武汉市区169例丙型肝炎患者HCV基因型状况分析

目的探讨武汉市丙型肝炎病毒基因型分布特点。方法采用巢式PCR扩增c DNA、基因测序法检测武汉市区169份抗-HCV阳性和HCV RNA增高患者的HCV基因型,目标检测基因型为1a、1b、2a、2b、3a、3b、4、5a、5b、6a共10个型。结果武汉市区169例HCV感染者血清中,基因1型115例(68.04%)、基因2型32例(18.93%)、基因3型16例(9.47%)、基因6型6例(3.55%),各基因亚型例数和其所占比例依次为1 b型113例(66.86%)、2 a型31例(18.34%)、3b型12例(7.10%)、6a型6例(3.55%)、3a型4例(2.37%)、1a型2例(1.18%)、2b型1例(0.59%),未检出4型、5a、5b和混合基因型,169例患者HCV以基因1b型为主。结论武汉市区丙型肝炎感染HCV主要基因型为1b型,其次为2a、3b、6a,而3a、1a、2b比例极低。

乙肝耐药全基因测序分析研究

目的探讨接受核苷(酸)类药物抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者的耐药突变连锁模式。方法采用nest-PCR及测序方法对经抗病毒药物治疗的慢乙肝患者进行全基因测序,分析了126例样本的测序结果。结果126例样本的检测结果,发现发生耐药突变的74例。经过分析,其中发生耐药位点连锁突变的为49例(66.2%),连锁模式达36种。M204I位点突变13例;M204V位点单点突变或连锁突变共34例,M204V连锁M180L再联合其他位点突变的达30例,其中M180L+M204V+S202G为12例,占40%(12/30)。其中也发现可能对恩替卡韦耐药的L180M+M204V+A181G/C的突变。结论抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中广泛存在多个耐药位点,随着临床用药,其他新的耐药突变模式也陆续出现。提示在接受核苷(酸)类药物抗病毒治疗前,在治疗过程中的合适时间点检测耐药相关变异位点,可为临床慢性乙型肝炎的抗病毒治疗提供重要参考。

EIF2S3基因变异致MEHMO综合征2例报告并文献复习

目的探讨MEHMO综合征的临床特征与遗传学特点。方法回顾分析2例确诊MEHMO综合征患儿的临床资料,并复习相关文献。结果两例患儿均为男性。例1于2岁3个月就诊,表现为癫痫发作、智力低下、进行性痉挛性四肢瘫、小头畸形、面部畸形、身材矮小和隐睾等。例2于3月龄就诊,4个月15天龄死亡,表现为反复低血糖、小头畸形和小阴茎,癫痫状态持续、难治。两例患儿均存在乳酸酸中毒,头颅MRI均显示胼胝体薄。例1患儿EIF 2 S 3基因存在c.137C>T(p.Thr 46 Ile)错义变异,例2患儿EIF 2 S 3基因存在c.1391_c.1394delCAAT(p.T 464 Tfs*5)移码变异。这2种变异在人类基因变异数据库(HGMD)等均未见收录,美国医学遗传学与基因组学(ACMG)基因变异解读指南均评定为致病性变异。检索到国外文献5篇,包含18例患者,有5个EIF 2 S 3基因变异位点,1个移码变异和4个错义变异,均为半合子变异。移码变异患者表现出智力障碍、癫痫发作、生殖器发育不全、小头畸形、肥胖、发育迟缓和低血糖等MEHMO综合征的全部重要表型,而错义变异患者表现部分表型且症状较轻。结论MEHMO综合征存在一定的基因型-表型相关性。首次报道2例中国人群MEHMO综合征,并发现2个新的EIF 2 S 3基因变异位点。

