病例讨论在病理生理学教学中的应用

病例讨论式教学法是理论联系实际的有效教学方法,可以激发学生的学习兴趣、培养学生的创造性思维;也有利于提高教师的综合素质。本文探讨了病例讨论式教学法在病理生理学教学中的具体应用及体会。

病理生理学自主设计性实验教学方法的实践与探索

从学生自主设计性实验教学的课前准备、设计方案的讨论、具体实验的完成及实施效果等方面介绍了病理生理学自主设计性实验教学改革的实践。该项实验教学改革为提高学生的创新思维能力和运用知识解决实际问题的能力以及培养高层次医学人才奠定了基础。

武警部队医疗专升本病理学教学之我见

病理学是重要的医学基础学科,专升本是成人教育的重要组成部分,是专科后的学历教育,许多在职人员需要通过专升本教育来更新、提高自身的知识结构和专业素质,结合武警部队医疗工作人员的实际情况,就专升本病理学教学的实际情况谈几点体会。

ZNF580-EGFP融合蛋白的亚细胞定位研究

目的:构建增强型绿色荧光报告蛋白(EGFP)与人ZNF580融合蛋白的真核表达载体,转染MGC803细胞进行表达,研究ZNF580-EGFP融合蛋白在MGC803细胞的亚细胞定位。方法:利用PCR技术扩增ZNF580基因cDNA开放阅读框架全编码区、N端编码区、C端编码区,分别克隆到真核表达载体pEGFP-C1,BglⅡ及HindⅢ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。荧光显微镜下观察ZNF580-EGFP在MGC803细胞中的表达及亚细胞定位。结果:酶切pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(1-93)、pEGFP-ZNF580(94-172),电泳分析插入片段长度分别为:526bp、289bp、247bp,经连接点两端进行测序证实连接正确。pEGFP-ZNF580(1-172)、pEGFP-ZNF580(94-172)表达的ZNF580-EGFP融合蛋白定位在MGC803细胞核。结论:成功构建真核表达载体并在MGC803细胞中得到表达,分析其核定位信号可能位于ZNF580蛋白的C端C2H2型锌指主构域94-172位氨基酸区间。

低体温与心率变异性和血压变异性的关系

目的:研究低体温与自主神经功能变化的关系。方法:采用体表物理降温法逐步降低直肠温度,直肠温度变化范围为19-37℃。分别记录不同直肠温度下大鼠动态心电和血压信号。应用心率变异性和血压变异性分析系统评价低体温对心率变异性和收缩压变异性的影响。结果:心率变异分析表明,直肠温度下降到29℃以下,R-R间期均延长(P<0.01),提示心率明显降低;当直肠温度下降到19-21℃时,心率变异归一化低频功率降低(P<0.05)和归一化高频功率增加(P<0.05),而且自主神经的平衡向心迷走神经张力增强的方向发生了转移(P<0.05)。血压变异性分析表明,体温下降到31℃时与呼吸有关的归一化高频功率开始增加(P<0.01);直肠温度下降到29℃以下(除27℃外),与呼吸有关的归一化高频功率增加(P<0.05或P<0.01),同时自主神经的平衡也发生了改变(P<0.05)。结论:随着体温的降低,心血管迷走神经活性增加,自主神经的平衡向迷走神经张力增强的方向转移。低体温对血压变异性的影响敏感于心率变异性。

吗啡条件性位置偏爱与海马一氧化氮合酶的关系

目的探讨吗啡条件性位置偏爱(CPP)小鼠海马不同亚区神经元一氧化氮合酶(NOS)的变化。方法采用NADPH d组织化学法显示海马NOS的变化。结果吗啡组海马齿状回NOS阳性神经元数目(27. 88±14. 20)明显多于盐水组(7. 00±3. 12) (P<0. 01),而CA1区和CA3区无明显变化(P>0. 05)。结论海马神经元NOS的表达增多与吗啡精神依赖的形成有关。

