弥漫性恶性胸膜间皮瘤6例临床病理分析

目的探讨弥漫性恶性胸膜间皮瘤(MPM)的临床病理学特征。方法回顾性分析6例弥漫性MPM的临床、影像、病理学特征及免疫表型等,并复习相关文献。结果6例MPM中男性3例,女性3例,平均年龄48.3岁,患者以胸痛或胸闷为主诉。影像学均显示胸膜环状增厚、胸腔积液。胸腔积液乳酸脱氢酶(LDH)有5例升高,平均(380.33±196.56)U/L(范围106~245 nU/L),总蛋白6例均升高,平均(48.48±11.46)g/L(范围0~25 g/L),腺苷脱氨酶(ADA)均正常,平均(17.4±4.05)U/L(范围0~40 U/L)。确诊前均按结核性胸膜炎治疗。标本获得方式包括手术部分切除(3/6例)和胸腔镜下活检(3/6例)。大体显示胸膜表面广泛分布大小不一白色或略透明桑葚样结节。镜下组织学亚型均为上皮样型,表现为肿瘤细胞排列成不等比例的管状、乳头状、腺泡状、实性片状或微乳头状,肿瘤细胞呈卵圆形或多边形,胞质嗜酸、丰富,泡状核,可见小核仁。免疫组化结果显示Calretinin、WT-l、CK5/6、D2-40均为阳性,NapsinA、TTF-1、P40均为阴性,4例显示BAP1核缺失表达。结论弥漫性MPM少见,恶性度高,容易误诊为结核等疾病,病理形态学结合相关免疫组化标记可明确诊断。

自噬在双酚A诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

目的 探究自噬在双酚A(bisphenol A,BPA)诱导的小鼠睾丸支持细胞株(TM4细胞)凋亡中的作用。方法 用不同浓度的BPA(0、20、40、80、160、320μmol/L)暴露TM4细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活性。用不同浓度的BPA(0、25、50、100μmol/L)、100μmol/L BPA联合自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)或抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)暴露TM4细胞24 h后,采用MDC染色法和TUNEL染色法分别观察TM4细胞自噬和凋亡情况,采用Western blot法检测细胞内LC3-Ⅱ、Atg5、P62、Bax、Bcl-2及Cleaved Caspase-3等自噬和凋亡相关蛋白的表达情况。结果 与对照组比较,不同浓度BPA暴露TM4细胞的存活率和Bcl-2蛋白的表达量均降低,而LC3-Ⅱ、Atg5、P62、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达量及Bax/Bcl-2值均升高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着BPA暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率和Bcl-2蛋白的表达量均呈下降趋势,而LC3-Ⅱ、Atg5、P62、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达量及Bax/Bcl-2值均呈上升趋势。与对照组比较,BPA组、BPA+CQ组及BPA+Rap组TM4细胞的Bcl-2蛋白表达量显著降低,而LC3-Ⅱ、P62、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2值显著升高,同时TM4细胞的凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与BPA组比较,BPA+CQ组TM4细胞的Bcl-2蛋白表达量显著降低,而LC3-II、P62、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2值显著升高,同时TM4细胞的凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);与BPA组比较,BPA+Rap组TM4细胞的Bcl-2蛋白表达量显著升高,而LC3-II、P62、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2值显著降低,同时TM4细胞的凋亡率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BPA诱导的TM4细胞凋亡可能是自噬流阻滞导致的,自噬流的通畅在BPA对TM4细胞的毒性损伤中可能发挥拮抗作用。

PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路在双酚A诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡中的作用

