树疫病防控标杆 促畜禽种业发展

2012年,武汉市就加快推进现代农业发展提出了"打造中部种都"的战略目标。在新形势下,畜禽种业迎来了前所未有的机遇和挑战。现实挑战主要存在于:省市周边动物疫情错综复杂,畜禽种业健康发展难度不断加大;全市畜禽养殖业规模化程度逐年扩增,各区疫病防控体系建设步伐较缓。因此,针对以上现实问题,笔者等特提出如下对策:一是通过夯实龙头企业疫病防控,以点带面,促进武汉市畜禽种业整体健康发展;二是通过项目建设,建立健全疫病防控体系,保障畜禽种业良好发展。

武汉市蛋鸡养殖业存在的主要问题及对策解析

该文通过调查了解武汉市蛋鸡养殖业容易出现的问题,并从养殖成本、市场行情、政策导向、风险抵御等方面进行了剖析,提出了相应的解困对策。

种畜禽场重大动物疫病定点监测情况分析

2012年对武汉市6个新城区的17个种畜禽场进行了重大动物疫病的抗体监测,结果发现:全市高致病性禽流感与鸡新城疫免疫效果良好,整体抗体水平均保持在部颁标准(群体免疫抗体合格率大于70%)之上;而高致病性猪蓝耳病、猪瘟与牲畜O型口蹄疫免疫抗体水平相对较差,且整体抗体水平表现不稳定。表明武汉市畜禽重大动物疫病整体免疫效果良好,但局部地区仍存在一定免疫漏洞。

液相芯片技术同时检测对虾桃拉病毒和虾黄头病毒的研究

为建立一种同时检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中对虾桃拉病毒的CP2基因和虾黄头病毒的N基因进行序列分析,设计对虾桃拉病毒、虾黄头病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。该检测体系对对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒核酸检测灵敏度高,其最低检测限为100pg,且与白斑病毒、鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒核酸等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,为同时快速检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒提供了简捷快速的技术手段。

病毒性出血性败血症病毒液相芯片检测技术的建立

为建立检测病毒性出血性败血症病毒(VHSV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中VHSV的G基因进行序列分析,设计VHSV特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰并与荧光编码微球偶联后与VHSV RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。结果表明液相芯片检测体系能够正确检出VHSV。病毒核酸的最低检出量为10pg,检测特异性高,说明初步建立了检测VHSV的液相芯片技术,为VHSV的检测提供了新方法。

稳定转染CD151或CD163的Marc145细胞系的建立及其在PRRS疫苗生产中的应用

为了进一步探讨提高PRRSV感染靶细胞滴度的有效方法,本研究采用脂质体介导方法,通过G418筛选稳定转染Marc145细胞,并利用单个细胞克隆技术,获得了稳定超表达CD151蛋白和(或)CD163蛋白的Marc145细胞株,经免疫荧光化学和Western Blot鉴定证实,成功表达出基因重组猪CD151蛋白和CD163蛋白。在GMP生产车间将超表达CD151、CD163蛋白或CD151/CD163蛋白共表达的Marc145细胞感染PRRSV,使病毒感染滴度提高了10倍以上。将上述收获的病毒液制备了灭活苗,疫苗效力超过部颁标准。

新生猪骨髓间充质干细胞衍生细胞的分离、培养及生物学特性分析

利用骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)治疗疾病已经逐渐成为现实,但是作为被移植的种子细胞,BMSCs体外传代能力非常有限,种子细胞来源极为贫乏。本研究通过差速贴壁筛选的方法分离出一种猪BMSCs的衍生细胞株,命名为猪骨髓间充质干细胞衍生细胞(Bone mesenchymal stem-derived cells,BMSDCs)。分别对BMSDCs与BMSCs细胞进行细胞生物学特性分析,探讨其体外诱导分化特性,并应用流式细胞术测定细胞表面标记物。结果表明,BMSC和BMSDCs细胞倍增时间分别为31.3 h和30.3 h,平均传代时间分别为3-5 d和2-3 d;两种细胞均阳性表达CD34、CD90,阴性表达CD44、CD45;经体外诱导后均可分化为成脂细胞和成肌细胞。在传代能力上,前者可传代15至20次,后者可长期传代(200次以上)且维持正常染色体特征。研究认为在适宜的实验条件下,体外培养的猪骨髓间充质干细胞的衍生细胞——BMSDCs能够稳定生存增殖并维持BMSCs多向分化潜能,可作为组织工程的理想种子细胞。

