共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒载体构建及鉴定

目的构建共沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,为进一步以Birc5和Hspa5作为肿瘤生物治疗靶点研究提供基础。方法使用Ambion Target Finder设计Birc5和Hspa5mRNA的干扰序列;挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序鉴定;采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5和Hspa5的双干扰siRNA质粒,命名为pgsiRNA-Birc5+Hspa5,酶切鉴定;将pgsiRNA-Birc5+Hspa5转染HepG2细胞48h后采用Real-time PCR检测Birc5和Hspa5的mRNA表达水平。结果经酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5-siRNA和Hspa5-siRNA测序结果显示均为插入正确的克隆质粒;经酶切鉴定分析显示pgsiRNA-Birc5+Hspa5符合酶切鉴定结果;转染pgsiRNA-Birc5+Hspa5 48h后HepG2细胞Birc5和Hspa5mRNA表达均显著下降,未转染组Birc5和Hspa5mRNA的相对表达量均为1.0,pgsiRNA-Birc5+Hspa5组Birc5为0.15(P<0.05),Hspa5为0.37(P<0.05),表明双干扰载体构建成功。结论成功构建了Birc5和Hspa5双干扰siRNA质粒,为进一步同时靶向沉默肿瘤Birc5和Hspa5基因研究提供了工具和基础。

美金刚减轻异氟烷麻醉引起的老年小鼠认知功能障碍

目的研究异氟烷麻醉对老年小鼠神经行为和学习记忆能力的影响,并探讨其可能的机制及美金刚的保护作用。方法 60只45周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分成3组:对照组(Con)、异氟烷组(Iso)、美金刚+异氟烷组(Mem+Iso)。Con组的小鼠仅吸入氧气2h,Iso组的小鼠吸入混合1.5%异氟烷的氧气2h,Mem+Iso组小鼠在吸入异氟烷前2h,以8mg/kg美金刚灌胃,Con组和Iso组小鼠用等量生理盐水灌胃。在异氟烷处理后12h时每组取10只小鼠分离海马组织进行Western blot检测磷酸化-tau(P-tau)蛋白表达,ELISA法检测IL-1β水平。异氟烷处理后48h剩余小鼠进行Morris水迷宫实验。结果与Con组比较,Iso组小鼠空间学习记忆能力明显下降,海马P-tau表达上调,IL-1β水平明显增加(均P<0.05);与Con组比较,Mem+Iso组小鼠空间学习记忆能力、海马P-tau表达、IL-1β水平差异无统计学意义(均P>0.05);与Iso组相比,Mem+Iso组小鼠空间学习能力明显增强,海马内P-tau表达下调,IL-1β水平明显减少(均P<0.05)。结论异氟烷麻醉能使老龄小鼠发生认知功能障碍,引起海马P-tau、IL-1β水平增加;而美金刚可改善其行为认知损害,下调P-tau、IL-1β表达,对异氟烷麻醉引起老年小鼠认知功能障碍具有保护作用。