目的探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对小鼠睾丸支持细胞(mouse testicular sertoli cells,TM4细胞)增殖和凋亡的影响及PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路在其中的作用。方法用不同浓度BPA(0、25、50和100μmol/L)及100μmol/L BPA联合蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)抑制剂GSK2656157处理TM4细胞24 h后,利用TUNEL染色观察TM4细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3,内质网应激相关蛋白GRP78及PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路相关蛋白的表达情况。结果25、50和100μmol/L BPA染毒组TM4细胞的凋亡率分别增加为3.31%±0.34%、7.51%±1.10%和14.58%±0.91%,显著高于对照组的0.73%±0.03%(P<0.05);与对照组(1.00)相比,25、50和100μmol/L BPA染毒组TM4细胞的cleaved Caspase-3蛋白表达量分别升高为1.49±0.11、1.59±0.12和2.42±0.24,Bax/Bcl-2比值分别升高为2.06±0.19、3.94±0.34和6.14±0.71,GRP78蛋白表达量分别升高为1.29±0.06、1.39±0.06和1.92±0.17,p-PERK蛋白表达量分别升高为1.64±0.03、2.52±0.09和2.80±0.11,p-eIF2α蛋白表达量分别升高为1.79±0.05、2.48±0.10和4.77±0.32,ATF4蛋白表达量分别升高为2.51±0.03、3.24±0.14和7.45±0.51,CHOP蛋白表达量分别升高为1.44±0.01、3.20±0.11和3.80±0.11,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与100μmol/L BPA染毒组相比,100μmol/L BPA+10μmol/L GSK2656157组p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、cleaved Caspase-3蛋白表达量及Bax/Bcl-2比值分别降低为2.17±0.11、1.81±0.13、1.71±0.23、2.18±0.22、1.43±0.03和2.22±0.13,TM4细胞的凋亡率也显著降低为7.28%±0.47%,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论BPA通过激活内质网应激并调控PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路诱导TM4细胞发生凋亡。

KEAP1/PGAM5/AIFM1介导的氧死亡途径参与磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯暴露致小鼠睾丸支持细胞活力降低的机制

目的探讨磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯[tri(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate,TDCIPP]暴露对小鼠睾丸支持细胞(TM4细胞)的毒性作用及其潜在作用机制。方法分别用不同浓度的TDCIPP(0、12.5、25和50μmol/L)以及50μmol/L TDCIPP联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)处理TM4细胞24 h,CCK8法检测细胞活力,DCFH-DA探针法检测细胞内ROS水平,Western blot法检测细胞内氧死亡通路相关蛋白如KEAP1、PGAM5、AIFM1和磷酸化AIFM1(p-AIFM1)蛋白质水平。结果TDCIPP以剂量依赖方式降低了TM4细胞活力(P<0.05);12.5、25和50μmol/L TDCIPP染毒组TM4细胞ROS水平分别为9.44±1.42、17.25±1.81和18.38±2.66,显著高于对照组的5.08±0.90(P<0.05);5 mmol/L NAC+50μmol/L TDCIPP组TM4细胞ROS水平为14.70±0.50,显著低于TDCIPP组的26.44±0.73(P<0.05)。KEAP1siRNA+TDCIPP组和PGAM5siRNA+TDCIPP组的TM4细胞活力分别为77.00±1.73和76.67±1.53,显著高于TDCIPP组的68.67±1.53(P<0.05)。25和50μmol/L TDCIPP染毒组TM4细胞的KEAP1蛋白相对表达量分别为0.77±0.04和0.82±0.02,显著高于对照组的0.57±0.01(P<0.05);TDCIPP染毒组TM4细胞PGAM5蛋白相对表达量分别为1.17±0.04、1.38±0.03和1.41±0.03,显著高于对照组的0.81±0.02(P<0.05);AIFM1蛋白相对表达量分别为0.42±0.01、0.63±0.01和0.68±0.02,显著高于对照组的0.34±0.02(P<0.05);p-AIFM1蛋白相对表达量分别为1.73±0.02、1.52±0.02和0.73±0.01,显著低于对照组的2.25±0.02(P<0.05)。5 mmol/L NAC+50μmol/L TDCIPP组TM4细胞的KEAP1、PGAM5和AIFM1蛋白相对表达量分别为0.61±0.01、0.58±0.01和0.48±0.03,显著低于TDCIPP组的0.86±0.12(P<0.05)、0.74±0.02(P<0.05)和0.92±0.01(P<0.05);p-AIFM1蛋白相对表达量为0.45±0.11,显著高于TDCIPP组的0.23±0.01(P<0.05)。结论TDCIPP诱导TM4细胞活力降低可能与ROS介导的KEAP1/PGAM5/AIFM1通路调控细胞发生氧死亡有关。

二硫苏糖醇处理对肺结核患者肺泡灌洗液中淋巴细胞亚群检测的影响

肺结核患者肺泡灌洗液(BALF)中常含有絮状物与黏液,以往使用纱布过滤会造成细胞损失。二硫苏糖醇(DTT)可用于处理BALF黏液,有助样本液化与细胞分散,但其对免疫细胞活率和表面标志物的影响罕见报道。本研究设置浓度梯度DTT对结核患者BALF进行预处理,结果显示0.05%终浓度DTT处理肺结核患者BALF时,可在分散细胞同时,不影响细胞活率及淋巴细胞抗原流式检测。