吗啡依赖小鼠海马神经元c-fos的表达

目的:探讨吗啡依赖小鼠海马不同亚区神经元c-fos表达的差异。方法:以剂量递增法皮下注射吗啡建立吗啡依赖小鼠模型,腹腔注射纳洛酮诱发戒断症状。根据小鼠戒断反应中出现的跳跃次数、体重下降等指标评定戒断反应强度。采用免疫组织化学法显示吗啡依赖小鼠和正常对照组小鼠海马神经元c-fos的表达。结果:吗啡依赖组海马CA1区和齿状回Fos阳性神经元数目明显增加(P<0.05),CA3区无明显改变(P>0.05)。纳洛酮催促戒断组海马CA1和CA3区Fos阳性神经元数目明显增加(P<0.05),齿状回Fos阳性神经元数目增加更为明显(P<0.01)。吗啡依赖组与纳洛酮催促戒断组CA3区阳性神经元数目有显著性差异(P<0.05)。结论:海马神经元c-fos的表达增强可能与吗啡依赖对神经元的损伤有关。

一氧化碳对硫化氢舒张大鼠肺动脉作用的影响

目的观察在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导下,一氧化碳(carbon monoxide,CO)对硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)舒张肺动脉作用的影响。方法气管内滴注生理盐水或LPS后,制备肺动脉环(pulmonaryartery rings,PARs),应用血管环张力测定技术,分别在给予CO供体氯血红素(hemin,Hm)或血红素氧合酶1抑制剂锌原卟啉9(zinc protoporphyrin-IX,ZnPP-IX)的条件下,从离体水平观察PARs对H2S供体硫氢化钠(sodiumhydrosulfide,NaHS)舒张反应变化,同时检测出肺血(out-going pulmonary blood,OPB)和入肺血(in-flowing pulmonaryblood,IPB)中碳氧血红蛋白(carboxyhemoglobin,COHb)含量,以其差值反映肺循环CO生成的水平。结果滴注LPS4 h和8 h后,用Hm孵育PARs后,PARs对NaHS的累积浓度舒张反应较孵育前显著增强(P<0.01),曲线左移;相反在滴注LPS 8 h后,用ZnPP-IX孵育PARs,PARs对NaHS的累积浓度舒张反应较孵育前明显减弱(P<0.01),曲线右移,而在滴注4h后,ZnPP-IX对PARs的舒张反应无明显影响。与对照组相比,滴注LPS 8 h后,OPB与IPB中COHb含量的差值明显增高(P<0.05),而滴注LPS 4 h后无明显变化(P>0.05)。结论在LPS诱导下,CO可以增强H_2S舒张肺动脉的作用。

肾上腺素诱导大鼠急性肺水肿模型的复制

【目的】复制大鼠急性肺水肿模型,确定适合用于学生实验的大鼠肺水肿造模条件,并探讨其产生的机制。【方法】低、中、高剂量实验组大鼠分别腹腔注射1.0、2.0、3.0 mg/100 g体重的肾上腺素复制大鼠急性肺水肿模型。用BL-410生物机能实验系统描记心电图和呼吸曲线并计算肺系数(肺重/体重)。【结果】1.0 mg/100 g剂量组大鼠心电图及呼吸曲线变化不明显,3.0 mg/100 g剂量组在未形成典型的肺水肿前,大鼠死亡率高,实验结果不理想。2.0 mg/100 g剂量组呼吸及心电图曲线均变化明显,所测得的肺系数远远大于正常值。【结论】2.0 mg/100 g肾上腺素组大鼠肺水肿症状典型,适宜用于学生实验。

挤压性脊髓损伤大鼠模型的建立

目的:建立一种简便易行的挤压性脊髓损伤动物模型。方法:将大鼠随机分为3个实验组和1个对照组,3个实验组采用改良动脉夹置于椎管壁和硬脊膜之间横行压迫脊髓,分别持续5、15及30 s,对照组只暴露脊髓后缝合。测定各组手术损伤后即刻、7、14 d脊髓运动诱发电位(MEP)并进行改良Tarlov评分。结果:3个实验组手术损伤后MEP N1波潜伏期均明显延长,主波振幅显著降低或消失;改良Tarlov评分亦显著降低,随饲养时间延长MEP和改良Tarlov评分有不同程度恢复。结论:挤压5、15、30 s可分别复制出轻、中、重度脊髓损伤大鼠模型,此造模方法无需特殊实验仪器,简便易行,可重复性强,具一定推广价值。