BCR::ABL1 p210转录水平定量检测多中心比对

目的评估7家独立医学实验室BCR::ABL1 p210转录水平定量检测能力及实验室之间结果的可比性。方法比对分两个阶段完成,由参考实验室制备比对样本,每个阶段比对样本的BCR::ABL1 p210定量值均覆盖0.001%~0.01%、0.01%~0.1%、0.1%~1%、1%~10%及>10%。各比对实验室分别采用即时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,RT-PCR)和数字PCR法(digital PCR,dPCR)进行比对样本的检测,计算并确认各比对实验室转换因子(conversion factor,CF)。结果(1)RT-PCR比对中,1家实验室第一阶段14例样本未检出,其余6家实验室比对结果合格,偏倚<±1.2倍(-0.133~0.338),95%一致性界限<±5倍(上限0.147~0.785,下限-0.770~-0.109),计算并确认CF值;(2)dPCR比对中,1家实验室第二阶段未回报结果,其余6家实验室比对结果合格,偏倚<±1.2倍(-0.026~0.267),95%一致性界限<±5倍(上限0.084~0.991,下限-0.669~-0.135),计算并确认CF值;(3)BCR::ABL1 p210定量值为0.01%~0.1%、0.1%~1%、1%~10%及>10%时,RT-PCR和dPCR均能全部检出;BCR::ABL1 p210定量值为0.001%~0.01%时,dPCR检出率高于RT-PCR法(85.56%比68.00%)。结论各比对实验室结果呈较好一致性,各实验室间BCR::ABL1 p210定量检测通过CF值换算具备可比性;BCR::ABL1 p210深度分子反应定量检测中,dPCR法阳性检出率更高,更有优势;为保证检测结果的准确性和稳定性,各实验室应加强日常质控工作。

应用TRBC1鉴别T细胞克隆的研究

目的:研究使用流式细胞术T细胞抗原受体β恒定区1(TRBC1)基因单克隆抗体鉴别T细胞克隆方法的可靠性。方法:回顾2021年6月—2022年2月的78例样本,分别使用流式细胞术TRBC1标记法、T细胞抗原受体可变区β链(TCRVβ)法及分子T细胞抗原受体(TCR)重排法,通过几种方法比较得到TRBC1判断T细胞克隆的可行性。并比较TRBC1法在不同疾病中的表达及与其他相关CD分子的共表达情况是否存在差异。结果:使用TRBC1法的表达率<15%和>85%作为克隆阳性判断标准,与TCRVβ法及TCR重排法判断克隆性比较,差异无统计学意义(P=1.000,0.250);且其kappa值分别为0.871和0.873,为高度吻合性。在不同疾病T细胞克隆判断中,除TCRγ/δ淋巴瘤外,在其他疾病T细胞克隆判断上均差异无统计学意义(P>0.05)。TRBC1的表达率与CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、TCRα/β表达均无相关性(|r|<0.3),可作为独立的判断因素。结论:使用TRBC1法同其他方法比较具有较高的一致性,方法可靠;且其经济高效,试验方法简单,值得临床作为T系克隆的判断方法进行推广。

血浆置换联合血液滤过治疗儿童严重脓毒症并多器官功能障碍综合征分析

目的:探讨血浆置换(TPE)联合连续性静脉-静脉血液滤过(CVVH)对儿童严重脓毒症并多器官功能障碍综合征(MODS)的治疗价值。方法:本研究为前瞻性随机对照研究。纳入2019年2月至2023年2月安阳市妇幼保健院收治的严重脓毒症并MODS患儿70例。按随机数字表法,将患儿分为联合组与CVVH组(各35例)。CVVH组采用CVVH治疗,联合组采用TPE联合CVVH治疗。观察2组抗生素使用时间,并采用t检验进行比较。对2组治疗前及治疗48 h、72 h的凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、部分凝血酶原时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)以及血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、可溶性受体(sFLT)水平进行分析,多时点整体比较采用重复测量方差分析,两两比较采用LSD-t检验。记录2组患儿28 d生存率,并采用χ^(2)检验进行比较。结果:联合组治疗48 h及72 h的PT、TT、APTT均低于CVVH组(均P<0.05)。联合组治疗48 h、72 h的FIB分别为(2.15±0.42)g/L、(2.89±0.27)g/L,高于CVVH组的(1.84±0.31)g/L、(2.49±0.20)g/L(均P<0.05)。联合组抗生素使用时间为(11.33±1.16)d,短于CVVH组的(13.54±1.92)d(t=5.828,P<0.05)。联合组治疗48 h及72 h的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均低于CVVH组(均P<0.05)。联合组治疗48 h及72 h的血清HMGB1、TLR4、sFLT水平均低于CVVH组(均P<0.05)。联合组28 d存活率为94.29%,高于CVVH组的77.14%(χ^(2)=4.200,P=0.040)。结论:TPE联合CVVH能改善严重脓毒症并MODS患儿的凝血功能、炎症因子水平,其可能通过调节HMGB1、TLR4、sFLT水平达到治疗目的,改善短期预后。

