S1P通过调控S1PR1对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探究1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)对高糖诱导血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法利用高糖诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤,使用S1P及其1型受体(S1PR1)的小干扰RNA(si-S1PR1)处理细胞。采用qRT-PCR检测S1PR1转录水平以筛选高沉默效率的si-S1PR1用于后续实验,实验细胞分为对照组(NG)、高渗组(L-Glu)、高糖组(HG)、高糖+S1P组(HG+S1P)、高糖+si-NC+S1P组(HG+si-NC+S1P)、高糖+si-S1PR1+S1P组(HG+si-S1PR1+S1P)。应用CCK-8检测细胞增殖活力,划痕法检测细胞迁移能力,成管实验检测细胞血管形成能力,Western blot检测S1PR1及血管功能相关分子VEGF、VE-cadherin、eNOS的蛋白表达水平。结果与对照组相比,高糖组血管内皮细胞的增殖活力、迁移能力和血管形成能力均显著下降,并伴有S1PR1的表达降低(均P<0.01);同时高糖组细胞血管功能相关分子VEGF、VE-cadherin和eNOS的表达水平显著降低(均P<0.01);给予S1P干预后,S1PR1的表达水平及细胞活力、迁移和血管形成能力均显著回升,同时VEGF、VE-cadherin和eNOS蛋白表达水平亦显著增加(均P<0.01);而以si-S1PR1下调S1PR1表达则抵消了S1P对内皮细胞活力、迁移能力、血管形成能力及功能相关蛋白表达的恢复作用(均P<0.01)。结论S1P通过S1PR1上调血管功能相关分子VEGF、VE-cadherin、eNOS等的表达,对高糖环境下的血管内皮细胞发挥保护作用。

黄芪对心肌细胞缺氧时的作用研究

目的 :探讨心肌细胞缺氧时黄芪的保护作用及其机制。方法 :将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为五组 :正常对照组 (N组 )、缺氧对照组(H组 )、缺氧加黄芪组 1(A1组 )、缺氧加黄芪组 2 (A 2组 )、缺氧加黄芪组3 (A3组 )。A 1组、A2组、A 3组于缺氧前加入黄芪 ,黄芪的终浓度分别为10mg/ml、10 0mg/ml、10 0 0mg/ml,缺氧 3 0min ,观察心肌细胞内超氧化物歧化酶 (SOD )活性和上清液中丙二醛 (MDA )、肌酸磷酸激酶 (CK )含量的变化。结果 :与正常心肌细胞相比 ,缺氧 3 0min ,培养上清液中MDA和CK浓度显著升高 (P <0 .0 1) ,且心肌细胞内SOD活性降低 (P <0 .0 1)。与H组比较 ,A 2组、A 3组提高SOD活性 ,MDA、CK水平降低 (P <0 .0 5 ) ,但是均未恢复正常 (P <0 .0 1～ 0 .0 5 )。结论 :一定浓度的黄芪可能通过抗氧自由基、稳定细胞膜来减少缺氧心肌细胞损伤 ,但该作用并非与浓度正相关。

