Nudel基因的克隆及在COS7细胞中的表达研究

本实验克隆并构建了携带红荧光报告基因的Nudel真核表达载体,为后续研究Nudel基因的功能打下基础。查阅Gene card可知,Nudel基因在肺组织中的RPKM值为7.97,本研究以人肺癌细胞A549细胞为材料,提取总RNA并反转录出cDNA,再以cDNA为模板扩增Nudel基因;将目的基因与pMD18-T载体连接,测序鉴定并命名为pT-Nudel;然后再将Nudel基因亚克隆至含红荧光报告基因的载体pDsRed-C1,构建的表达载体命名为pRed-Nudel;提取去内毒素的超纯质粒,转染COS7细胞,检测Nudel的表达情况以及抑癌基因Pten对Nudel表达的影响。结果表明,克隆的Nudel基因经测序鉴定正确;将Nudel基因亚克隆至红荧光表达载体pDsRed-C1,成功构建pRed-Nudel,并在COS7中成功表达。同时观察到与突变型的PtenC124S相比,野生型的Pten有抑制Nudel表达的可能,需要后续的实验进一步验证。