免疫磁性分离技术在病原微生物检测中的应用

免疫磁性分离技术是通过磁场作用使得磁珠表面所吸附的靶标物从样品中分离的前处理技术。免疫磁珠捕获靶标后,免疫磁珠-靶标复合物磁吸固定在管壁,洗脱杂质即可得到靶标。免疫磁性分离技术富集效果主要受抗体特异性、磁珠直径、磁珠添加量、孵育时间和样本pH影响,其中抗体特异性是影响磁珠富集效果的关键。利用免疫磁珠可吸附抗体的特性,在酶联免疫吸附测定方法中替代包被步骤,可大幅减少检测时间;免疫磁性分离技术作为前处理方法,与其他检测方法联用后,可提高检测方法的灵敏度和检测效率。笔者从免疫磁性分离技术原理、一般分离步骤、常见影响因素,以及在酶联免疫吸附测定、免疫层析法、PCR、实时荧光定量PCR、环介导等温扩增反应、流式细胞术、电化学传感器、液相色谱法等应用方面进行阐述,为免疫磁性分离技术的研究及推广提供参考。

科前生物:科技创新为养殖业高质量发展“保驾护航”——湖北省农业科技创新之六

随着畜牧业的进一步发展,动物疫苗行业走上了快速发展的轨道。武汉科前生物股份有限公司(以下简称“科前生物”)是成立于2001年,专注于兽用生物制品研发、生产、销售及动物防疫技术服务的高新技术企业,主要服务于养殖业,尤其在养猪行业有着广泛的用户群体,且已遍布全国各地,拥有河南牧原、广东温氏、中粮集团等规模化用户,是国内最知名的猪用疫苗生产企业之一,2017-2020年,科前生物连续四年在国内非强制免疫猪用疫苗市场排名第一。

基于16S rRNA测序分析PRRSV感染仔猪肺和肠道中微生物菌群的变化

本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染对仔猪肺、肠道中的菌群影响以及肺和肠道的组织学变化。试验选取35日龄断奶健康仔猪14头,适应性饲养7 d,随机分为感染组(n=7)和对照组(n=7),感染组仔猪接种2 mL 1×10^(5) TCID 50·mL^(-1) PRRSV-JTS毒株病毒液,对照组仔猪接种2 mL DMEM培养基。感染组3头仔猪分别于10、12和19 d死亡,将存活的感染组与对照组仔猪于21 d后处死,并取肺、不同肠段组织样品以及肠道内容物。采用免疫组化染色和HE染色观察肺和肠道组织病理学变化,并基于16S rRNA基因的高通量测序分析仔猪肺和各肠段菌群结构。结果表明,感染组仔猪肺部和肠道均有病毒分布;与对照组仔猪相比,感染组仔猪肺部和肠道均存在明显的炎症反应。微生物组成结构及多样性分析显示,感染组仔猪Chao1、ACE指数在肺中上升,在仔猪各肠段中下降,Shannon、Simpon指数在肺中升高,在大多数肠道中下降。在门水平上,感染仔猪肠道变形菌门等有害微生物比例增加,而厚壁菌门等有益微生物比例下降;在科水平上,感染组肺、空肠中巴斯德菌科,十二指肠乳杆菌科,回肠肠杆菌科,盲肠、结肠、直肠中的瘤胃菌科相对比例有明显的下降,假单胞菌科在肺和十二指肠中的比例明显上升;在属水平上,感染组有益菌属乳酸菌属水平显著下降,β多样性证明小肠与大肠聚类效果具有一致性。综上,PRRSV致仔猪肺部病变和肠道炎症,影响肺部和肠道菌群组成、丰度和功能。