社区高血压患者自主神经功能检测及其价值研究

背景高血压严重威胁人类健康,高血压的发生与交感神经过度激活及自主神经功能失调相关,而目前对社区人群自主神经功能检测的研究较少。目的探讨社区人群自主神经功能受损与高血压发病与血压控制的关系。方法随机选取2017年6月—2019年6月在社区卫生服务中心完成24 h动态心电图检查的120例高血压患者和100例非高血压人群为研究对象。高血压患者根据血压达标情况分为血压控制组(n=67)和血压未控制组(n=53)。分析高血压患者与非高血压人群、血压控制组和血压未控制组患者心率变异性参数,包括全部窦性RR间期的标准差(SDNN)、每5分钟窦性RR间期均值标准差(SDANN)、全程相邻RR间期差值的均方根(rMSSD)、全部相邻的RR间期差值大于50 ms的百分数(pNN50)、极低频(VLF)、低频(LF)、高频(HF)、LF/HF及非特异性ST-T改变情况。采用多因素Logistic回归分析高血压及血压控制的危险因素。结果高血压组rMSSD、VLF、LF、HF值低于非高血压组,差异有统计学意义(P<0.05)。校正性别、年龄、体质指数、吸烟及冠心病病史后,多因素Logistic回归分析结果显示rMSSD、VLF值降低是高血压的危险因素(P<0.05)。血压未控制组联合用药占比高于血压控制组,rMSSD、pNN50、HF、VLF、LF值低于控制组,差异有统计学意义(P<0.05)。校正性别、年龄、体质指数、吸烟及冠心病病史后,多因素Logistic回归分析结果显示rMSSD、PNN50、VLF降低和非特异性ST-T改变是高血压控制不达标的危险因素(P<0.05)。结论自主神经功能受损是社区高血压及血压控制的危险因素,用动态心电图评估自主神经功能状态具有一定预测价值。

基于钙超载探讨自主神经调控对HFpEF大鼠心肌结构重塑、电重塑及纤维化的影响

目的 探究自主神经调控对大鼠射血分数保留心力衰竭(HFpEF)模型结构重塑、电重塑及纤维化的影响。方法 SPF级12周龄SD大鼠44只,抽取10只作为对照组,余34只用于建立HFpEF模型。通过腹主动脉-下腔静脉瘘结扎的方式构建HFpEF模型。其中30只建模成功,4只死亡。建模成功的大鼠分为模型组、自主神经调控组(调控组)及自主神经调控+乙酰胆碱M2受体拮抗剂组(调控+拮抗组),每组10只。调控组在模型组基础上经皮耳缘迷走神经刺激。调控+拮抗组在调控组基础上每天经尾静脉注射美索曲明(0.5 mg/kg)。通过心脏超声仪测量心脏舒张末期左心室后壁厚度(LVPWD-D)、舒张末期室间隔厚度(IVS-D)及二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A)。心脏电生理刺激仪获取心脏的有效不应期(ERP)、单向动作电位时程(MAPD)。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测B型尿钠肽前体(NT-proBNP)水平。HE染色观察心肌细胞排列及炎性细胞浸润情况。Masson染色观察心肌纤维化程度。RT-PCR和Western blot检测心肌组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)及其调节蛋白受磷蛋白(PLB)mRNA及蛋白的表达。结果 HE染色可见模型组心肌细胞排列紊乱,细胞间隙不够明显,伴有炎性细胞浸润。Masson染色可见模型组心肌纤维排列紊乱,大量胶原纤维生成。调控组上述病理改变与模型组比较均明显减轻,而调控+拮抗组与模型组相比无明显改善。与对照组比较,模型组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均升高,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组比较,调控组NT-proBNP、LVPWD-D、IVS-D、ERP、MAPD、MMP-9 mRNA及蛋白、PLB mRNA及蛋白表达均降低,E/A、TIMP-1 mRNA及蛋白、SERCA2a mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05)。而调控+拮抗剂组上述指标与模型组比较差异无统计学意义。结论自主神经调控可能通过钙超载途径减轻HFpEF大鼠的结构重塑、电重塑以及心肌纤维化状态,改善HFpEF预后。

