抗肿瘤新药康赛宁治疗多种癌症的临床研究

康赛宁治疗癌症病人929例。单用康赛宁治疗肺癌、消化系统癌、乳腺癌、鼻咽癌及膀胱痛分别有20.4％、33.3％、26.1％、33.3％及66.7％肿瘤灶部分缓解及不同程度肿瘤灶完全缓解。皮下、瘤内注射是使用康赛宁的两个主要途径,静脉点滴、穴位注射及膀胱灌注则是皮下、瘤内注射途径的补充。胸腔或腹腔注射康赛宁治疗恶性胸水及恶性腹水的有效率分别为91.0％及92.6％,是目前治疗恶性胸、腹水最有效方法之一。康赛宁的副反应主要有一过性发热及轻度局部红肿痛,联合化疗、放疗治疗肿瘤不但增强化疗/放疗的疗效,而且降低化疗、放疗对机体的毒性作用。故康赛宁是治疗癌症的一种安全、有效的药物。

武汉地区呼吸道合胞病毒分离株的G蛋白基因遗传特征

目的分析武汉地区人呼吸道合胞病毒(RSV)分离株的G蛋白基因的遗传特征。方法使用不同的特异性引物,对武汉地区2006年分离的9株RSV进行G基因3′末端第2个高变区的序列测定,并进行基因分型和基因亲缘关系分析。结果分离的9株RSV中,33.3%(3/9)为A亚型,属GA2基因型;66.7%(6/9)为B亚型,其中1株属于BA基因型,5株属于GB8基因型。9株RSVG蛋白与原型株核苷酸同源性为84.5%～99.0%,且与原型株相比,在205～230位氨基酸中有5～8个位点氨基酸变异,还存在糖基化位点的改变。结论2006年初在武汉地区存在着由不同RSV株引起的传播链,A、B亚型共循环,B亚型是优势流行亚型;9株RSVG蛋白与原型比较,存在明显的差异。

NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10％。其中尤以HEP3B细胞最敏感。但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性。病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,胞浆内有病毒粒子存在。NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死。

金黄色葡萄球菌脂磷壁酸纯化及其抗肿瘤的初步研究

目的从金黄色葡萄球菌细胞壁中提取脂磷壁酸(LTA),研究其抗肿瘤活性。方法冷酚法提取LTA,经SepharoseCL4B纯化,检测LTA毒性;观察荷瘤小鼠注射LTA后的生命延长率及抑瘤率,NK细胞活性,TNFα、IFNγ分泌。结果LTA未见明显毒性,能提高荷瘤小鼠生命延长率;明显抑制实体瘤生长;提高NK细胞活性;诱导分泌多量TNFα及IFNγ。结论LTA可通过提高NK细胞活性,诱导分泌多量TNFα及IFNγ等细胞因子发挥抗肿瘤活性。

几种呼吸道合胞病毒检测方法的比较

目的比较不同从临床样本中快速、敏感特异的检测呼吸道合胞病毒(RSV)的方法,以便早期诊断RSV感染。方法应用不同方法对45例急性下呼吸道感染患儿鼻咽分泌物RSV进行检测,包括病毒分离、直接涂片间接免疫荧光法(IFA)、快速细胞培养法、双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)及链亲和素-生物素法(LSAB)。结果鼻咽分泌物45例中,病毒分离阳性12例(26.7%),直接涂片间接免疫荧光法检测出阳性14例(31.1%),快速细胞培养法阳性20例(44.4%)。双抗体夹心ELISA及LSAB法均仅检出4例阳性,阳性率均为8.9%。结论将直接涂片间接免疫荧光法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是最适合于RSV感染早期诊断的方法。

A群链球菌疫苗的研究进展

A群链球菌(GAS)是人类细菌感染最常见的病原菌之一,其疫苗的研发仍是尚未解决的难题。本文介绍了目前GAS疫苗研发的不同策略,并重点阐述了M蛋白多肽疫苗的最新研究进展。

