I型内含子核酶介导靶向CEA双报告基因显像的体外研究

目的构建靶向CEA的以I型内含子核酶为载体核心介导的生物发光一核素双报告基因显像系统。方法采用基因工程技术构建靶向CEA的I型内含子核酶及核酶-荧光素酶-胸苷激酶（Rib53-Fluc-tk）报告质粒，采用细胞生物发光等方法检测核酶反式剪接产物的表达；以Iodogen固相氧化法合成131I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU），行细胞摄取实验。采用两样本t检验、方差分析及最小显著差异（LSD）t检验进行统计分析。结果Rib53一Fluc—tk测序正确；乳腺癌细胞MCF-7的荧光素酶比值增高，可达O．64±0．10（n=4）；MCF-7细胞转染Rib53-Fluc—tk后的反式剪接产物条带大小为520bp，测序结果正确；pCDNA3．1-CEA及Rib53-Fluc-tk共转人胚。肾细胞293T，可探测到生物发光信号。131I—FIAU的标记率为（64．02±4．79）％（n=3），放化纯为（95．96±1．07）％（n=3），标记产物在人血清中24h的稳定性高。293T单独转染Rib53-Fluc-tk，细胞摄取率仅为（0．31±0．01）％（n=4）；293T共转染pCDNA3．1-CEA、Rib53-Fluc-tk质粒，细胞摄取率增加至（1．40±0．06）％（n=4），F=1007．29，t=136．34，P〈0．01。结论成功构建了I型内含子核酶为核心介导的靶向CEA的双报告基因系统，并对CEAmRNA进行了生物发光以及细胞摄取的检测，为改善传统报告基因显像的特异性奠定了体外实验的基础。