百日咳丝状血凝素的纯化及初步鉴定

目的从百日咳鲍特菌中提纯百日咳丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA),并对其进行初步鉴定。方法采用珍珠岩吸附层析和羟基磷灰石吸附层析相结合的方法,从百日咳鲍特菌培养上清中纯化FHA;SDSPAGE电泳和PAGE电泳分析样品纯度,并经斑点免疫印迹法对其进行鉴定。结果纯化样品的纯度达到95%以上,斑点免疫印迹中和FHA单抗有反应斑点,与百日咳毒素(pertussis toxin,PT)单抗无反应斑点。结论珍珠岩吸附层析和羟基磷灰石吸附层析相结合的方法可作为一种快速有效的纯化手段提取纯度较高的FHA,有望作为参考品用于百日咳FHA抗原含量检测、抗FHA血清抗体滴度检测及抗原纯度检测。

人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白双抗体夹心ELISA检测法的建立及验证

目的建立人血清中猪抗人淋巴免疫球蛋白（anti-human T lymphocyte porcine immunoglobulin,ALG）双抗体夹心ELISA检测法,并进行验证。方法以兔抗猪Ig G包被酶标板,HRP酶标记的鼠抗猪Ig G为二抗,建立人血清中ALG含量的双抗体夹心ELISA检测法,并对方法中包被浓度及二抗浓度进行优化,同时验证该方法的重复性、敏感性、准确性、特异性及稳定性。采用优化后的方法对14位严重型再生障碍性贫血（severe aplastic anemia,SAA）患者进行ALG的血药浓度监测（therapeutic drug monitoring,TDM）。结果最佳包被浓度为1∶2 000,最佳二抗稀释度为1∶8 000。参考品浓度在4.9-5 000μg/ml范围内标准曲线的四参数Logistic曲线拟合较好,R2值为0.991 1,在4.9-156μg/ml范围内的线性拟合也较好,R^2值为0.991 5,批内重复性CV值均〈10%;其检测底限为0.39μg/ml;浓度为500、50及5μg/ml参考品的回收率为91.2%-107.0%;该方法可特异性检测出注射ALG患者血清中ALG含量;包被好的ELISA板及二抗、底物于4及37℃条件下分别保存1-3周及1-3 d后检测结果均较稳定。经DAS 3.1.4软件分析,14名经ALG治疗的SAA患者血清中ALG的曲线下面积（AOC）为（7.3±5.1）mg/（L·d）（95%CI）,半衰期（t1/2）为（20.65±38.67）d（95%CI）。结论该方法具有良好的重复性、准确度及稳定性,可用于ALG的TDM。