青蒿素对乳腺癌MT40细胞的生长抑制作用及CD71表达的影响和后遗效应!

目的探讨不同浓度的青蒿素对乳腺癌MT40细胞的生长抑制作用和CD71表达的影响及后遗效应。方法将处于对数生长期的MT40细胞分为20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组及不加任何药物的阴性对照组、10μmol/L丝裂霉素的阳性对照组,采用流式细胞仪检测各组MT40细胞凋亡及细胞周期变化及CD71的表达,绘制各实验组后遗细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,实验重复3次。结果 20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组细胞凋亡率分别为(6.81±1.28)%、(10.55±3.49)%、(17.12±3.73)%、(19.50±3.70)%,阴性对照组为(1.15±0.21)%,阳性对照组为(2.45±0.53)%,青蒿素明显提高MT40细胞凋亡率(均P<0.05)。不同浓度青蒿素作用于MT40细胞后,G0/G1期细胞增加,G2/M及S期细胞减少(均P<0.05)。20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组细胞CD71表达率分别为(57.42±3.45)%、(50.38±3.22)%、(47.23±2.35)%、(43.27±2.86)%,阴性对照组为(62.90±2.41)%,阳性对照组为(60.13±2.89)%,青蒿素抑制了MT40细胞CD71的表达(均P<0.05)。20、40、60、80μmol/L青蒿素实验组后遗细胞生长曲线峰值后移(F=11.86,P<0.01)。各组后遗细胞倍增时间,阴性对照组和阳性对照组均为0.59d,20、40、60、80μmol/L青蒿素组分别为0.61、0.65、0.71、0.78d。结论青蒿素对乳腺癌MT40细胞具有诱导细胞凋亡,阻滞细胞于G0/G1期,下调细胞CD71表达的作用,并具有使MT40细胞倍增时间延长的后遗效应。

XRCC 1基因在乳腺癌中表达的临床意义及其细胞与分子机制

目的:探讨乳腺癌中X线修复交叉互补蛋白1(X-ray repair cross complementing 1,XRCC1)的表达及其与临床病理特征的关系,同时分析XRCC1基因过表达对人乳腺癌MB-231细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法 :采用实时荧光定量PCR法检测XRCC1 mRNA在人乳腺癌细胞系和组织中的表达水平。免疫组织化学法检测XRCC1蛋白在人乳腺癌组织中的表达情况,并统计分析乳腺癌组织中XRCC1表达与患者临床病理特征的关系。转染pcDNA3.1(+)-Flag-XRCC1重组质粒使乳腺癌MB-231细胞中XRCC1的表达上调,然后采用CCK-8法和软琼脂平板克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,FCM法检测细胞周期和凋亡的变化,Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力的变化,蛋白质印迹法检测XRCC1过表达对细胞周期、凋亡和迁移相关蛋白表达的影响。结果 :与正常乳腺上皮细胞相比,XRCC1 mRNA在大多数乳腺癌细胞系中表达水平明显下调(P值均<0.001)。与正常乳腺上皮和配对癌旁组织相比,XRCC1 mRNA和蛋白在人乳腺癌组织中均表达下调(P值均<0.001);同时XRCC1 mRNA的表达水平与乳腺癌患者预后呈正相关性(γ2=0.052,P=0.046),而XRCC1蛋白表达与肿瘤直径、淋巴结转移、组织学分级及TNM分期具有相关性(P值均<0.05)。过表达XRCC1基因后,乳腺癌MB-231细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力均受到明显抑制(P值均<0.01),而且细胞周期被明显阻滞于G1期(P <0.001),细胞凋亡率则明显升高(P <0.001)。XRCC1过表达能促进细胞周期相关蛋白p21、p27、Bax和剪切型caspase 3,以及迁移相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,同时明显下调细胞周期蛋白依赖性激酶4/6(cyclin-dependent kinase 4/6,CDK4/6)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达(P值均<0.001)。结论 :XRCC1在乳腺癌细胞系和组织中表达下调,其表达水平与乳腺癌患者预后呈正相关性。恢复XRCC1基因表达能抑制细胞生长、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡。因此,XRCC1可能作为一个潜在的抑癌基因,参与乳腺癌的发生与发展进程。