2020-2021年我国规模化猪场猪圆环病毒2型和3型的分子流行病学调查分析

采集13个省市自治区的491个规模化猪场的1447份疑似猪圆环病毒感染样本,通过荧光定量PCR方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的检测。分别随机选取50份PCV2和PCV3阳性样品,对其ORF2基因进行测序并分别进行核苷酸同源性比对和遗传进化分析。结果显示,样本中PCV2和PCV3检出率分别为29.16%(422/1447)和18.93%(274/1447)。规模化猪场中PCV2和PCV3检出率分别为47.05%(231/491)和15.68%(77/491),PCV2和PCV3混合感染率为23.81%,混合感染高于单一感染,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪肺炎支原体(MhP)等病原体以多种组合的混合感染形式出现。50个PCV2序列与16个参考毒株序列的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为75.6%~100%和83.1%~99.1%,PCV3对应同源性分别为95.9%~100%和96.3%~100%。分子遗传进化分析显示PCV2d占80%(40/50),PCV2a占4%(2/50),PCV2b占16%(8/50),未检测到PCV2c和PCV2e。PCV3a、PCV3b和PCV3c分别占28%(14/50)、22%(11/50)和50%(25/50)。表明2020-2021年我国规模化猪场PCV2的主要流行基因型是PCV2d,其次为PCV2a和PCV2b。PCV3c为我国规模化猪场中的主要流行基因型,而PCV3a和PCV3b流行率也依然较高。论文对我国猪圆环病毒的分子流行病学进行了数据补充,对临床防控起到了预警作用,也为猪圆环病毒疫苗的研发提供参考。

湖北地区鸡滑液囊支原体分离鉴定和致病性研究

[目的]分析2023年1月至2024年1月湖北地区鸡滑液囊支原体的遗传特性及致病性,为湖北省鸡滑液囊支原体防控提供理论依据。[方法]将PCR鉴定阳性的病料通过液体培养基分菌,对分离纯化菌株的vlhA基因序列进行测序,用MEGA11软件分析构建进化树,并通过鸡胚感染试验及45日龄SPF鸡感染试验验证致病性。[结果]发现3株鸡滑液囊支原体与近年来国内的流行株亲缘关系最近,其中HB分离株的鸡胚感染试验显示该菌株具有较强的鸡胚致死性;动物毒力感染试验结果表明,不同剂量的菌液感染45日龄鸡,连续观察14 d,感染剂量为2×10^(6)CCU/只时,90%的鸡出现临床症状,且爪垫、趾跗关节发病部位病原分离率达到96%,龙骨囊肿部位基本无法分离到病原。[结论]本研究建立了一株鸡滑液囊支原体分离菌株的体内感染模型并分析了其感染症状与致病性,为鸡滑液囊支原体疫苗的开发和免疫保护评价提供了基础。

猪伪狂犬病病毒变异株传代致弱JS18-150株的获得与鉴定

为获得安全性良好、免疫原性高的变异株弱毒苗,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养的方法对猪伪狂犬病病毒流行毒株JS18株进行传代,最终获得JS18-150株,随后通过PCR鉴定、测序、致病力试验和免疫效力试验对JS18-150株的体外生长特性、安全性和免疫原性进行初步研究。试验结果显示,在CEF上连续传代后,JS18株的gI、gE、US9基因缺失,获得的JS18-150株毒力已致弱,在CEF上适应性显著提高,与JS18株生长动力学相似;将JS18-150株以107.0TCID50/mL接种仔猪,所有仔猪均未观察到任何临床症状,且体温均未超过40.5℃;JS18-150株以106TCID50/mL接种仔猪后能保护仔猪有效抵御JS18株和HBZL05株的攻击。结果表明,JS18-150株对仔猪安全性良好,可作为PRV弱毒疫苗研制的候选毒株。

猫杯状病毒单克隆抗体的制备

制备猫杯状病毒(feline calicivirus,FCV)的特异性单克隆抗体,为FCV的免疫学诊断方法提供材料。本研究将经蔗糖梯度离心纯化的FCV灭活后免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,并对其进行一系列鉴定。结果成功获得1株能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株3B11。MAb 3B11抗体类型鉴定其重链属于IgG_(1)、轻链为κ链。MAb 3B11能与FCV-SH192发生特异性反应;小鼠腹水MAb 3B11对5株FCV毒株具有较高的ELISA效价;与5株FCV毒株具有间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)结合特性。本研究制备的MAb 3B11对FCV具有良好的特异性、免疫反应性及广谱识别性,为FCV诊断方法的优化、流行毒株筛选以及基础研究提供生物原料。

