情景视频反馈联合PBL在OSBC班心脏外科临床见习教学中的应用

目的探讨情景视频反馈联合以问题为基础的学习(problem-based learning,PBL)在以器官-系统为基础的课程(organ-systems-based curriculum,OSBC)改革实验班学生心脏外科临床见习教学中的应用效果。方法以江汉大学2016级和2018级五年制医学本科OSBC改革实验班学生为研究对象。观察组采用情景视频反馈联合PBL的教学方法进行心脏外科见习带教;对照组采用常规带教方式。见习结束后发放自制的《见习效果满意度调查表》进行问卷调查。见习结束后进行理论考核,循环系统课程结束再进行期末考核,对比两次成绩。采用SPSS 17.0软件对数据进行t检验和卡方检验。结果见习效果满意度调查结果显示,观察组在提高学习兴趣、提高学习效率、提高团队协作能力、提高临床思维能力、提高人际交流沟通能力、提高理论与实践相结合能力、提高主动获取知识能力、提高语言表达能力、提高知识点理解能力、提高成为医生信心10个方面的满意度均高于对照组;且在提高学习效率、提高临床思维能力、提高理论与实践相结合能力方面差异有统计学意义(P<0.05)。两次理论考核成绩观察组[(77.46±4.73)(79.80±7.53)]优于对照组[(70.68±5.16)(75.94±8.16)](P<0.05)。结论情景视频反馈联合PBL能提高OSBC班医学生心脏外科临床见习教学的效果。

盐酸纳美芬缺血后处理通过Sirt1/Nrf2/HO-1轴抑制铁死亡途径减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤

目的研究纳美芬缺血后处理通过激活Sirt1/Nrf2/HO-1轴抑制铁死亡途径减轻肺缺血-再灌注损伤的作用及其机制。方法将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组(I/R)、纳美芬组、纳美芬+EX527组、纳美芬+ML385组、纳美芬+Fe-柠檬酸盐组共6组,每组10只。假手术组大鼠不行缺血再灌注处理,未予药物治疗。I/R组大鼠采用阻断左肺门法建立肺缺血-再灌注模型,未给予药物治疗。纳美芬组大鼠于肺循环再灌注前5 min予尾静脉注射纳美芬(15μg/kg)。纳美芬+EX527组、纳美芬+ML385组、纳美芬+Fe-柠檬酸盐组分别于造模前2 h腹腔注射EX527(5 mg/kg)、ML385(30 mg/kg)、Fe-柠檬酸盐(15 mg/kg),同时在肺循环再灌注前5 min时尾静脉注射纳美芬(15μg/kg)。各组大鼠于再灌注3 h末留取处死后留取左肺上叶组织,检测肺组织湿/干重比值,评估各组大鼠肺组织损伤程度,检测肺组织Fe^(2+)、MDA和TNF-α、IL-6含量、GSH活性以及Sirt1、Nrf2、HO-1、ACSL4、GPX4表达水平。结果与假手术组比较,模型组湿/干重比值、肺组织损伤评分、ACSL4表达水平、Fe^(2+)、TNF-α、IL-6和MDA含量、Sirt1、Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.01),GPX4表达水平及GSH活性显著下降(P<0.01)。与模型组比较,纳美芬组、纳美芬+EX527组湿/干重比值、肺组织损伤评分、ACSL4表达水平、Fe^(2+)、TNF-α、IL-6和MDA含量显著下降(P<0.01),Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平、GPX4表达水平及GSH活性显著增高(P<0.01);其中纳美芬组Sirt1信使RNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.01)而纳美芬+EX527组无显著变化(P>0.05)。纳美芬+ML385组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α、IL-6含量显著下降(P<0.01),Sirt1信使RNA及蛋白表达水平显著增高(P<0.01),Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平、ACSL4和GPX4表达水平、Fe^(2+)、MDA含量和GSH活性无显著变化(P>0.05)。纳美芬+Fe-柠檬酸盐组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α、IL-6、MDA含量显著下降(P<0.01);Sirt1、Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平、GSH活性显著增高(P<0.01);Fe^(2+)含量、ACSL4和GPX4表达水平无显著变化(P>0.05)。与纳美芬组比较,纳美芬+EX527组、纳美芬+ML385组、纳美芬+Fe-柠檬酸盐组湿/干重比值、肺组织损伤评分、ACSL4表达水平、Fe^(2+)、TNF-α、IL-6和MDA含量显著增高(P<0.01)、GPX4表达水平及GSH活性显著下降(P<0.01);纳美芬+EX527组Sirt1、Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01);纳美芬+ML385组Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01),Sirt1信使RNA及蛋白表达水平无显著变化(P>0.05);纳美芬+Fe-柠檬酸盐组Sirt1、Nrf2、HO-1信使RNA及蛋白表达水平无显著变化(P>0.05)。结论盐酸纳美芬缺血后处理可通过激活Sirt1/Nrf2/HO-1轴抑制铁死亡途径减轻肺缺血-再灌注损伤。