GATA1相关血小板减少症1例临床特征和基因突变分析

目的探讨1例GATA1突变引起的血小板减少症的临床特征和基因突变,为遗传性血小板减少症的早期诊断和治疗提供依据。方法对2017年5月就诊于湖南省儿童医院的1例临床表现为急性肝衰竭、血小板减少患儿的临床表现、实验室检查、影像学、细胞学检查、肝组织活检及治疗过程进行分析,采用高通量测序技术进行致病基因检测查找病因。结果患儿,男,10个月,因"发热3d,皮肤黄染2d"入院,体格检查发现肝大,实验室检查提示血小板减少(33×10^9/L)、肝衰竭,骨髓片不支持血液系统相关肿瘤疾病,肝组织活检提示肝细胞重度损害、肝纤维化改变(G3S2)。对症治疗后患儿肝功能、凝血功能恢复,但仍有血小板减少(30×10^9/L^58×10^9/L)。高通量测序发现患儿在X连锁GATA1第6号外显子存在c.1121G>A(p.Gly374Glu)半合子突变,该突变在人类基因突变数据库(HGMD)等未见报道。Sanger测序家系验证显示患儿突变遗传自其母亲,哥哥存在相同突变。患儿母亲及哥哥CD41-42基因杂合突变导致其轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血。结论GATA1 c.1121G>A错义突变是该家系血小板减少的致病原因,CD41-42基因杂合突变是轻型地中海贫血的致病原因。GATA1 c.1121G>A突变为未见报道的新突变,丰富了X连锁血小板减少症GATA1基因突变谱。

一个血友病A家系的凝血因子Ⅷ基因突变分析

血友病A是由凝血因子Ⅷ（FⅧ）基因突变导致的一种X连锁隐性遗传性出血性疾病，通常是由无症状的女性携带者传递给其儿子，男性患病率为1／5000-10000。血友病A的发病机制复杂多样，其突变位点覆盖整个FⅧ基因，主要包括内含子22及1倒位、无义突变、错义突变、插入及缺失等，其中约45％的重型血友病A是由内含子22倒位引起，而轻型和中间型血友病A最常见的突变类型是错义突变。

TWNK相关线粒体DNA耗竭综合征7患儿1例并文献复习

目的探讨TWNK（或C10orf2）相关线粒体DNA耗竭综合征7（mitochondrial DNA depletion syndrome 7，MTDPS7）的临床特征和基因突变情况。方法收集1例TWNK相关MTDPS7患儿临床资料，分析其临床特征和基因检测结果。以＂TWNK或C10orf2＂为关键词，在中国知网、万方数据库、PubMed、人类基因突变数据库和在线人类孟德尔遗传等数据库中检索文献，对已报道MTDPS7病例资料进行文献复习。结果本例患儿，女，6岁10个月，因＂智力运动倒退5年4个月余，反复抽搐8个月余＂入院，临床表现为运动功能倒退、智力低下、听力障碍、眼肌麻痹、肌张力减退、频繁癫痫发作等，最终死亡。基因检测结果显示，患儿TWNK存在复合杂合突变，即c.1388G〉A （p.Arg463Gln）和c.1696_1699del （p.Lys566fs）。文献复习：最初1篇文献报道21例婴儿期起病的脊髓小脑性共济失调（现称MTDPS7），均有C10orf2突变；另外8篇文献报道的8个家庭19例MTDPS7临床表现存在差异性，TWNK突变类型呈现多样性；文献已报道的40例MTDPS7患者中TWNK或C10orf2突变涉及11种错义突变、1种同义突变、1种内含子突变和1种移码突变。综合上述内容，诊断本例患儿为TWNK相关MTDPS7。结论在中国大陆首次报道1例TWNK相关MTDPS7，临床主要特征为肌张力低下、共济失调、眼肌麻痹、听力丧失、癫痫和周围性神经病。新发现的c.1388G〉A错义突变和c.1696_1699del移码突变丰富了TWNK基因突变谱。