miR-153通过靶向SORBS2促进LPS诱导的心肌H9C2细胞损伤

目的:研究微小RNA-153(miR-153)对脂多糖(LPS)诱导的胚胎大鼠心肌H9C2细胞的炎症因子、细胞活力及凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用LPS建立H9C2细胞损伤模型;将细胞分为anti-miR-Con组(转染anti-miR-Con)、anti-miR-153组(转染anti-miR-153)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-SORBS2组(转染pcDNA-SORBS2)、anti-miR-153+si-Con组(共转染anti-miR-153和si-Con)和anti-miR-153+si-SORBS2组(共转染anti-miR-153和si-SORBS2),转染后用LPS处理。RT-qPCR法检测细胞中miR-153和SORBS2 mRNA的表达;MTT法检测细胞活力;Western blot检测细胞中SORBS2的蛋白表达;ELISA实验检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的含量;流式细胞术检测细胞凋亡;双萤光素酶报告基因实验验证miR-153与SORBS2的靶向关系。结果:成功构建LPS诱导的H9C2细胞损伤模型;与对照的PBS组相比,LPS处理后H9C2细胞中miR-153的表达明显升高,SORBS2的表达明显降低;敲减miR-153表达或过表达SORBS2均可减少LPS诱导的TNF-α和IL-6释放及细胞凋亡,提高细胞活力;miR-153可抑制含野生型SORBS2的H9C2细胞的萤光素酶活性;敲减SORBS2的表达可逆转抑制miR-153对LPS诱导H9C2细胞的抗炎、抗凋亡及提高细胞活力的作用。结论:miR-153可促进LPS诱导的H9C2细胞炎症因子分泌和凋亡,抑制细胞的活力,发挥促进损伤的作用,其作用机制与靶向SORBS2有关。SORBS2可能成为心肌损伤治疗的新靶点。

苯甲酸钠预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的探讨苯甲酸钠(NaB)预处理对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的作用及相关机制。方法SD大鼠随机分为3组:假手术(Sham)组,I/R组和I/R+NaB组,I/R+NaB组利用NaB预处理,术后24 h检测各组大鼠心肌梗死面积;心电图测定ST段波幅;自动生化分析仪检测大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌钙蛋白(cTn)I及cTnT水平;流式细胞仪、DAPI、Tunel染色检测心肌细胞凋亡水平;Western印迹检测凋亡蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、胞质核因子(NF)-E_(2)相关因子(Nrf)2、胞核Nrf2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;免疫组织化学染色观察p-Akt、HO-1蛋白表达。结果I/R组梗死面积显著高于Sham组,I/R+NaB组梗死面积显著低于I/R组(P<0.05);I/R组ST段波幅显著高于Sham组,I/R+NaB组ST段波幅显著低于I/R组(P<0.05)。I/R组大鼠血清LDH、CK-MB、cTnI及cTnT水平显著高于Sham组(P<0.05),I/R+NaB组大鼠血清LDH、CK-MB、cTnI及cTnT水平显著低于I/R组(P<0.05)。I/R组心肌细胞凋亡率显著高于Sham组(P<0.05),I/R+NaB组心肌细胞凋亡率显著低于I/R组(P<0.05)。I/R组阳性细胞率显著高于Sham组和I/R+NaB组(均P<0.05)。I/R组caspase-3和Bax蛋白显著高于Sham组,Bcl-2蛋白显著低于I/R组(均P<0.05),I/R+NaB组caspase-3和Bax蛋白显著低于I/R组,Bcl-2蛋白显著高于I/R组(均P<0.05)。p-Akt、胞核Nrf2及HO-1蛋白表达I/R+NaB组>I/Rxeg>Sham组(均P<0.05)。结论NaB预处理能有效抑制I/R损伤后心肌细胞凋亡,可能是通过促进Akt/Nrf2通路发挥作用。