矿物质缺乏对家禽生理功能的影响

家禽所需的钙质约99％用于构成骨骼和蛋壳。其余分布于细胞和体液中，对维持神经、肌肉、心脏的正常生理功能及体内酸碱平衡，促进伤口血液凝固等具有重要作用。

PRRS病毒主要受体蛋白CD151和CD163真核表达载体的构建

为了进一步研究PRRSV与细胞受体之间的相互作用机理,通过基因工程方法从PAM细胞中克隆获得了CD151和CD163全长编码片段,利用Sal I和Kpn I内切酶对回收得到的CD151(762 bp)和CD163(3 333 bp)DNA片段进行酶切,构建了p IRES2-EGFP-CD151和p IRES2-EGFP-CD163真核表达载体。经PCR和酶切鉴定后,分别提取重组质粒进行细胞转染。荧光显微镜下可见单独转染CD151和CD163基因或CD151/CD163共转染的Marc 145细胞表达强烈的绿色荧光,Western blot分析结果进一步证实,CD151和CD163蛋白在转染后的细胞中获得超表达。猪CD151和CD163真核表达载体的成功构建为进一步探索CD151和CD163在PRRSV感染细胞过程中的协同作用提供了物质基础,特别是对深入研究PRRS病毒的入侵及宿主识别具有重要意义。

初生仔猪固定乳头有讲究

母猪是养猪生产的基础，提高母猪生产能力是提高养猪生产效益的前提，母猪的生产能力主要由年产仔窝数与窝断奶仔猪头数两部分决定，其中年产仔窝数是由母猪繁殖周期的长短决定的，窝断奶仔数是由窝产活仔数和断奶成活率决定的，而做好初生仔猪固定乳头工作是保证断奶成活率的关键。在养猪生产实践中，给初生仔猪固定乳头则需要综合考虑母猪的泌乳特点、仔猪的吃乳习性和仔猪的用途等因素。

奶牛结核病和布鲁氏菌病的防制

奶牛结核病和布鲁氏菌病(以下简称"两病")是严重危害人类健康和畜牧业生产发展的人畜共患病,是近年来人感染"两病"的重要来源之一。虽然国家出台了有关政策要求规范控制奶牛"两病",但是防制效果不理想,近些年"两病"又有抬头蔓延之势。笔者结合工作实践,简要分析了奶牛"两病"难以控制的原因,提出了一些对策,以期早日实现奶牛"两病"的净化,确保奶牛健康养殖,不出现因"两病"引起的公共卫生安全事件。

副猪嗜血杆菌反应调节因子CpxR自杀性质粒的构建

以副猪嗜血杆菌双组分信号转导系统CpxA/R中反应调节因子CpxR为研究对象,成功构建自杀性质粒ΔpEM-CpxR,这就为构建副猪嗜血杆菌CpxR突变株以及探究CpxA/CpxR双组分信号转导系统调控副猪嗜血杆菌分子致病机制提供了基础。

母猪与仔猪PRRS免疫程序的观察与分析

试验旨在观察南堰猪场母猪与仔猪的PRRS免疫程序。选取15日龄乳猪、25～79日龄保育猪、产后15d及产后25d的母猪,采用猪蓝耳病毒ELISA抗体检测法,检测其母源抗体与免疫抗体水平,其中25日龄仔猪的PRRS母源抗体合格率仅41.3%,而接种高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗后14d具有可靠保护力。因此,该场仔猪的PRRS免疫程序需要调整,免疫接种时间可提前到15日龄。产后25d的断奶母猪即免疫高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗后146d免疫抗体合格率为100%,说明所选用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫保护期达5个月。因此,采用母猪断奶时接种该疫苗的跟胎免疫法切实可行。

胸膜肺炎放线杆菌flp基因缺失菌株的构建及生物学特性

flp（fimbrial low-molecular-weight protein）操纵子由13~15个基因组成,在细菌中广泛存在,主要编码一种类菌毛（Flp菌毛）的束状纤维蛋白,与细菌在宿主中的黏附和定植有关。本试验利用同源重组技术获得了无抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清Ⅰ型4074菌株的flp基因缺失菌株,通过对基因缺失菌株进行一系列的生物学特性研究,探索胸膜肺炎放线杆菌的flp基因功能。结果表明,flp基因的缺失不会对胸膜肺炎放线杆菌在体外的生长和其溶血活性产生明显影响,但能导致猪胸膜肺炎放线杆菌4074菌株丧失形成菌毛的能力;以小鼠为模型的动物试验结果显示,基因缺失菌株的致病力较亲本菌株有所降低。