RUNX1-RUNX1T1融合转录本及WT1转录本水平检测的室间比对研究

目的通过室间比对了解国内RUNX1-RUNX1T1融合转录本及WT1转录本检测现状和真实表现。方法北京大学人民医院(简称PKUPH)制备比对样品,即用RUNX1-RUNX1T1(-)患者与RUNX1-RUNX1T1(+)患者新鲜骨髓/外周血有核细胞进行不同比例的稀释,制备出14种比对样本,每种样本各制备23份平行样本,加入TRIzol均质化后-70℃保存。各家中心采用RT-PCR技术同时检测各样本的RUNX1-RUNX1T1融合转录本及WT1转录本水平,统一以目的基因拷贝数/ABL拷贝数×100%的形式报告结果。通过Spearman相关分析计算各家中心与PKUPH检测结果之间的相关系数。结果①RUNX1-RUNX1T1比对:9份为阳性、5份为阴性样本,参与的20家实验室的假阳性率为5%(5/100),假阴性率为0(0/180)。每份阳性样本各家检测值均不相同,9份阳性样本各家报告的结果中位值为0.060%~176.7%,共覆盖3.5个log的范围,各份样本最高与最低报告结果的比值为5.5~12.3(去除1份明显偏离的结果)。85%(17/20)的实验室与PKUPH结果之间的相关系数≥0.98。②WT1比对:14份样本各家报告结果均不相同,中位值为0.16%~67.6%,覆盖2.6个log的范围,各样本检测最高值与最低值的比值为5.3~13.7.62%(13/21)的实验室与PKUPH结果的相关系数≥0.98。③两个转录本每家与PKUPH报告结果的相对关系不一致,2家均低于、7家均高于PKUPH,另11家为1个高于另一个低于PKUPH。结论同一样本各家中心报告的RUNX1-RUNX1T1及WT1转录本水平不同,大多数实验室与PKUPH报告的结果具有很高的一致性,实验室间不同转录本水平的相对关系不一定相同。

CD123在成熟B淋巴细胞肿瘤中的表达及意义

目的:探讨CD123在不同类型成熟B淋巴细胞肿瘤诊断和鉴别诊断中的意义。方法:选取297例成熟B淋巴细胞肿瘤患者作为研究对象,疾病类型包括慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL),套细胞淋巴瘤(MCL),滤泡性淋巴瘤(FL),脾边缘区淋巴瘤(SMZL),毛细胞白血病(HCL)和变异型HCL(HCLv)。采集患者的骨髓标本,通过流式细胞术分析其免疫表型,以及各类型疾病中异常淋巴细胞群CD123表达的抗原阳性比例及强度。结果:不同类型成熟B淋巴细胞肿瘤患者骨髓异常淋巴细胞群中,其CD123表达率及表达强度存在较大差异。其中156例CLL/SLL中CD123阳性比例约占3.21%,表达强度较低;45例MCL中CD123阳性比例约占8.89%,表达强度较高;62例FL中CD123阳性比例约占4.84%,表达强度较低;20例SMZL CD123阳性比例约占15.00%,表达强度较高;10例HCL CD123阳性比例占100%,且其表达强度最高;但4例HCLv未见CD123阳性表达。结论:CD123在成熟B淋巴细胞肿瘤常见类型中广泛表达,其表达率和强度尤其可作为HCL与其他亚类进行鉴别的重要指标之一。