快速细胞培养法在呼吸道合胞病毒感染早期诊断中的应用

目的建立检测呼吸道合胞病毒(RSV)的快速细胞培养法,并应用于呼吸道合胞病毒感染的早期诊断。方法采用自制的抗RSV的单克隆抗体,经快速细胞培养法和直接涂片法检测165份急性下呼吸道感染的婴幼儿鼻咽分泌物及咽拭子中RSV,并与病毒分离培养比较,再将自制试剂盒与进口呼吸道病毒荧光检测试剂盒检测结果进行比较,探讨其临床实用性。结果57份咽拭标本中,1份快速细胞培养法及直接涂片法检测均为阳性,阳性率1.8%,未分离到病毒。108份鼻咽分泌物中,快速细胞培养法检出21份阳性,阳性率19.4%。直接涂片法检测出14份阳性,阳性率13%,病毒分离培养法检出阳性12份,阳性率11%。快速细胞培养法与其他两种方法相比,阳性检出率差异有显著意义。自制试剂盒与进口试剂盒检出40份鼻咽分泌物标本,阳性率均为35%。结论将直接涂片法与快速细胞培养法同时应用于RSV感染的早期诊断,既能及时提供检测结果,又能提高诊断的敏感性,是对RSV感染进行早期诊断的实用方法。

人白细胞介素-18突变体的虚拟筛选及其活性

目的筛选合适的人白细胞介素-18(hIL-18)突变体,并检测其活性。方法运用分子模建工具,模建出IL-18受体及IL-18/IL-18R复合物的分子结构,分别虚拟突变IL-18的4个半胱氨酸为另外19种氨基酸,以野生型IL-18为模板进行同源模建,建立其三维结构模型,计算其IL-18/IL-18R复合物三维结构及分子间作用能变化情况,筛选几种突变方案。运用分子生物学技术构建突变体,表达纯化后进行活性检测。结果根据理论预测情况,筛选了12株突变体。突变的质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确。突变体蛋白以包涵体形式表达,表达量约占菌体总蛋白的30%,纯化后纯度大于90%。纯化的C38Glu、C127Ser等几株突变体在低浓度时,活性轻微上升,与理论预测结果基本相同。结论已成功构建了多株IL-18的突变体,运用生物信息学方法进行先期筛选有助于加快IL-18的突变研究。

细菌内同源重组构建人p21^(WAF1)基因重组腺病毒

目的构建人p21WAF1基因重组腺病毒载体,并在293细胞中包装制备重组腺病毒。方法将人p21WAF1基因亚克隆连接到腺病毒转移质粒pshuttle-cmv,得到阳性重组转移质粒psh-p21。先将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183菌,筛选得到AdBJ5183菌,再将PmeⅠ线性化的psh-p21转化AdBJ5183菌,经细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdp21。经PacⅠ和BstXⅠ酶切及PCR鉴定,将正确的重组腺病毒质粒pAdp21转染293细胞包装病毒,用RT-PCR和PCR鉴定重组腺病毒及其稳定性。结果所构建的重组腺病毒质粒pAdp21,经PCR鉴定,可扩增出约500bp的片段,与预期大小相符。转染293细胞可包装成p21WAF1基因重组腺病毒,经电镜观察,具有典型的腺病毒特征。结论已成功地构建了重组腺病毒质粒pAdp21,并制备出重组腺病毒rAdp21。

三种转染试剂对人脑胶质瘤细胞U251的作用

目的 :研究转染试剂Lipofectin、DOTAP和FuGENE 6介导反义c myc基因转染人脑胶质瘤细胞U2 5 1的作用。方法 :将可在真核细胞表达人反义c myc基因的质粒pCED4ASCMH分别与转染试剂Lipofectin、DOTAP和FuGENE6结合 ,转染到人脑胶质瘤细胞U2 5 1中 ,转染的第 2 4,48,72和 96小时用MTT比色法检测细胞活性并进行比较。结果 :转染实验组较对照组细胞活性均降低 30 %～ 40 %。结论 :三种转染试剂介导反义c myc基因质粒DNA转染U2 5 1细胞具有抑制细胞增殖、降低细胞活性。