盐酸纳美芬缺血后处理通过AMPK/Nrf2/HO-1途径减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤的时效性研究

目的研究纳美芬缺血后处理通过AMPK/Nrf2/HO-1途径减轻肺缺血-再灌注损伤的作用机制及给药时效性。方法将90只大鼠随机(随机数字表法)均分为模型组、纳美芬A、B、C、D、E、F、G组、假手术组共9组,每组10只。模型组大鼠采用阻断左肺门法建立肺缺血-再灌注模型,未予药物治疗。造模后纳美芬A、B、C、D组大鼠分别于肺循环再灌注前5 min、再灌注后10 min、30 min、60 min时予尾静脉注射纳美芬(小剂量组,15μg/kg)。纳美芬E组大鼠于肺循环再灌注后60 min时予尾静脉注射纳美芬(30μg/kg)。纳美芬F、G组大鼠分别于造模前2 h腹腔注射化合物C(20 mg/kg)、ML385(30 mg/kg),同时在肺循环再灌注前5 min时尾静脉注射纳美芬(15μg/kg)。假手术组大鼠不行缺血-再灌注处理,未予药物治疗。各组大鼠于再灌注3 h末处死后均留取左肺上叶组织,通过病理切片观察评估肺组织损伤评分,检测肺组织湿/干重比值,以生化法检测肺组织TNF-α和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,RT-PCR法测定肺组织核因子E2相关因子2((nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf2))mRNA、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HO-1)mRNA表达水平以及Western blot法检测大鼠肺组织AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK(磷酸化AMPK)、Nrf2、HO-1表达水平。结果与模型组比较,纳美芬D组湿/干重比值、肺组织损伤评分、p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、TNF-α和MDA含量、SOD活性差异均无统计学意义(均P>0.05)。与模型组、纳美芬D组比较,纳美芬E组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量下降,差异有统计学意义(均P<0.01),p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、SOD活性增高,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,纳美芬F组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量下降,差异有统计学意义(均P<0.01),Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性增高,差异有统计学意义(均P<0.01),p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。与纳美芬A组比较,纳美芬F组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量增高,差异有统计学意义(均P<0.01),p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。与模型组比较,纳美芬G组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α含量下降,p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平增高,差异有统计学意义(均P<0.01),Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、MDA含量、SOD活性差异均无统计学意义(均P>0.05)。与纳美芬A组比较,纳美芬G组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量增高,差异有统计学意义(均P<0.01),p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05),Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性降低,差异有统计学意义(均P<0.01)。小剂量(15μg/kg)纳美芬缺血后处理各组在湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量方面呈现纳美芬D>纳美芬C>纳美芬B>纳美芬A的特点,在p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、SOD活性方面呈现纳美芬A>纳美芬B>纳美芬C>纳美芬D的特点,上述结果差异均存在统计学意义(均P<0.01)。结论盐酸纳美芬缺血后处理可通过AMPK/Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激,减轻肺缺血-再灌注损伤,此作用具有时效性特点,超过某一特定有效时间窗口时,纳美芬治疗对肺缺血-再灌注损伤可能无效,增大药物剂量可能改变或延长有效时间窗。