乌拉坦麻醉深度与家兔心脏自主神经功能的关系

目的观察乌拉坦不同麻醉深度下家兔心脏自主神经功能的变化特征。方法应用心率变异性(HRV)分析确定静脉注射不同累积剂量乌拉坦(0.50、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.50 g/kg)对家兔自主神经的张力及均衡性的影响。结果时域成分:与剂量0.50 g/kg相比,心率在累积剂量1.25、1.50和1.75 g/kg时加快(P<0.05),R-R间期在相应的3个剂量减小(P<0.05);正常R-R间期的标准差在累积剂量1.00 g/kg之后减小(P<0.05或P<0.01),R-R间期总变异在累积剂量1.25 g/kg之后减小(P<0.05或P<0.01)。频域成分:与剂量0.50g/kg相比,低频功率在累积剂量1.25、1.50、2.00、2.25和2.50 g/kg减小(各P<0.05),但归一化低频功率无变化;高频功率(HF)在各累积剂量间无变化,但归一化高频功率在累积剂量1.25 g/kg之后均增大(P<0.05);LF/HF在累积剂量1.00 g/kg之后显著减小(P<0.01)。结论乌拉坦麻醉过程中,家兔HRV降低的主要原因是心脏迷走副交感神经活性增加。

酸碱平衡紊乱理论教学的思考与实践

酸碱平衡紊乱是病理生理学理论教学中的重点和难点。为了让学生能够深入理解和全面掌握本章内容，通过多年的教学实践，总结出一套切实可行的“三步走”理论教学方法，收到了良好的教学效果。

吗啡依赖小鼠前脑皮质神经元神经营养因子-3的表达

目的:探讨吗啡依赖小鼠前脑皮质神经元神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的表达。方法:采用免疫组织化学法显示吗啡依赖小鼠前脑皮质神经元NT-3的表达。结果:吗啡依赖组和纳洛酮诱发戒断组小鼠前脑皮质NT-3密度均明显增加(P<0.01)。结论:NT-3参与了吗啡依赖对前脑皮质神经元损害的保护作用。

ZNF580基因原核表达载体的构建与鉴定

【目的】构建ZNF580基因原核表达载体,为获得大量重组ZNF580蛋白并制备其多克隆抗体奠定基础。【方法】根据ZNF580cDNA序列的开读框架设计上、下游引物,利用PCR技术扩增ZNF580开放阅读框cD-NA序列,将PCR扩增的目的片段与载体pET30a分别双酶切、回收纯化后做定向连接,EcoRI、XhoI双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】双酶切pET30a-ZNF580,电泳分析插入片段长度为524 bp,与预期的结果一致,经连接点两端进行测序,测序结果显示接头两端序列连接正确。【结论】成功构建原核表达载体pET30a-ZNF580。

硫化氢对脂多糖诱导大鼠肺动脉反应性和损伤的影响

目的 观察硫化氢（H2S）对脂多糖（LPS）所致肺动脉反应性紊乱和肺动脉损伤的影响.方法 72只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS＋生理盐水（NS）组,每组18只.采用气管内滴注0.8 ml/kg LPS（200 μg/200 μl）染毒.滴注LPS之前10 min和之后2 h分别经腹腔注射0.5 ml NaHS（28 μmol/kg）.实验12 h处死大鼠,取颈动脉血,检测血清H2S含量;制备肺动脉环（PARs）,采用离体血管环张力测定技术检测血管反应性变化;检测肺动脉丙二醛（MDA）含量,并观察肺动脉形态学改变.结果 与对照组相比,滴注LPS后,PARs对苯肾上腺素（PE,10^-6 mol/L）的收缩反应（g/mg）明显升高（0.86±0.20比0.56±0.13）,对乙酰胆碱（ACh,10^-6 mol/L）的舒张反应明显降低[（65.18±7.05）%比（84.13±8.84）%],肺动脉组织MDA含量（mmol/L）升高（32.03±7.81比5.82±0.92）,血清中H2S含量（μmol/L）降低（175.23±27.36比238.12±16.38）,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;组织形态学观察显示,肺动脉内皮细胞和组织结构严重受损.给予NaHS后可明显改善LPS引起的上述变化,血管收缩反应下降[（0.61±0.17） g/mg],血管舒张反应升高[（82.92±9.71）%],肺动脉组织MDA含量下降[（16.88±3.54） mmol/L],血清H2S含量升高[（242.70±38.80） μmol/L],差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;肺动脉内皮细胞和组织结构损伤也得到明显改善.NaHS＋NS组除H2S含量显著高于对照组外,余指标与对照组比较差异无统计学意义.结论 外源性应用H2S不仅可逆转LPS引起的肺动脉反应性紊乱,还可减轻LPS引起的肺动脉组织损伤.

