抗人CD4嵌合抗体的稳定表达及鉴定

目的构建抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,并对表达产物进行鉴定。方法采用脂质体法将抗人CD4嵌合抗体质粒pHDC4稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压筛选抗人CD4嵌合抗体稳定表达株,经细胞工厂扩大培养。收集培养上清,经Protein A亲和层析纯化目的抗体,激光共聚焦显微镜观察抗体基因在细胞内的表达,并分别进行质谱分析、蛋白质N-末端测序和平衡解离常数(KD)的测定。结果构建的抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株的抗体表达水平为4.29～10.52μg/ml;BCA测得纯化回收后的抗体表达水平为12.68 mg/L;激光共聚焦检测显示,抗CD4嵌合抗体稳定表达细胞株可稳定表达人的恒定区和鼠的可变区;质谱分析表明,其含有鼠源性和人源性成分;蛋白质N-末端氨基酸测序表明,其轻链与亲本抗体N-末端氨基酸序列完全一致;其KD为2.67×10-9M。结论成功构建了抗人CD4嵌合抗体稳定表达细胞株,其表达的抗人CD4嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合特异性和亲和力。

龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1生产用菌种库的建立和检定

目的建立用于龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1制备的菌种库，并对建立的菌种库进行质量检定。方法将质粒pGJA-P／VAX1转化大肠杆菌DH-Sct，筛选后建立原始菌种库，扩大培养建立主菌种库和工作菌种库。对主菌种库和工作菌种库进行全面检定，包括革兰染色、生化试验、16SrRNA测序、抗生素抗性检测、外源噬菌体检测、质粒传代稳定性检测、质粒酶切分析。结果种子菌的革兰染色、生化试验和16SrRNA测序结果均符合大肠杆菌检定要求，菌种库无噬菌体污染，质粒酶切结果与质粒构建图谱一致。结论主菌种库和工作菌种库的检测结果均符合国家食品药品监督管理局相关指南要求，能用作龋齿DNA疫苗pGJA—P／VAX1的生产用菌种。

抗肿瘤单克隆抗体的临床应用

世界卫生组织预计，癌症将取代心血管病成为世界死亡人数最多的疾病。抗肿瘤药物的研发已成为制药领域的热点。单克隆抗体（单抗）能通过与肿瘤细胞上的特定靶标结合来杀死肿瘤细胞。迄今为止，已有14种抗肿瘤单抗获准上市。根据单抗的作用靶点不同，可将单抗分为抗表皮生长因子受体单抗、抗人表皮生长因子受体2单抗、抗血管内皮细胞生长因子抗体、抗白细胞分化抗原单抗。此文就以上几类抗肿瘤单抗的作用机制及临床应用进行综述。

结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407的构建及体外表达

目的构建结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,并检测其在哺乳动物细胞293T中的表达。方法以基因重组卡介苗(rBCG)AERAS-422基因组为模板,PCR扩增Rv3407基因,构建真核表达质粒pVAX1-Rv3407,转染293T细胞,采用免疫荧光法及Western blot法检测Rv3407蛋白的表达。结果 PCR扩增获得长300 bp的Rv3407基因片段;重组真核表达质粒pVAX1-Rv3407经双酶切及DNA测序证明构建正确;转染48 h后,Rv3407蛋白在293T细胞中有效表达,且主要分布在细胞质中。结论成功构建了结核DNA疫苗质粒pVAX1-Rv3407,为新型结核病疫苗的研制奠定了基础。