ST段压低型患者血清Lp(a)及apoB/apoA-1与冠脉狭窄程度的相关性

目的探讨Lp(a)、apoB/apoA-1对ST段压低型患者冠脉病变严重程度的预测价值。方法回顾性分析2020年1月至2023年6月于武汉市第四医院心血管内科住院并接受冠状动脉造影检查,筛选合并心电图ST段压低患者共163名。同期选取70例非冠心病患者且心电图无异常作为对照组。根据冠状动脉造影结果,将实验组分成轻、中、重度三组,比较三组的临床资料。采用二元多因素logistics回归分析中重度患者的独立危险因素。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析Lp(a)、apoB/apoA-1比值对中重度患者的诊断价值。结果(1)实验组与对照组之间年龄、高血压史、Lp(a)、UA、apoB、apoA-1、apoB/apoA-1比值、LDL-C、TG差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)对于符合正态分布且同时满足方差齐性组间采用单因素方差分析,反之采用非参数检验,结果发现不同组的年龄、糖尿病史、Lp(a)、apoB、apoA-1、apoB/apoA-1比值、TC、TG水平差异具有统计学意义。其中Lp(a)、ApoB/ApoA-1比值二者均呈现出轻度狭窄<中度狭窄<重度狭窄。(3)将ST段压低型患者分为轻度狭窄、中重度狭窄组,运用二元多因素logistics回归分析两组间的差异,结果发现Lp(a)、apoB/apoA-1是影响中重度狭窄患者的冠脉病变程度的独立影响因素。(4)ROC曲线分析,Lp(a)、apoB/apoA-1在诊断ST压低型患者中重度狭窄病变时具有很高的价值,Lp(a)、apoB/apoA-1的AUC分别为0.818、0.862,敏感度为0.670、0.825,特异度为0.879、0.758(P<0.001),约登指数最大时分别对应的数值为24.50、0.785。结论Lp(a)、apoB/apoA-1对ST段压低型患者的冠脉病变具有一定的诊断和预测价值,为临床诊断冠状动脉粥样硬化提供一种简便、经济、全新的诊疗策略。

经皮耳缘迷走神经刺激对大鼠射血分数保留性心力衰竭模型心肌结构重塑和电重塑及凋亡的干预作用

目的 观察经皮耳缘迷走神经刺激对大鼠射血分数保留性心力衰竭模型心肌结构重塑、电重塑及凋亡的干预作用,并探讨这种作用与氧化应激反应的关系。方法 通过对SD大鼠建立动静脉瘘后2周使用结扎的方法封闭动静脉瘘,在短期内增加心脏容量负荷从而构建大鼠射血分数保留性心力衰竭模型。40只大鼠随机分为4组,每组各10只:假手术组、腹主动脉-下腔静脉瘘+封闭组(AVF+L)、腹主动脉-下腔静脉瘘+封闭+经皮耳缘迷走神经刺激组(AVF+L+tVNS)及腹主动脉-下腔静脉瘘+封闭+经皮耳缘迷走神经刺激+乙酰胆碱M_(2)受体拮抗剂使用组(AVF+L+tVNS+M-)。AVF+L+tVNs组在AVF+L基础上进行经皮耳缘迷走神经刺激。AVF+L+tVNS+M-组在AVF+L+tVNs组基础上每天尾静脉注射乙酰胆碱M_(2)受体拮抗剂美索曲明(0.5 mg/kg)。通过心脏超声仪和心脏电生理刺激仪获得各组大鼠心脏结构重塑及电重塑的相关参数。酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠B型尿钠肽前体(NT-proBNP)及氧化应激相关指标的值。苏木素伊红(HE)染色观察心肌结构破坏、细胞排列紊乱及炎性细胞浸润情况。缺口末端标记法(TUNL)、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)法检测心肌B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(BCL-2)、BCL-2基因家族中细胞凋亡促进基因(BAX)mRNA及蛋白的表达。结果 AVF+L组大鼠出现以心室壁肥厚及舒张功能不全为特征性的心力衰竭,且左心室射血分数(LVEF)均>50%,考虑大鼠射血分数保留性心力衰竭模型构建成功。HE染色提示AVF+L组大鼠心肌组织结构破坏、细胞排列紊乱及炎性细胞浸润明显,而AVF+L+tVNs组大鼠较AVF+L组心肌组织病理改变均明显缓解。与AVF+L组比较,AVF+L+tVNs组大鼠NT-proBNP值降低[(301.25±16.07)ng/L比(79.33±5.63)ng/L,P<0.05]、E/A值升高(1.28±0.06比1.66±0.05,P<0.05)、BCL-2 mRNA的表达升高[0.08(0.07,0.08)比0.70(0.64,0.76),P<0.05]及BCL-2蛋白的表达升高(0.19±0.03比0.46±0.04,P<0.05)、BAX mRNA的表达降低(5.00±0.32比2.14±0.36,P<0.05)及BAX蛋白的表达降低(0.76±0.04比0.43±0.05,P<0.05)、凋亡指数亦降低(16.26±0.32比7.04±0.24,P<0.05)。并且与AVF+L组比较,AVF+L+tVNs组大鼠心肌结构重塑、电重塑及氧化应激相关指标均降低(P<0.05)。与AVF+L组比较,AVF+L+tVNS+M-组大鼠上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论 tVNS可缓解HFpEF大鼠的心肌结构重塑、电重塑及凋亡状态,这种效应可能与降低氧化应激反应活性相关。