硫化氢逆转脂多糖诱导大鼠肺动脉低反应性以及与一氧化碳的关系

目的 观察整体水平应用硫化氢（H2S）后脂多糖（LPS）诱导的离体肺动脉对H2S舒张反应的变化及其与一氧化碳（CO）的关系.方法 将48只大鼠按照随机数字表法分为对照组[给予生理盐水（NS）]、LPS组、H2S供体硫氢化钠（NaHS）＋LPS组和NaHS＋NS组4组,每组12只.采用经大鼠气管内滴注LPS（0.8 ml/kg）染毒;NaHS±＋LPS组和NaHS±NS组滴注LPS或NS之前10 min和之后2 h腹腔注射NaHS各0.5 ml（28 μmol/kg）.各组取6只大鼠于染毒后12 h制备肺动脉环（PARs）,采用离体血管环张力测定技术检测用血红素氧合酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPPⅨ）孵育前后PARs对累积浓度NaHS的舒张反应变化;各组另取6只大鼠于染毒后12 h检测出肺血（EPB）和入肺血（APB）中碳氧血红蛋白（COHb）含量,以其差值反映肺循环CO生成的水平.结果 与对照组相比,滴注LPS后PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显降低[（75.72±7.22）%比（96.40±4.40）%,P＜0.01＝;用ZnPPⅨ孵育PARs后,LPS诱导的PARs对NaHS舒张反应进一步降低[（62.91±8.22）%比（75.72±7.22）%,P＜0.01＝.腹腔注射NaHS可明显逆转LPS诱导的PARs对NaHS的低反应性,PARs对NaHS的最大舒张反应百分比明显升高[（94.65±8.45）%比（75.72±7.22）%,P＜0.01＝;但用ZnPPⅨ孵育PARs后,PARs对NaHS的舒张反应较孵育前显著下降[（83.75±9.76）%比（94.65±8.45）%,P＜0.01＝.NaHS＋NS组中PARs对NaHS的舒张反应与对照组相比无明显差异,且在ZnPPⅨ孵育前后也无明显变化.COHb检测结果显示,与对照组相比,滴注LPS后APB和EPB中COHb水平的差值明显增高[（3.12±0.48）%比（2.12±0.32）%,P＜0.05＝;腹腔注射NaHS后,COHb水平的差值[（4.03±0.56）%]较LPS组进一步升高（P＜0.01＝.结论 腹腔注射H2S可以改善LPS诱导的离体肺动脉对H2S的低反应性,其机制可能与增强肺动脉HO-1/CO体系有关.

气体信号分子硫化氢对大鼠急性肺损伤的保护作用

目的观察急性肺损伤（acute lung injury，ALI）时，内源性硫化氢（hydrogen sulfide，H2s）生成的变化以及应用外源性H2S后对ALI的影响。方法sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）组、硫氢化钠（ sodium hydrosulfide, NariS）＋LPS组以及NariS＋生理盐水（normal saline，NS）组（n均=12）。LPs组大鼠每只气管内滴注LPS（100μg／200／A），对照组滴注等量NS。NaHs＋LPS组大鼠滴注LPS前10min腹腔注射NaHS（28μmol／kg）。各组均于滴注后4h和8h测定大鼠肺系数变化，光镜下观察肺组织形态学改变，检测肺组织中氧化性损伤产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量以及支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）中蛋白含量及中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophil，PMN）计数的改变，并测定血浆中的H2S含量。结果与对照组相比，LPS滴注4h和8h后，大鼠肺系数、肺组织中MDA含量、BALF中PMN数目及蛋白含量均明显升高（P值均〈0．01）；而血浆中H2S含量则明显降低（P值均〈0．01）；光镜下见肺泡萎陷、甚至结构消失，肺泡腔及间质弥漫性炎细胞浸润，部分肺泡代偿性气肿，且其病理改变随LPS滴注时间的延长而逐渐加重。与相应时间点的LPS组比较，NaHS＋LPS组大鼠肺系数、肺组织中MDA含量、BALF中PMN数目及蛋白含量明显降低，血浆中H2S含量则明显升高（P值均〈0．01）；光镜下肺间质和肺泡中炎细胞浸润程度明显减轻。结论内源性H2S生成不足参与了ALI的形成过程，外源性H2S可以部分拮抗ALI，对肺组织起到细胞保护作用。