重组G5P蛋白的原核表达纯化及与PrP^Sc结合能力的鉴定

目的利用基因克隆技术制备重组G5P蛋白,并鉴定其结合朊病毒(PrPSc)的能力。方法化学合成G5P全长基因核苷酸片段,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)质粒中,获得pET-28a-c(+)-G5P重组质粒。将其转化到E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达,经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化重组G5P蛋白。制备重组G5P蛋白偶联磁珠,将其与含有或不含有PrP^Sc的人脑匀浆液混合,进行PrP^Sc的捕获实验。利用Western blot检测技术鉴定重组G5P蛋白与PrP^Sc结合的特异性与结合力。结果成功获得纯化的重组G5P蛋白,捕获实验显示重组G5P蛋白偶联磁珠仅从散发性克雅氏病(sCJD)患者的脑匀浆液中捕获到朊蛋白,而从非CJD患者的脑匀浆液中未捕获到朊蛋白。捕获的朊蛋白经蛋白酶K处理后仍能检出Western blot条带,证明重组G5P蛋白结合的朊蛋白为PrP^Sc而非正常朊蛋白。将sCJD患者的脑匀浆液稀释10000倍后重组G5P蛋白仍可捕获到PrP^Sc。结论该研究利用基因克隆技术成功获得了纯化的重组G5P蛋白。该蛋白具有特异性结合PrP^Sc的能力,并具有较高亲和力。这为下一步研发新型朊病毒检测技术和滤除技术打下基础。

ABO血型不合异基因造血干细胞移植后不同血型混合红细胞的分离鉴定

目的建立不同血型混合红细胞的分离鉴定方法，应用于ABO血型不合造血干细胞移植患者的混合红细胞分离鉴定及植活红细胞研究。方法应用红细胞血型抗原与相应抗体反应凝集，800×g和50×g分步离心，分离并收集凝集的和未凝集的红细胞进行计数和鉴定。结果18例ABO血型不合造血干细胞移植后均成功分离鉴定出植活红细胞和患者自身红细胞。初次分离鉴定出植活红细胞的时间为移植后第11天至第72天。植活红细胞数量随移植后时间改变。本分离方法的灵敏度为1％，准确度为100％，回收率为92．5％，重复性为100％。结论本方法可广泛用于不同血型混合红细胞的分离鉴定，为进一步研究干细胞移植患者2种不同红细胞变化的临床意义提供可靠的实验方法。

2018—2020年湖北省临床用血质量控制指标分析

目的分析2018—2020年湖北省临床用血质量控制指标, 探讨临床用血质量管理策略。方法调查2018—2020年湖北省244家二级及以上用血医院的临床用血质量控制数据, 包括每千单位用血输血专业技术人员数、输血相容性检测室内质控率、输血相容性检测室间质评参加率、出院患者人均用血量和手术患者自体输血方式开展率等, 比较各指标之间的差异。结果湖北省2018—2020年各指标总体分析呈逐年升高趋势, 但差异无统计学意义(P>0.05)。各指标在湖北省各地间的分布存在不均衡(P<0.05);三级医院出院患者人均用血量、输血相容性检测室内质控率、输血相容性检测室间质评参加率和手术患者自体输血方式开展率均显著高于二级医院, 而千单位用血输血专业技术人员数低于二级医院, 差异均有统计学意义(P<0.05);综合医院出院患者人均用血量、输血相容性检测室间质评参加率和手术患者自体输血方式开展率显著高于专科医院, 千单位用血输血专业技术人员数显著低于专科医院, 差异均有统计学意义(P<0.05);公立医院输血相容性检测室内质控率、输血相容性检测室间质评参加率和手术患者自体输血方式开展率显著高于民营医院, 但输血专业技术人员数却低于民营医院, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论湖北省临床用血总体质量稳中有升, 但各地区间临床用血质量还存在一定的不平衡, 三级医院显著高于二级医院, 综合医院显著高于专科医院, 公立医院显著高于民营医院, 但三级、综合、公立医院的输血专业技术人员配置有待加强。

Oh^A分泌型血型一例

患者男，58岁。系武汉市蔡甸区侏儒镇农民，其父母已亡，有兄弟3人、姐妹2人，其祖辈迁徙情况不详。其子辈1男1女。其妻祖辈至今均居住在当地。因其同辈居住分散，只有1弟参与本调查。