基于NF-κB通路探讨阔叶十大功劳对急性溃疡性结肠炎小鼠的作用

目的基于NF-κB信号通路探讨阔叶十大功劳对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠炎症反应的影响。方法小鼠随机分为正常组、模型组、美沙拉嗪组和阔叶十大功劳低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组均自由饮用2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)建立UC小鼠模型,每天记录小鼠体质量变化与DAI评分。给药结束后,记录结肠长度,HE染色观察结肠组织病理形态,ELISA法检测结肠组织TNF-α、IL-10、IL-1β和IL-6水平,Western blot法检测结肠组织ZO-1、Occludin、Claudin-1和NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,阔叶十大功劳组小鼠体质量、结肠长度增加(P<0.05,P<0.01),DAI和结肠组织病理评分降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织IL-1β、IL-6、TNF-α水平和胞核NF-κB蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),IL-10水平和ZO-1、Occludin、Claudin-1、胞浆NF-κB蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论阔叶十大功劳可改善由DSS诱发的UC小鼠结肠组织炎症反应,其机制可能与调控NF-κB信号通路有关。

基于HIF-1α/VEGF通路探讨土家族麝针疗法“活血生新”干预缺血性脑卒中大鼠的作用机制

目的 探讨土家族麝针疗法对缺血性脑卒中大鼠运动功能的康复作用,分析缺氧诱导因子(HIF)-1α/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在缺血性脑卒中发生、发展和转归中的作用机制。方法 采用改良线栓法复制缺血性脑中风大鼠模型。筛选Zea-longa评分为1~3分的大鼠,随机分为模型组、土家族麝针组、针刺组,另设立假手术组,每组15只,土家族麝针组以自制麝针刺激大鼠对侧头皮运动区肌层;针刺组以普通针灸同法治疗,持续治疗3个疗程。假手术组和模型组不做任何处理。在治疗前和每个疗程治疗结束后,每组随机选取6只大鼠进行平衡木实验检测其神经运动功能变化;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆中的VEGF和HIF-1α含量;Western印迹检测海马中VEGF受体(VEGFR)2与酪氨酸蛋白激酶家族成员(Src)蛋白的表达。结果 治疗前,与假手术组相比,模型组、土家族麝针组和针刺组运动功能明显降低,血浆中VEGF和HIF-1α含量明显增高(P<0.05);治疗3个疗程后,与模型组比较,麝针组和针刺组的运动功能明显提高,血浆中HIF-1α和VEGF含量明显升高,大鼠海马中VEGFR2相对表达量明显升高,Src蛋白相对表达量明显降低(P<0.05);与针刺组相比,麝针组神经运动功能恢复明显较好,血浆中VEGF和HIF-1α含量明显高于针刺组(P<0.05)。麝针组海马中VEGFR2相对表达明显升高,Src蛋白相对表达明显降低(P<0.05)。结论 土家族麝针疗法对缺血性脑卒中所致运动功能障碍的康复有明显促进作用,可能是通过调节HIF-1α/VEGF信号通路以“活血化瘀生新”而实现的。

QuEChERS结合GC-MS/MS法测定24批次桔梗中34种农药残留

建立基于QuEChERS法结合气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)对桔梗中34种农药残留量的快速检测方法,并应用于24批桔梗样品筛查。采用QuEChERS法对样品进行前处理,在气相色谱-串联质谱多反应监测(MRM)模式下进行测定,考察其线性关系、定量限、回收率和精密度。以所建立的方法对24批桔梗样品中34种农药残留进行测定分析。34种农药在一定质量浓度范围内线性关系良好,相关系数r均>0.998,其LOQ在0.0003~0.6000 mg/kg之间;回收率均在60%~130%范围内,RSD均<15%。有18批次桔梗样品检出农药残留,检出率为75%;检出农药对硫磷、甲基异柳磷、治螟磷、三氯杀螨醇、氟虫腈,其含量均在0.001~0.015 mg/kg之间,低于药典规定的0.02 mg/kg的限度,所检样品合格率为100%;其余农药未检出。所建立的QuEChERS法结合气相色谱-串联质谱法可用于桔梗中34种农药残留物的定性定量分析,可为桔梗的质量管控提供技术支撑。