康赛宁Ⅱ期及Ⅲ期临床试验结果的分析

对康赛宁Ⅱ期临床试验与Ⅲ期临床试验的疗效及毒副反应作比较,发现从皮下、瘤内、胸腔注射等途径使用康赛宁,Ⅲ期临床的疗效(缓解率分别7.8％、47.6％及有效率95.8％)比Ⅱ期临床的疗效(缓解率分别1.9％、15.4％及有效率83.0％)要好。康赛宁联合化疗治疗肿瘤,从皮下、瘤内途径治疗Ⅲ期临床(44.9％部分缓解,11.5％完全缓解)比Ⅱ期临床(41.7％部分缓解,5.6％完全缓解)有效。扩大使用范围的Ⅲ期临床,其发热、局部反应及皮疹副反应比Ⅱ期临床减少、减轻。没有观察到其它副反应及器官毒性反应,认为康赛宁是治疗肿瘤的安全、有效药物。

康赛宁Ⅲ期临床病例生存质量、WBC、Hb的分析

应用计算机对康赛宁治疗前后的生存质量、白细胞、血红蛋白进行了Ridit分析,结果表明:单用康赛宁皮下及胸腹腔治疗组的生存质量治疗后有显著性提高;但单用康赛宁瘤内给药组和合用放/化疗给药组生存质量治疗前、后差异无显著性(P>0.05)。无论单用康赛宁组还是与化/放疗合用组,其白细胞治疗前、后均没有显著性差异。对血红蛋白单用组分析无显著性差异;但在与化疗/放疗合用时有显著性下降。

康赛宁Ⅲ期临床资料的计算机处理

报道应用计算机对康赛宁Ⅲ期临床病例(521例)进行存储、分类和统计。

抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段单克隆抗体的制备

目的制备抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞外段(sTRAIL)的单克隆抗体。方法用重组sTRAIL免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,捕获ELISA筛选阳性克隆,制备腹水抗体。间接ELISA测定单抗效价,并进行单抗亚类、特异性鉴定及杂交瘤细胞染色体和单抗识别位点分析。将杂交瘤细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后,检测细胞培养上清的效价。结果3株杂交瘤细胞分泌的单抗均为IgG1型,腹水单抗效价均高于10-6,杂交瘤细胞染色体数介于94～98条之间,均识别sTRAIL分子上线性表位。细胞体外连续培养3个月及冻存6个月后的上清效价保持稳定。结论已成功制备了3株可稳定分泌抗sTRAIL单克隆抗体的杂交瘤细胞,为TRAIL的定性定量检测及组织表达分析奠定了基础。

四价重组A群链球菌多肽疫苗基因序列的合成及克隆

目的设计针对可引起风湿热的A群链球菌M1、3、6、18四个血清型的重组多肽疫苗,合成并克隆该重组多肽疫苗的核苷酸序列。方法从美国疾病预防和控制中心(CDC)数据库获得A群链球菌1、3、6、18四个血清型M蛋白型特异性序列,根据文献报道并结合生物信息学的方法,筛选每一个血清型的特异性序列中与人体组织蛋白无同源性的区段,将其按1-3-6-18型的顺序串连,在串联序列的C-端加上一个四个血清型所共有的与人体组织蛋白无交叉表位、且具有一定免疫原性的保守序列J14。对设计的多肽疫苗的氨基酸序列进行与人体组织蛋白的BlastP比对、亲水性分析、二级结构分析、空间结构分析以及B细胞表位预测。采用DNAWORK2.0在线软件设计一组寡核苷酸引物,OverlapPCR方法合成该多肽疫苗的核苷酸序列,并在5′端和3′端分别引入BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点,将该序列双酶切后克隆至pUC18载体上,并测序。结果软件分析显示,设计的多肽疫苗与人体组织蛋白无同源性,有较好的亲水性,二级结构与空间结构均与天然M蛋白相似,在每一个血清型的区段都可能存在B细胞表位。成功扩增出了该多肽疫苗的DNA序列,并获得了一个与设计序列完全一致的重组克隆载体。结论已成功设计了一种四价重组A群链球菌多肽疫苗,为其重组表达和免疫原性的研究奠定了基础。