运用CLLflow积分系统诊断中国B细胞慢性淋巴细胞增殖性疾病的研究

目的:运用CLLflow积分系统诊断与鉴别诊断包括慢性淋巴细胞白血病(CLL)在内的B细胞慢性淋巴细胞增殖性疾病(B-CLPD)。方法:回顾性分析2018年3月—2020年6月就诊的363例B-CLPD患者,根据疾病类型分成CLL组(185例)和非CLL(non-CLL)组(178例),分别对其进行CD分子染色,经流式细胞仪前向/侧向散射光(FSC/SSC)和CD45设门,对2组标本中各类细胞进行分群,选择CD19;细胞,分析该群细胞的表型,并同时进行CLLflow和Matutes积分统计,比较CLL组和non-CLL组间2种积分以及各CD分子表达差异。结果:2组CLLflow和Matutes积分比较,差异均有统计学意义(P<0.01);CLLflow与Matutes积分的灵敏度比较,差异无统计学意义(98.4%vs 95.7%,P>0.05),然而,CLLflow积分特异度明显高于Matutes积分(89.9%vs 64.6%,P<0.01)。CLLflow积分的中位数随着MS分数的增加而增加。2组间CD5、CD10、CD23、CD79b、FMC7的表达差异均有统计学意义(P<0.01)。2组间CD20、CD22表达差异无统计学意义(P>0.05)。CD5/CD23双阳性对CLL的诊断表现出了高敏感度和特异度(P<0.01)。Kappa/Lambda双阴性在CLL组中更为多见(P<0.01)。CD200在CLL组的表达率明显高于non-CLL组(P<0.01)。结论:运用复合免疫标记的CLLflow积分系统在诊断与鉴别诊断包括CLL在内的B-CLPD时有用性高。与Matutes积分相比,CLLflow积分灵敏度相当,特异度显著提高,稳定性更好。

湖北省3~12岁汉族儿童神经递质正常参考值范围的建立

目的建立湖北省3~12岁汉族儿童神经递质正常参考值范围。方法采用前瞻性研究方法, 对2021年1月至8月在武汉儿童医院体检的3~12岁湖北省汉族健康儿童进行病史询问, 排除神经、精神系统疾病及感染、创伤、近2周用药史, 收集324例儿童(男262例, 女62例;3~7岁组217例, 8~12岁组107例)血浆及391例儿童(男302例, 女89例;3~7岁组266例, 8~12岁组125例)随机尿液, 通过超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)检测受试者血浆中多巴胺、肾上腺素、谷氨酸等10种神经递质及随机尿液中多巴胺、肾上腺素、5-羟基吲哚乙酸等8种神经递质的水平, 建立湖北省3~12岁汉族儿童的神经递质正常参考范围。采用Kruskal-Wallis H检验对不同年龄和性别间神经递质分布水平的差异进行统计分析, 并采用Nemenyi检验进行不同组间的两两比较。结果不同性别儿童中各种神经递质水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。血浆中多巴胺、甲氧基去甲肾上腺素、色氨酸、γ氨基丁酸在3~7岁组和8~12岁组差异有统计学意义, 随机尿中多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素、高香草酸、5羟基吲哚乙酸在3~7岁组和8~12岁组差异有统计学意义。结论建立了湖北省3~12岁汉族儿童神经递质正常参考值范围, 对临床具有重要参考意义, 对儿童神经递质相关疾病的研究奠定了基础。

一个短指症E2型伴肥胖症家系的致病基因鉴定及遗传学分析

目的鉴定1个短指症伴肥胖症家系的致病基因,为遗传咨询和产前诊断提供依据。方法先证者为郑州大学附属儿童医院内分泌遗传代谢科收治的1例临床和X线片初诊为短指症E2型伴肥胖症患儿,应用外显子捕获结合二代测序技术对先证者致病基因筛查,采用Sanger测序方法对家系进行验证和遗传分析。结果先证者PTHLH基因第1外显子发现c.125A>C错义突变,导致谷氨酰胺变为脯氨酸(p.Gln42Pro)。该杂合突变在人类基因突变数据库未见报道,SIFT (0)和PolyPhen (0.999)程序评估其可能有害。Sanger测序结果与二代测序结果一致,证实先证者的c.125A>C杂合突变来自其母亲,其舅舅和妹妹也携带相同杂合突变,但其父亲该位点无突变。结论PTHLH基因c.125A>C错义突变可能是该家系致病突变位点。