IBS-D诊断及治疗的潜在靶点——脂质、类花生酸及胆汁酸类差异代谢物

目的:探讨多因素(母婴分离联合束缚应激与醋酸直肠刺激及番泻叶灌胃)复合诱导腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠模型结肠组织内源性差异代谢物,寻找IBS-D诊断和治疗的潜在作用环节和靶点。方法:将SD大鼠随机分为正常(normal)组与模型(model)组,以母婴分离联合束缚应激与直肠醋酸刺激及番泻叶灌胃诱导IBS-D大鼠模型。对大鼠进行一般行为学观察、粪便Bristol评分、粪便含水量测定及腹部回缩反射(AWR)评分压力阈值并观察肠组织病理变化;采用超高效液相色谱-串联三重四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)技术测定大鼠肠组织内源性代谢物的表达,通过主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选潜在差异代谢物,MetaboAnalyst 5.0进行代谢通路分析。结果:与正常组比较,模型组大鼠一般行为学评分与AWR评分压力阈值显著降低(P<0.05),粪便Bristol评分及粪便含水量显著升高(P<0.05),结肠组织上皮细胞未见脱落,无炎症细胞浸润,无水肿,肌纤维结构紧密,杯状细胞大小整齐,隐窝和绒毛无消融现象。在大鼠结肠组织中鉴定出76个差异代谢物,包括磷脂酰乙醇胺、前列腺素E1、胆酸等,与甘油磷脂代谢和醚脂代谢等代谢通路密切相关。结论:母婴分离联合束缚应激与直肠醋酸刺激及番泻叶灌胃多因素复合诱导的IBS-D大鼠模型具有典型的腹痛、腹泻等症状,且肠组织无病理学改变,高度拟合其临床特征。脂质、类花生酸及胆汁酸类代谢物在IBS-D大鼠中存在着明显的差异性调节,可能是其发病的潜在靶点及临床诊疗可筛选的潜在指标。

基于网络药理学和动物实验探讨黄芪葛根汤治疗糖尿病肾病的作用

目的基于网络药理学和动物实验探讨黄芪葛根汤治疗糖尿病肾病的作用。方法分别采用GEO数据库与TCMSP、TCMID、TCMIP数据库筛选DN差异基因和复方有效成分与靶点,构建调控网络,筛选核心基因,进行KEGG和GO富集分析。将大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸二甲双胍组(0.15 g/kg)和黄芪葛根汤低、中、高剂量组(2.5、5、10 g/kg),采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型,并分别给予相应药物干预。给药8周后测定FBG、BUN、Scr和UA水平,HE染色观察肾组织形态学,ELISA法检测TNF-α、AGEs、VCAM-1、MCP-1水平及肾组织VCAM-1、NF-κB p65水平,免疫组化法检测RAGE蛋白阳性表达率。结果网络药理学获得黄芪葛根汤活性成分23个,靶点191个;DN差异基因638个;复方与疾病交集基因21个;PPI核心基因为CASP3、VEGFA等;涉及AGE-RAGE通路、HIF-1等信号通路。动物实验显示,与模型组比较,黄芪葛根汤高剂量组大鼠FBG,血清BUN、Scr、UA、AGEs、TNF-α、VCAM-1、MCP-1水平,肾组织VCAM-1、NF-κB p65水平及RAGE蛋白阳性表达均降低(P<0.05);透射电镜可见各给药组大鼠肾小球基底增厚和足细胞足突融合情况均有不同程度的减轻,以黄芪葛根汤高剂量组尤为显著。结论黄芪葛根汤可能通过调节AGE-RAGE信号通路减轻DN大鼠肾脏损伤,发挥治疗作用。

