Dectin-1内在化表达介导氧依赖性方式杀伤白色念珠菌

目的探讨Dectin-1介导人嗜中性粒细胞以氧依赖性方式杀伤调理吞噬后白色念珠菌孢子的机制。方法在白色念珠菌孢子作用前后，流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测人嗜中性粒细胞中Dectin．1的表达率及表达部位；并通过Dectin-1阻断试验分析嗜中性粒细胞中Dectin-1的表达与胞内活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）的产生及对白色念珠菌孢子杀伤的相关性。结果在白色念珠菌孢子刺激30或60min后，细胞内Dectin-1的表达率明显上调（0min，8．32％；30min，16．82％；60rain，23．88％。与0min相比，P均〈0．01），且Dectin-1与ROS在胞内的表达均被募集到吞噬的白色念珠菌孢子表面。Dectin-1的阻断分别与ROS峰值的抑制（R2=0．306，P〈0．01）及白色念珠菌杀伤率的降低（R2=0．251，P〈0．01）呈剂量依存关系。结论Dectin-1可通过内在化的表达模式介导人嗜中性粒细胞以ROS依赖性方式杀伤调理吞噬的白色念珠菌孢子。

申克孢子丝菌酵母相与白念珠菌诱导中性粒细胞活性氧簇的差异性表达

目的研究人中性粒细胞吞噬申克孢子丝菌酵母相和白念珠菌后胞内活性氧簇（ROS）的实时表达水平及对两者杀菌能力的差异。方法应用密度梯度离心法分离人外周血中性粒细胞，并通过ROS探针（DCFH—DA）、流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测申克孢子丝菌酵母相临床株和白念珠菌标准株ATCC90028作用后，中性粒细胞内ROS的实时表达水平及对上述2种真菌孢子的杀菌率。结果申克孢子丝菌酵母相临床株和白念珠菌标准株ATCC90028作用中性粒细胞60min后，申克孢子丝菌组中性粒细胞内ROS表达水平达到峰值（平均荧光强度159．67±11．34），并显著高于白念珠菌组（112．22±9．66），经LSD—t检验，P〈0．01；而作用120～180min后，胞内ROS表达水平（120min为89．01±9．81；180min为57．63±8．46）迅速下降，显著低于白念珠菌组中ROS的同期表达水平（120min时为110．25±7．28；180min时为109．98±9．00，经LSD—t检验，120min时P〈0．05，180min时P〈0．01）。激光共聚焦显微镜观察到，ROS主要表达于吞噬上述真菌孢子的中性粒细胞中，并被募集到被吞噬的部分孢子表面。中性粒细胞对申克孢子丝菌180min杀菌率（19．21％±3．68％）亦显著低于其对白念珠菌孢子的杀菌率（26．63％±4．97％），经LSD—t检验，P〈0．01。结论中性粒细胞吞噬上述2种真菌孢子后，胞内ROS呈明显的差异性表达。与白念珠菌相比，中性粒细胞内ROS水平的迅速下降在一定程度上抑制了其对申克孢子丝菌的杀伤效能。

G 试验阳性血清通过干扰 Dectin-1的内在化表达抑制 ROS 依赖性杀伤白念珠菌

目的：探讨G试验阳性血清中游离β-1，3-D-葡聚糖干扰人嗜中性粒细胞Dectin-1所介导的氧依赖性杀伤白念珠菌的机制。方法激光共聚焦显微镜检测经β-1，3-D-葡聚糖酶预处理前后的白念珠菌孢子作用下，人嗜中性粒细胞内Dectin-1表达分布的变化及与活性氧簇（ reactive oxy-gen species， ROS）的共定位关系；进一步分析Dectin-1的阻断对白念珠菌诱导下胞内ROS生成的影响；流式细胞术检测G试验阳性血清中游离的β-1，3-D-葡聚糖对白念珠菌诱导下人嗜中性粒细胞内Dectin-1和ROS表达水平的影响。结果在白念珠菌作用下，人嗜中性粒细胞内诱导性表达的Dec-tin-1主要被募集到内吞的孢子表面，且与ROS的产生具有一定的共定位关系。然而，经β-1，3-D-葡聚糖酶预处理后，胞内则未见Dectin-1的明显表达；当Dectin-1被其功能性抗体（5μg/ml）阻断后，白念珠菌诱导胞内ROS的表达与阻断前相比显著降低（LSD-t检验，P＜0．01）；经G试验阳性血清预处理的人嗜中性粒细胞中，白念珠菌诱导下胞内Dectin-1和ROS的表达水平均显著低于单一的白念珠菌作用组（LSD-t检验， P＜0．01）；线性回归分析提示G试验阳性血清中游离β-1，3-D-葡聚糖浓度分别与Dectin-1及ROS表达水平的抑制部分呈显著的剂量依存关系（ Dectin-1，R2＝0．702，P＜0．01；ROS，R2＝0．588，P＜0．01）。结论 G试验阳性血清中的游离β-1，3-D-葡聚糖可通过干扰人嗜中性粒细胞Dectin-1内在化表达的方式抑制ROS依赖性杀伤内吞的白念珠菌孢子。