A群链球菌四价重组蛋白的表达、纯化及其免疫原性

目的原核表达并纯化A群链球菌M1、3、6、18型四价重组蛋白,并检测其免疫原性。方法以克隆质粒pUC18-Strep4为模板,PCR法扩增四价重组蛋白基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒,转化E.coilM15,筛选阳性克隆,IPTG诱导表达。采用Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化重组蛋白。以该蛋白免疫家兔,ELISA法检测血清抗体滴度;间接免疫荧光法(IFA)检测A群链球菌型特异性抗体;体外杀菌试验检测杀菌抗体活性。结果四价重组蛋白表达质粒pQE30-Strep4经双酶切和测序,证明构建正确。重组蛋白相对分子质量与预期相符,表达量约占菌体总蛋白的30%,为可溶性表达。纯化后蛋白纯度可达90%以上,并可诱导家兔产生高滴度的M1、3、6型特异性杀菌抗体。结论已成功表达了A群链球菌四价重组蛋白,纯化后的蛋白可诱导家兔产生针对A群链球菌M1、3、6三个血清型菌株的特异性杀菌抗体。

非磷脂脂质体介导反义c-myc基因质粒转染对人脑胶质瘤细胞U251的影响

目的 确定非磷脂脂质体 (non phospholipidliposome ,NPL)介导反义c myc基因转染人脑胶质瘤 (glioma)的作用。方法 以金属离子诱导表达人反义c myc基因的质粒pHMTASCMHDNA与NPL结合转染人脑恶性胶质瘤细胞U2 5 1,转染 6h后加入 2 0 0 μmol/LZnCl2 作实验组 ,不加ZnCl2 转染细胞和单用NPL为对照组。在实验的第 2 4、48、72和 96h分别测定细胞还原四甲基偶氮唑盐 (MTT)的光吸收值。将实验第 2 4小时或 72小时的细胞分别进行annexin V FLUOS或TUNEL染色 ;细胞裂解后做ELISA检测c myc基因表达产物含量的变化。结果 显微镜下观察转染 48h实验组瘤细胞开始出现多角型细胞 ,细胞胞浆内产生空泡 ;MTT实验结果发现其细胞活性下降 ;annexin V FLUOS染色与TUNEL实验显示细胞出现明显的程序性细胞死亡特征 ;c myc基因表达产物下降。结论 非磷脂脂质体介导反义c myc基因转染脑胶质瘤细胞可特异性地抑制c myc基因表达 ,抑制瘤细胞生长 ,细胞活性下降 。

MHC分子在诱导口腔鳞癌CTL中的作用

目的 探讨肿瘤细胞上的主要组织相容性复合体 (majorhistocompatibilitycomplex ,MHC)分子在诱导自体口腔鳞癌细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocyte ,CTL)中的作用。方法 对 9例口腔鳞癌中的肿瘤细胞表面人类白细胞抗原 (humanleukocyteantigen ,HLA) ABC和HLA DR抗原进行检测 ,将其中 5例HLA ABC抗原表达 >5 0 %和HLA DR抗原表达 >35 %的病例作为研究对象 :①自体肿瘤细胞经处理后作刺激细胞 ,并用MHC单抗阻断刺激细胞上的HLA ABC和 (或 )HLA DR抗原 ,检测自体肿瘤细胞诱导的CTL的特异性杀伤活性及肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor,TNF) α的分泌水平。②阻断靶细胞上HLA ABC和 (或 )HLA DR抗原 ,观察MHC单抗对自体刺激细胞 (未加单抗处理 )诱导的CTL细胞毒的抑制作用。结果 ①各病例的各实验组刺激细胞诱导的CTL杀伤活性均显著低于对照组 ,依次为 :DR抗原阳性刺激细胞组 >ABC抗原阳性刺激细胞组 >ABC和DR抗原均阴性刺激细胞组 ,抗ABC单抗可完全阻断CTL特异性分泌TNF α ;②各实验组单抗对CTL的杀伤活性的平均抑制率分别为 :抗ABC单抗为 5 2 % ;抗DR单抗为 2 7% ;抗ABC单抗 +抗DR单抗为 72 %。 结论口腔鳞癌细胞上的MHC I。