Tspan1通过诱导细胞自噬拮抗奥沙利铂诱导的结直肠癌细胞凋亡

目的探讨四次跨膜蛋白1(Tspan1)过表达对奥沙利铂(OXA)诱导的人结直肠癌细胞系HCT116细胞凋亡的影响并分析其可能作用机制。方法将Tspan1过表达质粒及其阴性对照空载质粒分别转染至HCT116细胞中,qRT-PCR和Western blot法检测胞中Tspan1 mRNA及其蛋白表达水平。采用14.15μg/mL OXA或联合5 mmol/L自噬抑制剂3-MA干预转染后HCT116细胞,MTT检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡水平;免疫荧光检测细胞中LC-3B蛋白表达情况;Western blot法检测细胞中自噬相关蛋白LC-3、Beclin1和p62蛋白表达水平。结果Tspan1过表达可显著上调HCT116细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平,降低HCT116细胞对OXA的敏感性,抑制OXA诱导的HCT116细胞凋亡,并增强细胞中LC3B蛋白荧光强度,上调细胞中LC-3II/LC-3I比值及Beclin1蛋白表达水平,下调p62蛋白表达水平。然而,联合3-MA处理可逆转Tspan1过表达对OXA诱导HCT116细胞凋亡的抑制作用,提高细胞对OXA的敏感性。结论Tspan1过表达可拮抗OXA诱导的HCT116细胞凋亡,其机制可能是通过诱导细胞自噬来实现的。

沉默Tspan1基因表达通过抑制细胞自噬逆转结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药性

目的:探讨沉默四次跨膜蛋白1(Tspan1)基因表达对结直肠癌(CRC)细胞奥沙利铂(OXA)耐药的影响及作用机制。方法:收集31例OXA化疗敏感(OXA敏感组)和26例OXA化疗耐药(OXA耐药组)的CRC患者肿瘤组织,RT-qPCR和Western blot检测肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。采用OXA浓度递增刺激法建立OXA耐药细胞株HCT116/OXA,MTT法检测耐药细胞株增殖活性,计算半数抑制浓度(IC_(50))和耐药指数(RI);RTqPCR和Western blot检测耐药细胞株及其亲本细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。通过siRNA技术沉默HCT116/OXA细胞中Tspan1基因表达,RT-qPCR和Western blot检测转染后耐药细胞株中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平。采用不同浓度OXA干预转染后的耐药细胞株,MTT法检测细胞增殖活性并计算IC_(50)值,流式细胞术检测细胞凋亡;免疫荧光实验检测自噬指标蛋白LC3B表达情况;Western blot检测细胞中LC3、beclin-1、P62等自噬蛋白的表达水平。结果:与OXA敏感组比较,OXA耐药组患者肿瘤组织中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。不同浓度OXA处理48 h后,耐药细胞株HCT116/OXA及其亲本HCT116细胞的IC_(50)值分别为(101.6±2.7)和(16.0±0.5)mg/L,RI值为6.4。耐药细胞株HCT116/OXA中Tspan1表达水平较其亲本HCT116细胞显著升高(P<0.01)。Tspan1基因沉默可显著降低HCT116/OXA细胞中Tspan1 mRNA和蛋白表达水平及其对OXA的耐药性(P<0.05),提高OXA暴露下HCT116/OXA细胞的凋亡率(P<0.05),降低细胞中LC3B蛋白荧光强度及细胞中LC3-II/LC3-I蛋白比值和beclin-1蛋白表达水平(P<0.05),增加P62蛋白的表达(P<0.05)。结论:沉默Tspan1基因表达可通过抑制细胞自噬逆转结直肠癌细胞OXA耐药。