重配法制备适用于MDCK细胞的新型H1N1流感病毒疫苗株

目的 利用不同型别流行性感冒病毒(influenza virus,简称流感病毒)共感染细胞可发生基因组重配,用H1N1(IVR180)和H5N1(NIBRG-14)流感病毒疫苗株在犬肾细胞(Madin-Darby canine kidney cells, MDCK细胞)上自然重配,以筛选获得适用于MDCK细胞生长的新型H1N1流感疫苗株。方法 将甲型流感病毒株H1N1(IVR180)与能在MDCK细胞上复制并表现出高滴度的H5N1(NIBRG-14)毒株共感染MDCK细胞,向有共感染细胞的培养液中添加H5N1抗血清进行压力筛选以降低亲本H5N1流感毒株,使用蚀斑筛选单克隆毒株后,通过反转录聚合酶链反应(reverse transcription PCR, RT-PCR)进行重配毒株的筛选鉴定,并对毒株的序列、毒力、免疫原性及遗传稳定性进行了评价。结果 H1N1和H5N1重配毒株rH1-C7经过RT-PCR及基因测序证明其HA、NA、NS、M、NP与IVR180毒株同源性为100%,PA、PB1、PB2基因与NIBRG-14株同源性为100%;rH1-C7感染MDCK细胞后,血凝滴度达到1 024;毒株灭活后接种小鼠,小鼠产生了能够中和H1N1(IVR180)毒株的特异性抗体,且血清效价高于亲本IVR180疫苗株。结论 通过基因重配获得了适应于在MDCK细胞上增殖的新型H1N1流感病毒疫苗株,且疫苗株灭活后具有较高的免疫原性,为MDCK细胞基质流感病毒疫苗株的制备奠定了基础。