。患儿中RSV检测阳性219例，阳性率为7．7％，其中，RSV—A阳性108例，RSV—B阳性112例，混合感染1例。RSV流行呈明显的季节性，发病主要集中在秋、冬、春季，占全部发病病例的96．8％（212／219），每年流行情况波动较大。RSV—A、RSV—B交替流行，交替周期为2年，2008年9月至2009年5月及2009年12月至2010年3月以RSV—B感染为主，分别占76．6％（36／47）和96．9％（62／64）；2010年11月至2011年3月及2011年9月至2012年4月以RSV—A感染为主，分别占92．5％（37／40）和100．0％（48／48）。但随着年龄的增长，RSV—A和RSV—B阳性率不断下降（RSV—A：x。=36．223，P〈0．01；RSV—B：x。：36．281，P〈0．01），其中，RSV—A在〈1、1、2、3、4、5～9、10～14岁年龄组阳性率分别为7．0％（26／373）、5．9％（39／662）、4．0％（18／445）、3．2％（13／406）、1．3％（3／236）、1．4％（7／517）、0．9％（2／215）；RSV—B在各年龄组的阳性率分别为6．4％（24／373）、6．0％（40／662）、4．5％（20／445）、4．4％（18／406）、1．3％（3／236）、1．0％（5／517）、0．9％（2／215）。0～3岁组RSV阳性197例，占RSV阳性患者总数的90．0％（197／219）。2009年11月甲型H1N1流感暴发流行时，RSV阳性率为3．0％（3／100），低于2008、2010,2011年同月份RSV检测阳性率[分别为18．2％（6／33）、10．8％（10／93）、10．0％（4／40）]，差异有统计学意义（x。=8．450，P〈0．05）；2011年1月甲型HlNl流感暴发流行时，RSV阳性率为5．7％（3／53），低于2009、2010、2012年同月份RSV检测阳性率[分别为21．7％（5／23）、28．6％（22／77）、16．0％（8／50）]，差异有统计学意义（X2=11．233，P〈0．05）；2011年9月，流感夏季峰缺失时，RSV检测阳性率为25．0％（10／40），高于2008、2009、2010年同月份RSV检测阳性率[分别为11．4％（4／35）、1．7％（2／118）、0．0％（0／109）]，差异有统计学意义（x2=32．521，P〈0．01）。结论流感病毒和RSV是武汉地区流感样患儿重要的病原，两种病毒流行的季节性、年龄分布等特征各不相同，流感病毒对RSV的流行存在着一定的抑制作用。

2008-2013年武汉市某医院就诊儿童人冠状病毒感染情况

人冠状病毒（humancoronavirus，HCoV）是一类常见的呼吸道病原。在目前已发现的6个亚型中，229E、OC43、NL63和HKUl型与急性呼吸道感染、下呼吸道感染、肺炎等疾病有关。重症急性呼吸综合征（severeacuterespiratorysyndrome，SARS）冠状病毒是严重急性呼吸综合征的病原，曾在多国暴发。2012年发现的中东呼吸综合征冠状病毒（MERS．HCoV）可导致急性重症呼吸道感染合并急性肾衰竭，但仅在中东流行。

武汉地区2008-2013年夏季儿童流感样病例呼吸道病毒监测分析

武汉地区流感病毒流行呈现双峰模式：夏季高峰（7-9月）和冬季高峰（12月至次年4月）.本研究通过监测2008-2013年武汉地区夏季儿童流感样病例（ILI）中流感病毒及其他呼吸道病毒的流行状况,了解儿童上呼吸道病毒谱变化.1．对象与方法：（1）研究对象：于2008-2013年夏季在武汉市某医院门诊和急诊患者中选择年龄〈14岁、发病3d内且未服用抗病毒药物、体温≥38℃、伴有咳嗽或咽痛症状的ILI为研究对象，共1153例。

抗人APPβ水解位点单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的:制备能特异识别结合人APPβ水解位点的单克隆抗体(mAb)。方法:以APPβ水解位点短序列多抗原肽免疫BALB/c小鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA和有限稀释法进行筛选和亚克隆,获得能分泌针对APPβ水解位点mAb的杂交瘤,采用ELISA、Western blot等方法对其特异性进行检测。结果:获得2株稳定分泌抗人APPβ水解位点mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7和2H10,其Ig亚类分别为IgGl和lgG2b。Western blot显示2株抗体可以与全长APP结合。结论:成功制备了能特异识别结合APPβ水解位点的mAb,为进一步研究其对β位点封闭功能和构建小分子抗体奠定基础。

维生素D受体基因多态性与慢性乙型肝炎遗传易感性的Meta分析

目的综合评价维生素D受体（vitamin Dreceptor，VDR）基因多态性与慢性乙型肝炎遗传易感性的关系。方法以“Vitamin Dreceptor polymorphism”、“VDR polymorphism”、“ApaI”、“TaqI”、“FokI”、“BsmI”和“Hepatitis”、“HepatitisB”、“HBV”等作为关键词在英文数据库PubMed等中进行检索，同时以“维生素D受体”和“乙肝”、“慢性肝炎”等作为主题词检索中文数据库，最后，利用Statal0．0软件进行Meta分析。结果VDR—FokI基因多态会显著增加慢性乙肝的发病风险，其杂合（Ff＂US．ff）、纯合（FF vs ．ff）以及等位基因（F vs f）遗传模型的相对危险度（oddsratio，OR）和95％置信区间（confidence interval，CI）分别为1．37（1．06～1．76）、2．11（1．59～2．79）和1．49（1．20～1．85），而VDR—ApaI和VDRTaqI则未发现其与慢性乙肝的相关性。结论VDRFokI基因多态性与慢性乙肝的遗传易感性相关，其F等位基因会增加慢性乙肝的发病风险。

