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从噬菌体7肽库中筛选的哇巴因结合肽对血管内皮细胞的保护作用 被引量:1
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作者 徐忠伟 徐瑞成 +1 位作者 陈小义 刘英富 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期870-874,共5页
目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和... 目的:寻找与哇巴因高亲和力结合并抑制其生物功能的相关小分子肽,为治疗原发性高血压提供新策略。方法:以哇巴因为筛选分子,应用M13噬菌体呈现随机7肽库进行筛选。经过3轮生物淘筛,并通过ELISA法鉴定,对噬菌体阳性克隆ssDNA电泳鉴定和基因测序分析。委托合成筛选获得哇巴因结合肽,采用放射配基受体结合法检测其结合活性;MTT法检测血管内皮细胞的增殖抑制率,Hoechst33342/PI双荧光染色检测细胞形态学变化;利用RT-PCR和细胞免疫荧光检测钠泵α1、β1的表达水平;荧光探针检测细胞内游离Na+浓度变化。结果:筛选获得14个阳性克隆,基因测序显示:哇巴因结合肽一致率达64.3%(9/14)。委托合成肽(Arg-Cys-Met-Thr-Ser-Arg-Ser)。放射性配基受体结合法检测显示,合成的哇巴因结合肽能够与哇巴因结合。哇巴因结合肽+哇巴因的EAhy926细胞组增殖抑制率小于哇巴因组(P<0.05);Hoechst33342/PI双荧光染色显示细胞死亡数量减少;RT-PCR和免疫细胞化学检测钠泵α1、β1亚单位转录和翻译水平,显示哇巴因结合肽能拮抗哇巴因所引起钠泵α1亚单位表达的上调、β1亚单位的下调作用;荧光探针显示哇巴因结合肽能够拮抗哇巴因对钠泵的抑制作用。结论:哇巴因特异性结合肽能够阻抑哇巴因对血管内皮细胞的抑制增殖和诱导死亡作用,为研究哇巴因与钠泵的相互作用机制及进一步研究抗哇巴因的分子药物奠定基础。 展开更多
关键词 哇巴因 噬菌体展示肽库 结合肽 血管内皮细胞 细胞死亡 钠泵亚单位
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BDNF对大鼠胚胎神经干细胞诱导分化的影响 被引量:1
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作者 扎拉嘎胡 张敏 +2 位作者 陈莉 买霞 徐瑞成 《武警医学院学报》 CAS 2008年第1期1-3,F0003,共4页
【目的】脑源性神经营养因子(BDNF)对体外培养大鼠神经干细胞(NSCs)诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的... 【目的】脑源性神经营养因子(BDNF)对体外培养大鼠神经干细胞(NSCs)诱导分化的影响。【方法】体外克隆化培养获得的NSCs中分别加入不同浓度的BDNF,采用倒置光显微镜观察细胞克隆形成,透射电子显微镜观察细胞超微结构的变化,免疫组化的方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。【结果】在倒置光显微镜下可见细胞接种后5 d形成小细胞球,7 d成为大小不等的细胞克隆。在电镜下可见具有典型的神经干细胞和神经胶质样细胞特征。经BDNF处理7 d后星形胶质样细胞增多,且突起的长度随浓度的增加逐渐延长,尤以40 ng/ml组突起最为显著(P<0.05)。免疫细胞化学检测GFAP的阳性颗粒位于细胞浆中,经40 ng/mlBDNF诱导后阳性率可达86.1%,与对照组(13.1%)比较有显著性差异。【结论】BDNF可诱导神经干细胞分化为星形胶质细胞。 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 神经干细胞 诱导分化 细胞培养
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三羟异黄酮抑制结肠癌LOVO细胞增殖作用的机制研究 被引量:1
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作者 李轩 谢立群 +3 位作者 陈小义 陈莉 海鸥 郑艳敏 《武警医学院学报》 CAS 2009年第5期426-429,433,F0004,共6页
【目的】探讨三羟异黄酮对以雌激素受体β表达为主的结肠癌LOVO细胞的增殖抑制作用及其机制。【方法】以不同浓度三羟异黄酮加入体外培养的LOVO细胞中,用倒置光显微镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;用H... 【目的】探讨三羟异黄酮对以雌激素受体β表达为主的结肠癌LOVO细胞的增殖抑制作用及其机制。【方法】以不同浓度三羟异黄酮加入体外培养的LOVO细胞中,用倒置光显微镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜分析细胞死亡特征;以流式细胞术检测细胞周期变化;应用半定量逆转录PCR检测caspase-3和bcl-2 mRNA的表达。【结果】10、30、60、90、120μmol/L的三羟异黄酮均可不同程度地抑制LOVO细胞生长;荧光显微镜下可见30μmol/L的三羟异黄酮既可诱导LOVO细胞凋亡,而且凋亡比例随药物浓度增高而增加,120μmol/L的三羟异黄酮可引起细胞部分坏死;30μmol/L的三羟异黄酮可明显影响LOVO的细胞周期经三羟异黄酮处理后,其中G0/G1期细胞比例逐渐减少,G2/M期细胞比例明显增高,阻断细胞生长于G2/M期。RT-RCR果结显示caspase-3 mRNA表达较对照组明显增强(P<0.01),bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱(P<0.01)。【结论】三羟异黄酮能够抑制LOVO细胞生长,其机制可能与影响凋亡相关基因表达有关。 展开更多
关键词 三羟异黄酮 结肠癌 LOVO细胞 细胞增殖
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