MYSM1全长及截短质粒构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响

目的构建去泛素化酶Myb样SWIRM和MPN结构域1(MYSM1)全长及各结构域缺失的截短表达质粒并验证其在乳腺癌细胞MCF7中的表达与定位,探讨MYSM1对MCF7细胞增殖能力的影响并初步评估相关机制。方法以人基因组DNA为模板扩增MYSM1基因片段,构建其全长及截短质粒。将测序结果正确的上述MYSM1质粒分别转染于MCF7细胞中,进行免疫荧光共聚焦实验探究外源MYSM1蛋白在乳腺癌细胞中的定位。MTS和平板克隆实验检测对照或MYSM1过表达后,MCF7细胞的增殖能力。STRING数据库预测及免疫共沉淀实验验证MYSM1与E2F1蛋白结合;Western blot检测转染MYSM1后的E2F1蛋白表达及H2A泛素化水平。结果构建出了FLAG-MYSM1全长及截短质粒;MYSM1全长及截短重组质粒均能在乳腺癌细胞中表达并定位于细胞核;过表达MYSM1后,细胞生长加快,且与对照组相比差异有统计学意义(t=6.389,P<0.01);MYSM1能够结合并上调E2F1表达;过表达MYSM1后,H2A泛素化水平显著降低。结论MYSM1蛋白的168-371 aa及471-576 aa在其核定位中发挥重要作用。MYSM1结合并增加E2F1表达,发挥促进MCF7细胞增殖的作用。