鉴别猪伪狂犬病病毒gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鉴别猪伪狂犬病病毒(PRV)gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,本试验依据PRV HB-98株和HB2000株的gE和gI基因缺失片段设计特异性引物和探针,优化反应体系,绘制标准曲线,进行特异性试验和敏感性试验,对临床样本和疫苗样本进行检测,并与商品化试剂盒的检测结果进行对比。结果显示,本试验建立的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的标准曲线R^(2)为0.9971;该方法特异性强,能区分PRV与其他常见的猪病原体;敏感性高,最低检测限为10 copies/μL;对临床样本的检测结果与商品化试剂盒的检测结果一致;能够区分PRV gI/gE基因部分缺失的疫苗株和野毒株。结果表明,本试验建立了一种特异性强、灵敏度高、适用范围广的鉴别诊断PRV gI/gE基因部分缺失疫苗株和野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。

猪肺炎支原体SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种快速高效的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)检测方法,根据NCBI公布的Mhp保守序列设计4对特异性引物,依据4对引物的荧光定量PCR检测结果及拟合曲线进行相关性分析,筛选出最佳引物(SX4),建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法。该方法可特异性检测Mhp,对猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌4型及链球菌2型等病原均无特异性扩增;最佳引物SX4检测的灵敏度可达4.9×10^(1) copies/μL,组内和组间变异系数均小于2%。该方法可稳定检测出工艺生产抗原和市售疫苗中的Mhp菌量。试验表明,本研究成功建立了Mhp SYBR Green Ⅰ实时荧光定量检测方法,其特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于Mhp疫苗抗原生产和临床疫苗中的Mhp菌量检测。

关于当前人间新型冠状病毒肺炎疫情防控对我国养牛企业生产影响及其应对措施建议

自2020年1月以来,新型冠状病毒(简称“新冠”)肺炎疫情在局地爆发,隔离、封锁和交通管制已成为阻断人间传染源传播的重要防控措施。为摸清现阶段这些疫情防控措施对养牛业的影响,我们对全国38个养殖单位进行调查。调查结果显示,交通管制给绝大部分养牛场饲料、兽药和疫苗等生产物资的供应带来障碍,湖北省尤其严重;并且产品(奶、牛、肉)加工和上市受阻。同时,有可能因牛群防疫计划不能正常实施、牛病不能及时处置等原因导致动物疫病爆发、长期倒奶导致环境污染等次生灾害。据此,我们对相关部门和养殖企业提出了应对措施和政策建议,以期为当前新型冠状病毒肺炎疫情下保持养牛业稳定发展提供数据和政策支持。

新形势下中小规模猪场硬件建设的关键措施

新形势下猪场生物安全水平决定生存空间,中国养猪业的重要群体中小规模猪企建立符合自身发展的猪场硬件系统非常重要。收集中小规模猪场硬件建设的有效方案和现代化设施设备,归纳总结猪场建设选址与合理规划、生物媒介防控、车辆洗消与烘干、人员与物资管控、猪群通道管理、粪污处理、栏体与饮水构件、通风与环境控制、饲喂料线设备和其他配套硬件的关键措施,说明合理的硬件建设是中小规模猪场安全生产的基础。

1例猪感染混合疾病的防控措施

疫病防控水平决定猪场的生存能力,而猪病的混合感染不仅严重危害猪群健康,还增加了医疗难度,给猪场造成巨大的经济损失。2023年上半年,某规模化猪场发现了猪病混合感染,经实验室检测,诊断为猪圆环病毒2型与副猪嗜血杆菌、猪链球菌混合感染。通过优化生物安全方案、落实疫苗免疫方案和适时进行中药调理等综合防控措施解决了该规模化猪场的疾病混合感染问题,提升了猪群的抗疫病风险能力和猪场的经营水平。

