蟾蜍灵对EAhy926细胞增殖、凋亡及Caspase3,Bcl-2表达的影响

【目的】探讨蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926的增殖抑制作用及其机制。【方法】体外培养血管内皮细胞EAhy926,用不同浓度蟾蜍灵进行干预。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖抑制率;用倒置光显微镜观察细胞形态变化;用Hoechst33342/PI双荧光染色,荧光显微镜观察细胞核形态变化;以流式细胞术检测细胞凋亡的比率;应用半定量逆转录PCR检测EAhy926细胞中Caspase3和Bcl-2的mRNA表达。【结果】蟾蜍灵对EAhy926细胞生长具有抑制作用;且在0.0625~1μmol/L范围内呈时间、剂量依赖性;荧光显微镜下可见0.1μmol/L的蟾蜍灵作用24 h可诱导EAhy926细胞凋亡,作用48 h可引起细胞部分坏死;流式细胞术检测出典型的＂凋亡峰＂,凋亡率8.2%~36.5%,且呈时间依赖性。半定量RT-PCR显示Caspase3 mRNA表达较对照组明显增强,Bcl-2 mRNA表达较对照组明显减弱,且二者均呈剂量依赖性。【结论】蟾蜍灵抑制EAhy926细胞增殖、诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase3和下调Bcl-2基因表达有关。

中性蛋白酶Ⅱ消化法在神经元诱导培养中的应用

【目的】建立中性蛋白酶Ⅱ(DispaseⅡ)对神经球的分散、消化及消化后神经元的诱导培养方法。【方法】取15 d胎鼠的脑组织,经剪碎、研磨、血清培养基培养得到的神经球,培养2 d后观察细胞贴壁情况,并换成诱导剂培养液培养3 d,用DispaseⅡ消化已培养的神经球,后期将经DispaseⅡ消化后的细胞继续进行培养、诱导、鉴定。【结果】用DispaseⅡ消化神经细胞后体外培养并诱导,神经球能够诱导分化成神经元,并能形成典型的神经元细胞网状,经NSE鉴定阳性。【结论】利用DispaseⅡ消化的方法能够将神经球消化成单个细胞,消化后的细胞能够继续培养并向神经元分化。