E-选择素基因多态性和Ghrelin/Obestatin与NLR及PA与冠心病合并肺部感染的关联

目的 分析冠心病合并肺部感染患者E-选择素基因多态性、胃饥饿素(Ghrelin)/肥胖抑制素(Obestatin)、中性粒细胞淋巴细胞计数比值(NLR)、前白蛋白(PA)。方法 前瞻性将2018年1月-2022年9月武汉亚心总医院收治的冠心病合并肺部感染患者403例纳入感染组,冠心病未合并肺部感染患者416例纳入未感染组。分析两组临床资料、E-选择素第二外显子+G98T和第四外显子+A561C的基因多态性、血液指标及冠脉损伤程度,通过Pesrson相关性分析法分析血液指标与冠脉损伤程度的相关性。结果 感染组舒张压(DBP)、收缩压(SBP)高于未感染组(P<0.05);两组E-选择素第二外显子+G98T和第四外显子+A561C基因多态性比较,TT型、CC型未检测到,感染组G98T GG型、A561C AC型频率更低,G98T GT型、A561C AA型频率更高(P<0.05);感染组血清E-选择素、NLR水平、Gensini积分高于未感染组(P<0.05),血清Ghrelin/Obestatin、PA水平低于未感染组(P<0.05);E-选择素、NLR与Gensini积分呈正相关(r=0.808、0.780,P<0.05),PA、Ghrelin/Obestatin与Gensini积分呈负相关(r=-0.615、-0.628,P<0.05)。结论 冠心病合并肺部感染患者E-选择素第二外显子+G98T和第四外显子+A561C的基因型分布存在差异,E-选择素、Ghrelin/Obestatin、NLR、PA表达异常,且与患者冠脉损伤程度密切相关,可能作为冠心病合并肺部感染临床诊治的靶点。

心可舒片联合盐酸地尔硫卓片治疗老年冠心病心绞痛的临床研究

目的:探讨心可舒片联合盐酸地尔硫卓片治疗老年冠心病心绞痛的临床疗效。方法:按照随机数字表法将湖北民族大学附属民大医院和武汉市江夏区第一人民医院2019年4月-2021年9月间收治的98例老年冠心病心绞痛患者分为对照组(盐酸地尔硫卓片治疗,n=49)和观察组(心可舒片联合盐酸地尔硫卓片治疗,n=49)。观察两组疗效、心绞痛缓解情况、血脂指标、血管内皮功能指标、心功能指标、血液流变学指标和不良反应发生情况。结果:观察组的临床总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗4周后,与对照组相比,观察组的心绞痛发作频率减少,全血黏度、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、内皮素-1(ET-1)、血浆比黏度、左室收缩末期内径(LVESD)、红细胞压积更低,一氧化氮(NO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、左心室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)更高,心绞痛发作持续时间缩短(P<0.05)。两组不良反应发生率对比无差异(P>0.05)。结论:心可舒片联合盐酸地尔硫卓片治疗老年冠心病心绞痛,可缓解心绞痛症状,改善血液流变学、心功能、血脂和血管内皮功能。