引种引发的猪流行性腹泻疫情及应对策略

【目的】明晰西北地区某2 900头母猪场的2个分场出现大面积哺乳仔猪腹泻疫情原因。【方法】通过采集患病哺乳仔猪的腹泻样本、小肠内容物、产房母猪粪便和初乳乳汁样品进行实验室病原检测。【结果】送检的7份样品中检测出了6份猪流行性腹泻病毒阳性病原,5份样品的猪轮状病毒检测结果呈弱阳性,进而对猪群感染的猪流行性腹泻临床毒株S1基因进行了测序,测序结果显示该毒株与国内当前流行的变异毒株同源性更高,采取疫苗免疫和生物安全措施的综合防控方案成功解决了该猪场腹泻问题,生产稳定后哺乳仔猪的成活率达到了98%。【结论】疫情溯源为后备母猪感染猪流行性腹泻病毒并在产房传播导致猪流行性腹泻疫情暴发,因此,规模化猪场进行疫苗免疫对猪群防控猪流行性腹泻感染非常重要,合理的生产管理和生物安全措施也是猪场防控猪流行性腹泻不可或缺的手段。

当前新发伪狂犬病的分子流行特点及防控方案

猪伪狂犬病(PR)是由伪狂犬病毒(PRV)引起的一种急性传染病,主要以种猪繁殖障碍、新生仔猪急性死亡、断奶-育肥猪莫名发热和呼吸道症状为主要临床表现,已成为猪场重点防控的病毒性传染病。20世纪80年代,该病在我国大面积暴发流行,给国内养殖业带来严重损失。随着伪狂犬病疫苗的广泛应用,该病得到了很好的控制,在国内一直处于平息状态。但自2011年以来,猪伪狂犬病卷土重来,先后在全国不同地区暴发流行,引起了业界的广泛关注和深刻反思。"伪狂犬病毒是否发生变异或毒力增强"、"猪伪狂犬病防控方案是否出现漏洞"、"传统疫苗还能不能提供有效保护"等种种猜测一直在业内流传,笔者所在实验室近年来进行了大量的研究,并相继从临床分离到三十多株伪狂犬病新变异毒株,一些研究结果和数据分析或许为猪伪狂犬病疫情再发找到了佐证。针对猪伪狂犬病流行新形势和发病新特点,结合临床疫情处理和成功防控案例,及时调整免疫策略,探寻一种更为有效的伪狂犬病免疫方案,在当前变异伪狂犬病阳性感染场或受威胁场推广应用中显得尤为重要。

2株牛源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物特性

为了诊断广东某养殖场肉牛连续出现发热、呼吸困难、病死等原因,对死亡牛进行病理剖检,采集肺、肝组织进行细菌分离。采用染色镜检和16S rRNA序列测定对分离菌进行鉴定;分型PCR对分离菌进行分型,并分析其系统进化;药敏试验分析药物敏感性;绘制生长曲线,挑取对数期细菌进行小鼠攻毒试验确定分离菌的毒性。结果显示:2株分离菌均为革兰阴性杆菌;分型及测序结果显示,2株分离菌均为荚膜A型多杀性巴氏杆菌;生长曲线显示,2株分离菌在6 h后进入平台期,12 h活菌数达到峰值;药敏试验结果显示,分离菌对克林霉素和阿米卡星耐药,对头孢哌酮和左氧氟沙星最敏感;测序发现,分离株与海南株具有较高亲源性;小鼠攻毒试验的结果显示,本菌具有强毒性,可引起小鼠出血性败血症,导致小鼠死亡。结果表明肉牛病死原因可能为多杀性巴氏杆菌感染,应选用敏感药物及时控制牛群继续发生该病。

