微小RNA-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的调控作用

目的 检测微小RNA(miRNA,miR)-26a在三阴性乳腺癌中的表达并观察miR-26a对三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法 通过对三阴性乳腺癌及癌旁组织样本进行miRNA测序,筛选出癌组织及癌旁组织中差异表达的miRNAs。应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测miR-26a在三阴性乳腺癌组织样本及细胞株中的表达。采用Transwell小室法及划痕实验检测miR-26a对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 miRNA测序分析,共21个miRNAs在三阴性乳腺癌组织及癌旁组织中存在差异表达,其中12个miRNAs在癌组织中表达上调,包括miR-26a在内的9个miRNAs在癌组织中表达下调。在9例三阴性乳腺癌手术切除标本中,癌组织中miR-26a的表达水平较癌旁组织明显降低(1.08±0.12比78.62±1.44、3.60±0.49比36.57±0.86、5.22±0.76比27.64±0.89、0.59±0.02比26.32±0.69、2.05±0.23比19.36±0.74、1.88±0.13比14.49±0.80、1.03±0.07比8.92±0.37、4.69±0.35比6.75±0.52、0.81±0.05比2.89±0.17,P<0.01)。7种细胞株(MDA-MB-231、BT474、MDA-MB-468、T47D、SKBR3、MCF10A、MCF-7)中,三阴性乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、MDA-MB-468)中miR-26a的表达水平明显低于MCF-10A(0.61±0.05比1.50±0.11、0.09±0.01比1.50±0.11,P<0.01)。Transwell迁移实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的穿膜细胞数量显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞[(613.33±18.04)个比(701.33±6.11)个;(191.33±9.02)个比(269.33±8.33)个,P<0.01];划痕实验显示,miR-26a mimic转染组的细胞较miR-mimic NC转染组的细胞更慢地靠近划痕区域。结论 miR-26a在三阴性乳腺癌中低表达,并具有抑制三阴性乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用。

微小RNA-26a通过靶向癌基因c-Myc抑制三阴性乳腺癌细胞的增殖

目的观察微小RNA(miRNA,miR)-26a对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法通过噻唑蓝(MTT)实验及集落形成实验检测miR-26a对细胞增殖能力的影响,应用流式细胞技术检测miR-26a对细胞周期的影响。利用数据库miRTarBase预测miR-26a靶基因,在数百种靶基因中,筛选出与细胞周期及肿瘤转移密切相关的靶基因c-Myc作为研究对象。通过Western blot实验检测miR-26a过表达后细胞中c-Myc及其下游靶基因细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)、细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)蛋白水平的表达。结果MTT实验显示,miR-26a模拟物(mimic)转染组细胞的增殖活力显著低于miR-mimic阴性对照(NC)转染组的细胞。集落形成实验显示,miR-26a mimic转染组细胞的克隆增殖能力显著低于miR-mimic NC转染组的细胞[(55.67±5.86)个比(144.33±5.03)个;(62.00±3.00)个比(107.67±2.52)个,P<0.01]。流式细胞技术显示,miR-26a mimic转染组细胞处于G1期的细胞比例明显高于miR-mimic NC转染组的细胞[(59.39±1.04)%比(46.91±1.04)%;(76.91±1.43)%比(63.21±1.61)%,P<0.01]。Western blot实验显示,细胞中miR-26a表达上调后,c-Myc及其下游靶基因Cyclin D2、Cyclin E1的蛋白表达水平显著降低。结论 miR-26a可抑制三阴性乳腺癌的增殖,其机制可能是miR-26a通过靶向癌基因c-Myc来发挥抑癌作用。