重组相思子毒素B链蛋白的制备与分析

目的构建、表达和纯化相思子毒素B(ATB)链蛋白并分析其抗原性和毒性。方法运用密码子优化软件优化ATB基因,合成目的基因亚克隆至原核载体p QE-80L构建表达质粒p QE80L-ATB,转化至E.coli M15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western blot检测重组蛋白的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行重组蛋白的细胞毒性实验。结果 ATB开放阅读框架全长804 bp,编码268个氨基酸残基;表达工程菌株在30℃、1 mmol/L IPTG,3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子质量均约为30 000,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后纯度达97%以上,Western blot和MTS实验结果表明,目的蛋白能特异性识别抗相思子毒素多克隆抗体且无毒性。结论重组ATB蛋白实现高表达,具有良好的抗原性,为相关疫苗研究奠定基础。

重组蓖麻毒素与相思子毒素B链嵌合体蛋白的制备与分析

【目的】观察蓖麻毒素(ricin toxin,RT)、相思子毒素(abrin toxin,AT)B链的嵌合体蛋白原核表达并分析其抗原性和毒性。【方法】利用柔性linker-(G4S)3连接两个毒素B链基因(RTB和ATB),优化嵌合体基因RTB-ATB后构建表达质粒p QE80LRTB/ATB,转化至E.coli M15获得表达工程菌株,并对诱导表达条件和纯化条件进行优化;通过Western印迹检测RTB-ATB的抗原性;采用人正常肺上皮细胞Beas-2B和胃黏膜细胞GES-1进行嵌合体蛋白的细胞毒性实验。【结果】RTB-ATB全长1 647bp,编码549个氨基酸残基;E.coli M15在诱导条件为30℃、1 mmol/L IPTG,3 h后获得包涵体形式表达的目的蛋白,相对分子量约为60×103Da,经Ni柱纯化后纯度达98.9%;Western blotting印迹结果表明嵌合体蛋白保持RTB和ATB原有各自的抗原性;MTS实验结果表明目的蛋白无毒性。【结论】嵌合体蛋白RTB-ATB实现高表达,具有良好的抗原性,为研制针对RT和AT的双价疫苗奠定基础。