两株猪链球菌血清9型菌株的生物特性分析

为了解猪链球菌血清9型菌株KQ-1株、KQ-2株的生物特性,对其进行了菌种鉴定、生长曲线绘制、毒力因子鉴定和小鼠致病性试验。首先采用革兰氏染色、PCR鉴定的方法对2株菌进行菌种鉴定,然后利用猪链球菌的主要毒力基因mrp、epf、sly、gadph、orf2、fbps、89k的引物对2株菌的毒力基因进行鉴定;将2株菌在TSB培养基(含10%新生牛血清)中进行培养,绘制其生长曲线,初步了解这2株菌的生长特性;选取45只健康的昆明鼠注射2株菌的菌液,进行致病性试验,了解其致病性。结果显示,KQ-1株、KQ-2株革兰氏染色呈阳性,PCR鉴定结果为猪链球菌血清9型;2株菌均在37℃培养6 h时菌液密度达到最高值。对2株菌毒力基因的鉴定结果如下:KQ-1株的基因型为mrp+/epf-/sly+/gadph+/orf2-/fbps-/89k-,KQ-2株的基因型为mrp-/epf-/sly-/gadph+/orf2+/fbps-/89k-;对2株菌的小鼠致病性试验表明,2株菌均为强毒株。

猫泛白细胞减少症病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒1型三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用

为建立一种能够快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的三重荧光定量RT-PCR方法,本研究根据FPV VP2基因、FCV ORF2基因和FHV-1 TK基因分别设计引物与探针,采用上述引物经PCR分别扩增上述3种病原的目的基因并克隆至pMD18-T载体中,构建重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1,并均经PCR和测序鉴定。将3种重组质粒标准品稀释到同一浓度1×10^(8)拷贝/μL,按体积比1∶1∶1混合后作为模板,采用方阵法优化各反应条件后,建立了检测上述病原的三重TaqMan荧光定量RT-PCR方法。以FPV、FCV、FHV-1、猫博卡病毒、猫冠状病毒、猫支原体、猫白血病病毒、猫星状病毒的基因组为模板采用本研究建立的方法检测,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅能检测到FPV、FCV、FHV-1,而其他病原的检测结果均为阴性。选取1×10^(0)拷贝/μL~1×10^(6)拷贝/μL的混合质粒标准品和10^(-0.5) TCID_(50)/mL~10^(5.5) TCID_(50)/mL的混合病毒液分别作为模板,采用本研究建立的方法检测,评估该方法检测重组质粒和病毒的敏感性,结果显示,该方法对重组质粒标准品pMD18-T-FPV、pMD18-T-FCV和pMD18-T-FHV-1的检测限均为1.0×10^(1)拷贝/μL,对3种病毒的检测限均约为10^(0.5) TCID_(50)/mL;以1×10^(7)拷贝/μL、1×10^(5)拷贝/μL、1×10^(3)拷贝/μL质粒标准品混合物作为模板分别进行组内和组间的重复性试验,结果显示,组内和组间重复性试验的变异系数(CV)均低于3%。利用建立的该三重荧光定量RT-PCR和常规PCR对81份临床样品(77份猫的眼、鼻、咽、肛混合拭子样品和4份组织病料样品)分别检测,结果显示三重荧光定量RT-PCR检测出47份FPV、13份FCV和13份FHV-1阳性样品,而常规PCR分别检测出39份FPV、9份FCV和6份FHV-1阳性样品,该三重荧光定量RT-PCR与FPV、FCV、FHV-1常规PCR的总符合率分别为90.12%、95.06%、92.59%。本研究建立的三重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,为FPV、FCV、FHV-1临床样品的快速鉴别检测提供了有力技术支持。

