TP63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及DSC3/DSG3基因表达的影响

目的探讨肿瘤蛋白(TP)63对非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药性及桥粒芯胶蛋白(DSC)3/桥粒芯糖蛋白(DSG)3的影响。方法体外培养人非小细胞肺癌吉非替尼敏感细胞株PC9、吉非替尼耐药细胞株PC9/GR,将PC9/GR细胞随机分为对照组、TP63-siRNA组(转染TP63-siRNA)和NC-siRNA组(转染NC-siRNA),用细胞计数试剂盒(CCK)-8法检测转染后细胞吉非替尼半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖情况;流式细胞术检测PC9/GR细胞凋亡情况;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室法检测细胞侵袭;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3 mRNA表达;蛋白印迹分析法检测各组细胞TP63、DSG3、DSC3蛋白表达。结果与PC9细胞相比,耐药细胞PC9/GR中TP63 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与对照组和NC-siRNA组相比,TP63-siRNA组PC9/GR细胞IC50值,细胞增殖、迁移、侵袭能力,TP63、DSG3、DSC3 mRNA及蛋白表达显著下降,细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论TP63在PC9/GR细胞中高表达,干扰TP63表达可抑制DSC3/DSG3表达,逆转PC9/GR对吉非替尼耐药性。

RNA干扰COMMD8基因表达下调PI3K/AKT信号通路诱导肺癌凋亡和增加顺铂敏感性

目的研究RNA干扰铜代谢MURR1结构域(COMMD)8对肺癌细胞存活、迁移、侵袭、凋亡及顺铂敏感性的影响和潜在分子机制。方法以人正常肺上皮细胞株BEAS-2B为对照,qRT-聚合酶链反应(PCR)和Western印迹检测人肺癌细胞株H1299、SPC-A-1、H446中COMMD8 mRNA和蛋白的水平。在H1299细胞中转染si-COMMD8或(和)用100ng/ml PI3K/Akt信号通路激动剂胰岛素样生长因子(IGF)-1处理,Western印迹检测细胞中COMMD8、Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、多药耐药基因(MDR)1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达,CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测细胞存活率、凋亡率和迁移侵袭,用DDP IC50值检测细胞DDP敏感性。结果与人正常肺上皮细胞株BEAS-2B相比,在肺癌H446、SPC-A-1和H1299细胞中COMMD8 mRNA和蛋白含量均显著升高(均P<0.05);RNA干扰COMMD8可抑制H1299细胞中Ki-67、MMP-2、MDR1、p-PI3K和p-AKT蛋白表达(均P<0.05),促进酶切caspase-3表达,抑制PI3K/AKT信号通路,抑制H1299细胞存活、迁移和侵袭,促进细胞凋亡并增加细胞的DDP敏感性(均P<0.05);PI3K/AKT信号通路激动剂IGF-1可逆转沉默COMMD8对H1299细胞PI3K/AKT信号通路、增殖、迁移、侵袭、凋亡及DDP敏感性的影响(均P<0.05)。结论 RNA干扰COMMD8基因可抑制肺癌H1299细胞存活、迁移侵袭并促进细胞凋亡,增加DDP敏感性。

甘遂入药对比呋塞米对带瘤癌性腹水大鼠AQP-1表达及心肌损伤影响研究

目的:分析甘遂入药对比呋塞米对癌性腹水大鼠心肌受损与水通道蛋白-1(AQP-1)表达状况影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机数字表法分成四组,正常组、模型组、西药组和观察组,每组各15只,除正常组外其它各组制备癌性腹水大鼠模型;造模以后第四天开始灌胃,西药组灌胃呋塞米药液,剂量为1ml/100g,观察组大鼠灌胃甘遂半夏汤和呋塞米药液,剂量为1ml/100g,模型组、正常组灌胃同剂量蒸馏水,各组大鼠均连续灌胃10天。记录大鼠体重、腹围/体重、尿量及腹水量,ELISA法检测血清醛固酮、钠离子、钾离子、Ure、血清肌酐(Cre)、尿酸(UA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,同时检测大鼠腹膜组织AQP-1mRNA表达状况。结果:模型组、西药组及观察组大鼠体重较正常组下降,腹围/体重较正常上升,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、西药组大鼠醛固酮、钾离子及钠离子含量比正常组上升,AQP-1mRNA表达量比正常组下降,观察组醛固酮、钾离子及钠离子含量比模型组下降,AQP-1mRNA表达量比模型组上升,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、西药组及观察组大鼠Cre含量比正常组上升,Ck含量比正常组下降,模型组与西药组大鼠Ure、UA、LDH比正常组上升,观察组比模型组下降差异均有统计学意义(P<0.05),各组大鼠MDA、SOD差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:甘遂半夏汤结合呋塞米可提升癌性腹水大鼠腹膜组织内AQP-1表达量,改善心肌受损状况。