测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的荧光灶试验的验证

目的验证荧光灶试验作为测定六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度方法的可行性。方法采用该法测定轮状病毒G1、G2、G3、G4、G8、G9型滴度，并验证该法的专属性、精密度、线性、准确性、范围和耐用性。结果各型病毒均可与对应的单克隆抗体（单抗）发生特异性荧光灶反应，不与抗异型病毒单抗发生交叉反应。试验内和试验间测定结果的相对标准偏差均小于5％。各型轮状病毒实测滴度与理论滴度间的线性相关系数均〉0．99。不同稀释度各型病毒的回收率为90％～120％。该法的定量限为：G1、G2、（33、G4、G8、G9型滴度分别〉2．8、〉4．2、〉3．7、〉3．6、〉4．1和〉4．21g荧光灶单位／ml，均符合六价轮状病毒疫苗的质控要求。结论该法测定不同型轮状病毒滴度具有较好的专属性、精密度、线性和准确性，可用于六价轮状病毒疫苗各型病毒滴度的测定。

Vero细胞洗换方式对轮状病毒活疫苗收获液的影响

目的探讨Vero细胞洗换方式对口服六价轮状病毒活疫苗收获液的影响。方法采用3种不同方式洗换Vero细胞后,观察相应的致细胞病变效应,使用ELISA检测洗换前后牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)残留、快速荧光灶法检测收获液病毒滴度,并测定病毒收获液浊度及粒径,比较3种洗换方式的差异。结果使用方式1、2、3洗换后,方式1、2致细胞病变进程明显较方式3快;收获液BSA残留(均值±标准差)分别为(15.0±4.1)、(16.3±4.0)、(52.6±4.7)ng/ml方式1、2较方式3收获液BSA残留明显下降;方式1、2、3洗换的收获液病毒滴度分别为(7.27±0.06)、(7.23±0.06)、(6.97±0.06)lg荧光灶单位/ml,方式1、2较方式3收获液病毒滴度明显上升。不同洗换方式处理后,病毒收获液浊度和粒径的差异无统计学意义。方式1、2、3处理后,病毒收获液BSA残留、病毒滴度、浊度与粒径均符合标准。结论结合实际生产条件,滴度较高、BSA含量较低的方式1适合作为后续的大规模原液制备过程中的洗换方式。

规模化生产中实际感染复数对轮状病毒增殖的影响

目的探索轮状病毒疫苗规模化生产中实际感染复数(multiplicity of infection,MOI)对病毒增殖的影响。方法用荧光灶试验方法检测接种Vero细胞的轮状病毒接种液的病毒滴度,实际MOI即为接种液病毒数量除以细胞数量。通过致细胞病变的天数及单次病毒收获液的滴度反映规模化生产中实际MOI对轮状病毒增殖的影响。结果规模化生产中,MOI在0.002~0.074范围内影响轮状病毒致细胞病变的进程,与轮状病毒增殖量呈弱相关性,单次病毒收获液滴度均在7.0 lg荧光灶形成单位(fluorescent focus unit,FFU)/ml以上,符合质量标准(不低于6.5 lgFFU/ml)。结论轮状病毒疫苗规模化生产中,实际MOI与轮状病毒增殖量呈弱相关性。