LncRNA SNHG3通过miR-330-5p/PAK1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化

目的 探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因(LncRNA SNHG)3通过miR-330-5p/P21活化激酶(PAK)1信号轴调节前列腺癌细胞的增殖、凋亡和上皮间质转化。方法 体外培养人前列腺上皮细胞和人前列腺癌细胞株PC-3、DU 145、VCaP,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各细胞中LncRNA SNHG3、miR-330-5p与PAK1 mRNA表达。体外培养人前列腺癌细胞PC-3,随机分为对照组、LncRNA SNHG3 siRNA组、miR-330-5p inhibitor组、共转染阴性对照(LncRNA SNHG3 siRNA阴性对照+miR-330-5p inhibitor阴性对照)组、共转染(LncRNA SNHG3 siRNA+miR-330-5p inhibitor)组,分组转染LncRNA SNHG3 siRNA及其阴性对照、miR-330-5p inhibitor及其阴性对照后,以噻唑蓝(MTT)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色法检测PC-3细胞增殖情况;以流式细胞术检测PC-3细胞凋亡情况;以Transwell实验检测PC-3细胞侵袭情况;以qRT-PCR检测PC-3细胞miR-330-5p、PAK1与上皮间质转化因子E-钙黏附蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;以双荧光素酶报告基因实验检测PC-3细胞中LncRNA SNHG3对miR-330-5p的靶向调控作用。结果 与人前列腺上皮细胞比较,PC-3、DU 145、VCaP细胞中LncRNA SNHG3、PAK1 mRNA表达明显升高,miR-330-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组、共转染组分别相比,LncRNA SNHG3siRNA组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显降低,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均明显升高(均P<0.05);miR-330-5p inhibitor组细胞活力与相对增殖率、细胞Vimentin与PAK1 mRNA表达、侵袭细胞数均明显升高,细胞凋亡率、细胞miR-330-5p、E-cadherin mRNA表达均降低(P<0.05);共转染阴性对照组细胞各指标均无显著差异(P>0.05)。在PC-3细胞中,LncRNA SNHG3可靶向下调miR-330-5p表达。结论 下调LncRNA SNHG3可通过上调miR-330-5p表达而降低PAK1表达,进而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,诱导其凋亡。

姜黄素调控LINC00491/miR-532-3p轴抑制前列腺癌发生发展的机制研究

目的探讨姜黄素调控LINC00491/miR-532-3p轴抑制前列腺癌发生发展的机制。方法取人前列腺癌细胞株22RV1体外培养后分为正常对照组、姜黄素组、姜黄素+si-LINC00491组、姜黄素+si-LINC00491+miR-532-3p inhibitor组。RT-PCR检测LINC00491、miR-532-3p表达水平;双荧光素酶实验检测LINC00491、miR-532-3p的靶向关系;细胞计数试剂盒8(CCK8)、流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭等肿瘤恶性行为;Western blot检测细胞增殖相关KI67、凋亡相关半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)、迁移侵袭相关基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达。取60只BALB/c裸小鼠建立前列腺癌皮下移植瘤模型,将建模成功的裸小鼠随机分为空白对照组、姜黄素组、姜黄素+oe-LINC00491组、oe-LINC00491组、姜黄素+sh-LINC00491组和sh-LINC00491组。观察瘤块大小、侵袭、转移和腹腔播散情况,记录动物生存期;RNA FISH检测LINC00491在原发癌灶和转移癌灶中的定位和表达水平的变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测LINC00491、miR-532-3p表达水平;Western blot检测KI67、Caspase 3、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果姜黄素可抑制前列癌细胞及前列腺癌荷瘤裸小鼠癌组织中LINC00491的表达,促进miR-532-3p的表达,抑制LINC00491表达可加强姜黄素的作用,而下调miR-532-3p的表达可逆转抑制LINC00491表达对姜黄素作用的影响。荧光素酶实验结果显示,LINC00491可靶向调控miR-532-3p的表达。体外细胞实验结果显示,姜黄素可提高人前列腺癌细胞凋亡率,降低细胞迁移和侵袭能力,抑制细胞增殖相关KI67、迁移侵袭相关MMP-2、MMP-9蛋白表达,促进凋亡相关Caspase 3蛋白表达,且下调LINC00491表达可加强姜黄素对前列癌细胞恶性行为及上述蛋白表达的作用,下调miR-532-3p表达可逆转下调LINC00491表达对前列癌细胞恶性行为及上述蛋白表达的作用。动物体内实验结果同样显示,姜黄素可提高前列腺癌荷瘤裸小鼠生存期,抑制肿瘤生长和转移,促进癌组织细胞凋亡,抑制KI67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,促进Caspase 3蛋白表达,且下调LINC00491表达可加强姜黄素对前列腺癌荷瘤裸小鼠癌组织生长、转移及上述蛋白表达的作用。结论动物实验表明,姜黄素可通过靶向调控LINC00491/miR-532-3p轴,抑制KI67、MMP-2、MMP-9表达,促进Caspase 3表达,发挥抑制前列腺癌发生发展的作用。