盐酸纳美芬缺血后处理抑制TLR2/MyD88/NF-κB p65炎症信号途径减轻大鼠肺缺血-再灌注损伤作用的研究

目的研究纳美芬缺血后处理减轻肺缺血-再灌注损伤的作用机制,探讨全病程中的最佳药物治疗时机。方法将60只大鼠随机均分为假手术组、模型组,以及纳美芬A、B、C、D组共6组,每组10只。假手术组大鼠不行缺血再灌注处理,未予药物治疗。模型组采用阻断左肺门法建立肺缺血-再灌注模型,未予药物治疗。缺血处理后纳美芬A、B、C、D组分别于肺循环再灌注前5 min、再灌注后10、30、60 min时予尾静脉注射纳美芬(15μg/kg)。全部大鼠于再灌注3 h末处死后留取左肺上叶组织,评估各组大鼠肺组织损伤程度,检测肺组织湿/干重比值、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)mRNA、MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65、p-NF-κB p65表达水平。结果模型组和纳美芬A、B、C、D组均可见不同程度的肺泡间隔破坏,肺间质水肿明显、间质内炎症细胞浸润和红细胞渗出,部分肺泡萎陷。在湿/干重比值、肺组织损伤评分、MPO活性和TNF-α、TLR2 mRNA和MyD88 mRNA以及TLR2、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α表达水平等方面,模型组各检测值均显著高于假手术组(均P<0.01);纳美芬D组各检测值与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05),纳美芬缺血后处理各组相应检测值呈现纳美芬D组>纳美芬C组>纳美芬B组>纳美芬A组的特点,差异有统计学意义(P<0.01)。结论纳美芬减轻肺缺血-再灌注损伤与抑制TLR2、MyD88、NF-κB p65表达和NF-κB p65磷酸化,减轻炎症反应密切相关,此作用可能存在给药时间-效应性特点。

大蒜素激活Wnt/β-连环蛋白通路抑制A549肺癌小鼠转移侵袭的研究

目的观察大蒜素对A549肺癌细胞的增殖、侵袭和转移的影响,并探讨其机制。方法体外研究采用CCK-8法测定细胞增殖,黏附试验和侵袭试验测定细胞侵袭能力,划痕试验测定细胞转移能力;体内研究采用观察大蒜素对荷瘤小鼠瘤体积、瘤重、抑瘤率、转移率影响;观察肺组织病理学改变;测定肺组织中β-连环蛋白(β-catenin)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)和Wnt蛋白表达。结果体外结果:大蒜素呈剂量和时间依赖性抑制A549细胞增殖和侵袭、增强黏附能力,低剂量组、中剂量组和高剂量组的侵袭能力抑制率和迁移率分别为(41.55±2.55)%、(65.75±4.65)%和(80.65±4.87)%以及(81.45±4.65)%、(33.65±5.45)%、(27.65±4.54)%。体内结果:大蒜素低、中、高剂量组瘤体积显著低于模型组(t=2.136,P<0.05;t=2.740,P<0.05;t=4.643,P<0.01),瘤重显著低于模型组(t=2.271,P<0.05;t=4.573,P<0.01;t=6.020,P<0.01),抑瘤率呈剂量依赖性,随着剂量增高而增高;大蒜素组肺结节数显著低于模型组(t=3.170,P<0.01;t=5.653,P<0.01;t=7.202,P<0.01);组织学观察显示,大蒜素呈剂量依赖性抑制肿瘤浸润;大蒜素组β-catenin、果蝇无翅基因同源基因(Wnt)蛋白表达显著降低(P<0.05),E-cadherin、N-cadherin表达显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论大蒜素通过激活Wnt/β-catenin信号通路抑制A549肺癌细胞增殖、侵袭和转移,有效抑制小鼠肿瘤生长和肺部转移。

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)联合阿司匹林(ASA)体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10μmol·L-1的ATRA单独及分别联合5,10μmol·L-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果:ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高(P<0.05);RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用(P<0.05)。结论:ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。