利用组织芯片观察手掌参醇提物对染矽尘大鼠肺组织TNF-α表达的影响

目的探讨手掌参醇提物(Gymnadenia conopsea Alcohol Extract,GcAE)对染矽尘大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(Tumor Nec-rosis Factor-α,TNF-α)表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为对照组、染矽尘组、GcAE治疗组,每组40只。采用气管暴露法建立大鼠矽肺模型。灌胃给予GcAE(8g.kg-1.d-1)治疗后,在第7、14、21、28和60天时每组分别随机取8只大鼠宰杀,制作大鼠肺组织芯片,用免疫组织化学PV法检测组织芯片TNF-α的表达,用Image-Pro Plus Version 4.5 for windowsTM图像分析系统对TNF-α的表达做定量分析。结果矽尘组TNF-α的积分光密度各时间点均高于对照组,在第7、14、21、28天时有统计学意义(P<0.01)。手掌参组各时间点肺组织TNF-α的积分光密度低于染矽尘组,在第7、14、21、28天时有统计学意义(P<0.01)。结论GcAE能够明显抑制矽尘诱导的大鼠肺组织TNF-α的过度表达。

手掌参醇提物对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的探讨手掌参醇提物(GcEE)对染矽尘大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响,阐明其抗矽肺纤维化的作用。方法32只大鼠随机分成对照组、染矽尘组、GcEE治疗组和汉防己甲素(TT)组。建立矽肺动物模型后第2天起,GcEE治疗组、TT治疗组分别灌胃给予GcEE[8g/(kg.d)]、TT[50mg/(kg.3d)]治疗,对照组和染矽尘组给予等容蒸馏水,给药28d后处死大鼠,观察肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成,并用图像分析系统进行定量分析。结果GcEE可显著降低染矽尘大鼠肺系数,减少肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成。结论GcEE能够明显抑制染矽尘大鼠的肺纤维化。

肿瘤坏死因子-α及核因子-κB在染矽尘大鼠肺组织中的动态表达及其关系

【目的】探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及核因子-κB(NF-κB)在矽肺纤维化过程中的动态表达及关系。【方法】将Wistar大鼠随机分为对照组和染矽尘组。采用暴露式气管内一次注入二氧化硅粉尘悬液建立大鼠矽肺模型。模型建立后,分6个时间点(1、3、7、14、21、28d),每组分别取8只大鼠处死取肺组织,制作组织芯片微阵列,链菌素-过氧化物酶法检测TNF-α及NF-κB在肺组织中的表达,用Image-ProPlus图像分析系统对TNF-α及NF-κB表达作定量分析。用Matlab6.5软件进行曲线拟合和DPS软件进行二次多项式逐步回归方程的求解。【结果】TNF-α和NF-κB在对照组大鼠肺泡巨噬细胞极少量表达,在染矽组大鼠矽尘结节内巨噬细胞和炎症细胞中明显表达;在染矽尘后的3、7、14、21和28d时,染矽尘组大鼠肺组织TNF-α和NF-κB阳性细胞积分光密度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。经5次方拟合曲线,染矽尘大鼠肺组织TNF-α表达随时间变化趋势的方程为:f(x)=-0.00013192x5+0.0066712x4-0.087853x3+0.020645x2+4.6238x+34.738。用秩和检验法检验,P=0.025;染矽尘大鼠肺组织NF-κB随时间变化趋势的方程形式为:f(x)=0.0036852x5-0.22279x4+4.3618x3-31.337x2+85.744x-10.64。P=0.025。【结论】矽尘致肺纤维化过程中,肺组织TNF-α及NF-κB的表达升高,共同参与了二氧化硅粉尘致肺纤维化的病理过程。NF-κB的表达滞后于TNF-α的表达,TNF-α可能是NF-κB活化的始动因素之一。

应用SELDI-TOF-MS筛选矽肺模型大鼠的血清生物标志物及建立血清蛋白指纹分类决策树

【目的】应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术寻找染矽尘大鼠血清潜在生物标志物,探索建立染矽尘大鼠血清蛋白指纹分类决策树。【方法】128只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和染矽尘模型组,以气管暴露法建立矽肺模型,分别在7、14、28和60 d进行腹主动脉采血。采用SELDI-TOF-MS技术以CM10芯片检测大鼠的血清蛋白指纹图谱,用Ciphergen公司专有软件分析数据并建立血清蛋白指纹分类诊断决策树。【结果】与对照组相比,14 d时,m/z 4968.66多肽分子在染矽尘大鼠模型组显著升高(P<0.05);而m/z 9312.29和m/z 9511.19多肽分子分别在28、60 d时显著升高(P<0.05),并均与Ⅰ型胶原增加呈显著正相关(r=0.982,P=0.018;r=0.939,P=0.061);以28、60 d的对照组和染矽尘大鼠组为训练样本,血清蛋白指纹诊断决策树图分类敏感性和特异性分别达100%、83.33%。【结论】m/z 4 968.66多肽分子可作为矽尘所致早期炎症反应的生物标记物,m/z 9312.29、m/z 9511.19多肽分子可能是矽尘所致进行性肺间质纤维化的标志分子。在矽尘暴露28、60d时,血清蛋白指纹分类诊断树的敏感性和特异性分别达100%、83.33%。

TNF-α基因启动子区多态性与SARS发生关系的连锁不平衡研究

目的:研究TNF-α启动子区基因多态性连锁不平衡与严重急性呼吸道综合征(Sever acute respiratory syndrome,SARS)发生关系。方法:采用病例对照研究设计,检测75例SARS康复人员和95例健康人员的TNF-α基因启动子区多态性,分析TNF-α基因启动子区多态性位点的连锁作用与SARS-Cov易感性关系;在SARS康复病人中采用病例-病例对照研究设计,研究TNF-α基因多态性位点的连锁作用与SARS临床症状的关系。采用PCR-SBT(PCR Sequencing Based Typing)方法进行TNF-α启动子区基因多态性检测,运用LDA分析软件完成(Linkage Disequilibrium Analyzer Ver1.0,Chinese national human genome center,Beijing,China)进行多态性位点的连锁作用分析,采用Phase软件(http://www.stat.washington.Edu/stephens,v2.1.1)进行单倍体型分析。结果:PCR-SBT方法可以成功获得TNF-α启动子区基因多态性,检测出的多态性位点有-1031、-863、-857、-572、-308、-238、-204和-163,其中-572(A>C)和-204(T>C)为新发现多态性位点。单倍体型分析结果显示,SARS组和对照组主要以Hap(T;C;C;A;G;G;T;G)、Hap(C;A;C;A;G;G;T;G)、Hap(T;C;T;A;G;G;T;G)和Hap(C;C;C;A;G;A;T;G)为主,但两组人群的单倍体型分布频率无显著差别(P=0.30)。对照人群的连锁模式可能不同于SARS人群,对照组-857(C>T)和-572(A>C)分别与-308(G>A)存在连锁关系,而SARS组不存在该位点的连锁,但存在-238(G>A)与-163(G>A)连锁关系。轻症组和重症组主要以Hap(T;A;C;A;G;G;T;G)、Hap(T;A;T;A;G;G;T;G)、Hap(C;C;C;A;G;G;T;G)和Hap(C;A;C;A;G;A;T;G)为主,两组人群的单倍体型分布频率无显著差别(P=0.39)。重症SARS的-857(C>T)与-308(G>A)也存在连锁关系,而轻症SARS不存在该连锁关系。结论:TNF-α基因启动子区的连锁不平衡可能与SARS的发生及进展相关联。