MicroRNA基因多态性与肝细胞癌遗传易感性的Meta分析

目的综合评价microRNA基因多态性与肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）遗传易感性的关系。方法全面检索相关文献,收集2014年9月前有关microRNA基因多态性与HCC易感性的病例对照研究,使用Stata10.0进行Meta分析。结果最终纳入病例对照研究13项。分析结果显示miR-146aG〉C（rs2910164）和miR-196a-2C〉T（rs11614913）等位基因多态性与HCC发生风险显著相关,其相对危险度（odds ratio,OR）和95%置信区间（confidence interval,CI）分别为0.92（0.87~0.98）和0.90（0.82~0.98）,分层分析结果提示,miR-146a多态性和HCC之间的显著相关性仅存在于男性和亚洲人群中。结论 miR-146a和miR-196a-2基因多态性与HCC的遗传易感性相关,其C和T等位基因会降低HCC的发病风险。

Kozak序列(+4G)对携带EGFP标签的人淀粉样前体蛋白751在CHO细胞中表达的影响

目的:观察Kozak序列(+4G)对稳定转染的人淀粉样前体蛋白(hAPP751)-EGFP融合真核表达载体在CHO细胞中表达的影响,为APP的水解代谢研究提供细胞模型。方法:分别将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段亚克隆入pEGFP-N1表达载体,得到pEGFP-hAPP751(+4G)和pEGFP-hAPP751重组质粒,转染CHO细胞,通过G418筛选稳定转染细胞株,再用倒置荧光显微镜挑取绿色荧光强的细胞进行亚克隆,并观察融合蛋白的表达强度和细胞定位,最后用EGFP抗体通过Western印迹检测融合蛋白。结果:PCR、酶切和测序证明将含Kozak序列(+4G)和不含Kozak序列的hAPP751全长基因片段分别连入了真核表达载体pEGFP-N1中;荧光显微镜下观察pEGFP-hAPP751(+4G)稳定转染细胞的细胞膜和细胞质产生较强的绿色荧光,其中在细胞质中成不均匀颗粒状分布,Western印迹检测到相对分子质量约156 000的融合表达蛋白,与预期相符;pEGFP-hAPP751转染细胞,其绿色荧光十分微弱且在整个细胞均匀分布,Western印迹检测到相对分子质量约26 000的EGFP,但检测不到预期的hAPP751-EGFP融合表达蛋白。结论:Kozak序列(+4G)可以明显促进hAPP751的表达,获得稳定转染且高水平融合表达hAPP751-EGFP的细胞株。

MicroRNA-122结合区遗传变异IL-1A rs3783553与慢性HBV感染的关联研究

目的探讨白细胞介素-1A（IL-1A）基因3′UTR区遗传变异rs3783553与慢性乙型肝炎病毒感染风险的关联。方法采用病例对照研究,选取慢性乙肝病毒感染的病例1 271例,自发性乙肝病毒清除者1 298例。采用ABI7900HT的TaqMan基因分型技术对遗传变异位点进行检测;采用χ2检验和t检验比较病例组和对照组间人口学特征分布差异,应用非条件Logistic回归分析rs3783553对慢性乙肝病毒感染风险的影响。结果遗传变异位点rs3783553插入（TTCA）等位基因携带者发生慢性乙肝病毒感染风险显著低于缺失等位基因携带者（OR=0.71,95%CI=0.61~0.84）。每增加1个插入等位基因,携带者患慢性乙肝病毒感染的风险降低21%（OR=0.79;95%CI=0.70~0.89）。结论IL-1A基因3′UTR区的遗传变异位点rs3783553与慢性乙肝病毒感染的风险有显著关联。

B组轮状病毒WH-1株NSP2基因序列和蛋白质结构分析

目的 克隆成人腹泻标本WH 1中B组轮状病毒组 (groupBrotavirus ,GBRV)非结构蛋白NSP2基因 ,分析其核苷酸序列 ,比较与其它GBRV基因同源性 ,预测其mRNA二级结构、蛋白质二级结构。方法 利用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,从成人腹泻标本WH 1中扩增GBRVNSP2基因 ,克隆载体pUCmT ,对NSP2基因进行核苷酸序列分析。利用GeneBee软件比较与其它GBRV毒株NSP2基因同源性 ,Rnaviz2 .0软件绘制NSP2基因的二级结构 ,PredictProtein软件分析NSP2蛋白结构。结果 成人腹泻标本WH 1中GBRV非结构蛋白NSP2基因全长 10 0 7bp ,与ADRV核苷酸序列的同源性达 98% ,与印度加尔各达分离株CAL 1达 82 % ,与IDIR(鼠 )同源性仅为 79%。氨基酸序列与ADRV的同源性达 98.4 % ,与CAL 1达 97.7% ,而与IDIR仅为 89.0 %。其mRNA折叠形成多达 2 6个发卡环状结构。NSP2蛋白是由 30 1个氨基酸残基组成的多肽 ,含有 2个潜在的N 糖基化位点和多个磷酰化位点。结论 成人腹泻标本WH 1中GBRV非结构蛋白NSP2基因和氨基酸序列与人GBRV有较高的同源性 ,而与动物中GBRV同源性相对较低 ,其中与ADRV的同源性最高 ,推测GBRVWH 1株与ADRV具有相同起源。