规模化猪场常见呼吸道细菌性病原的流行病学调查

【目的】掌握中国规模化猪场猪呼吸道疾病综合征主要细菌性病原的感染情况。【方法】2021年采集来自全国26个省、市、自治区的647个规模化猪场中有明显呼吸道症状猪的肺脏、气管及分泌物、脾脏和淋巴结等病料2204份。将病料接种平板后进行纯化培养,可疑菌落通过形态学观察、革兰染色和PCR进行鉴定,对分离的猪链球菌(Streptococcus suis,SS)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)和胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)进行血清型分析、混合感染分析和药敏试验。【结果】从病料中分离鉴定出647株病原菌,病原菌分离率为29.35%(647/2204),其中包括306株SS(13.88%)、137株Hps(6.22%)、86株Pm(3.90%)、74株Bb(3.35%)和44株APP(2.00%)。对分离到的SS、Hps和APP进行血清型鉴定,其中SS以血清2型为主,Hps以血清5、13和4型为主,APP以血清1型为主。混合感染结果显示,单一病原菌感染猪场407家,分离到214株SS、82株Hps、38株Pm、47株Bb、26株APP。二重混合感染猪场70家,以SS+Hps(22家)及SS+Pm(18家)为主。三重混合感染猪场6家,以SS+Hps+Pm(2家)及SS+Hps+APP(2家)为主。药敏试验结果显示,分离菌对19种抗菌药表现出不同程度耐药,所有的分离菌对强力霉素和林可霉素耐药,其中Bb表现出严重的多重耐药。【结论】本研究共分离到647株猪呼吸道病原菌,SS以血清2型为主,Hps以血清5、13和4型为主,APP以血清1型为主。不同病原菌之间的混合感染类型复杂,SS+Hps是最常见的混合感染类型。不同病原菌对19种抗菌药表现出不同程度耐药。本研究结果为监测中国规模化猪场细菌性疾病的流行病学提供数据,对其防控提供参考依据。

主动免疫GnRH疫苗对公犬生殖功能的影响

为了探究促性腺激素释放激素(GnRH)疫苗对公犬生殖功能的影响,试验将GnRH基因克隆至原核表达载体中,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,用终浓度为1 mmol/L IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行蛋白鉴定,将鉴定正确的GnRH蛋白纯化后制备成抗原。选取6只2~4月龄健康公犬随机分成2组,每组3只,其中免疫组每只犬免疫GnRH蛋白1 mg,共免疫3次,每次间隔4周,分别于免疫前和一免、二免、三免后14天采血,通过ELISA检测血清GnRH抗体及睾酮水平,并于最后一次采血结束后制备睾丸组织切片,观察睾丸组织形态。结果表明:3次免疫后免疫组GnRH抗体水平均显著高于对照组(P<0.05),睾酮水平均显著低于对照组(P<0.05),免疫组睾丸相对较小,曲精小管中生精细胞数量较少,管径较细。说明主动免疫GnRH疫苗抑制了公犬的性腺发育和生殖器官的成熟。

2017-2021年我国多个省份猪场猪圆环病毒2型流行病学调查

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)在我国部分省份的流行情况,本试验在2017-2021年期间于湖北、河南、湖南、江西、浙江、河北、福建和山东8个省份127个规模化猪场采集了2357份病料样品,使用聚合酶链式反应(PCR)对PCV2进行病原检测,同时对PCV2的单独感染和PCV2与其他病原体的混合感染进行分析,并对华中地区的50株PCV2进行遗传演化分析。结果显示,8个省份的PCV2阳性率介于52.17%~67.78%;不同年份PCV2阳性率介于50.53%~71.85%;共检出PCV2阳性样品1436份,总体阳性率为60.92%;PCV2单独感染率为15.18%,PCV2与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的混合感染率为22.08%,PCV2与猪肺炎支原体(MHP)、猪链球菌(SS)的混合感染率为18.31%;遗传演化分析发现,PCV2d亚型占阳性样品数的80%(40/50),PCV2a亚型占4%(2/50),PCV2b亚型占16%(8/50),未发现PCV2c和PCV2e亚型。结果表明,我国华中地区PCV2的感染率较高,且PCV2和PRRSV及PCV2和MHP、SS的混合感染率高于PCV2的单独感染率,同时PCV2d亚型已经成为华中地区当前PCV2流行的优势毒株。