阔叶十大功劳对急性溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群及氧化应激的影响

目的:探讨阔叶十大功劳[Mahonia bealei(Fort.)Carr.]对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群及氧化应激的影响。方法:48只SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为:空白组,模型组,阔叶十大功劳低、中、高剂量(2.3、4.6和9.2 g/kg生药)组,美沙拉嗪(0.2 g/kg)组。采用自由饮用2.5%DSS诱导UC小鼠模型,造模当天灌胃给药,连续10 d。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织并进行组织病理学评分;16S rRNA基因测序技术分析肠道菌群的变化;生化法检测小鼠肠黏膜中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;Western blot法检测结肠组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1[NAD(P)H-quinone oxidoreductase 1,NQO1]、胞浆和胞核中核因子E2相关因子(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达。结果:与空白组相比,模型组小鼠结肠黏膜损伤显著(P<0.05),肠道菌群多样性和丰度降低,结肠抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著降低,MDA含量显著增多(P<0.01),Keap1蛋白水平显著升高,NQO1和HO-1蛋白水平显著下降(P<0.01),胞浆Nrf2蛋白水平显著增高,胞核Nrf2蛋白水平也显著增加(P<0.01)。与模型组相比,阔叶十大功劳可修复小鼠结肠黏膜损伤,减少炎症细胞浸润(P<0.05或P<0.01),改善肠道菌群多样性及丰度,在门水平上,Firmicutes(厚壁菌门)显著上升,Bacteroidota(拟杆菌门)显著下降(P<0.05),属水平上4个菌属Muribaculaceae、Odoribacter、Rikenellaceae_RC9_gut_group(理研菌科RC9肠道群)、Lachnospirace⁃ae_UCG-001(毛螺菌科属UCG-001)可能与阔叶十大功劳对UC小鼠肠道黏膜的保护作用相关,抗氧化酶T-SOD、GSH及CAT活性显著提高(P<0.05或P<0.01),MDA含量显著减少(P<0.05或P<0.01),高剂量组胞浆Nrf2蛋白水平显著降低(P<0.01),低高剂量组细胞核Nrf2蛋白水平显著增高(P<0.05或P<0.01),低高剂量组可下调Keap1蛋白水平,上调NQO1和HO-1蛋白水平(P<0.05或P<0.01)。结论:阔叶十大功劳通过改善UC小鼠肠道菌群的多样性和结构,并通过Nrf2信号通路增强抗氧化酶活性,抑制氧化应激反应,从而修复结肠黏膜损伤,为阔叶十大功劳治疗UC提供实验依据。

雷贝拉唑和奥美拉唑联合抗生素治疗Hp相关消化性溃疡的疗效及安全性荟萃分析

目的系统评价雷贝拉唑、奥美拉唑联合抗生素治疗幽门螺杆菌(Hp)相关消化性溃疡的疗效和安全性,为其临床运用提供参考和借鉴。方法系统检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国知网(CNKI)、中文科技期刊数据库(VIP)、万方数字化期刊库。检索时限为建库至2022年01月23日。试验组采用雷贝拉唑联合抗生素进行治疗,对照组采用奥美拉唑联合抗生素治疗。按Cochrane系统评价的相关要求,对纳入的研究进行资料提取和质量评价,采用RevMan 5.3软件进行数据处理与分析,对数据不能合并者,进行描述性的定性分析。结果本研究共纳入11篇RCT研究文献,共包含1603例患者,其中试验组800例,对照组803例。Meta分析结果显示,试验组Hp相关消化性溃疡愈合率[OR=3.23,95%CI(2.30~4.52),P<0.05]高于对照组;试验组Hp根除率[OR=3.30,95%CI(2.43~4.49),P<0.05]高于对照组,治疗后复发率[OR=0.26,95%CI(0.12~0.58),P<0.05]低于对照组;在腹痛改善[OR=3.54,95%CI(2.30~5.43),P<0.05]、腹胀改善[OR=2.64,95%CI(1.46~4.76),P<0.05]方面试验组优于对照组;两组在消化系统[RR=0.93,95%CI(0.63~1.38),P=0.72]、神经系统[RR=1.81,95%CI(0.89~3.67),P=0.10]及免疫系统[RR=0.48,95%CI(0.15~1.48),P=0.20]、不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);试验组IL-2[MD=2.82,95%CI(2.50~3.15),P<0.05],IL-6[MD=-26.59,95%CI(-28.39~-24.79),P<0.05],CRP[MD=-26.59,95%CI(-28.39~-24.79),P<0.05]水平高于对照组。结论雷贝拉唑联合抗生素治疗Hp相关消化性溃疡具有较好的疗效和安全性。

文王一支笔的抗炎作用机制:基于网络药理学、分子对接及实验验证

目的基于网络药理学、分子对接技术及体外实验探讨文王一支笔抗炎作用的主要化学成分及潜在靶点的作用机制。方法通过文献报道,本草组鉴、GeneCards等数据库获得化合物与抗炎的靶点;利用String数据库、Cytoscape 3.7.2软件得到PPI网络、“药物-活性成分-作用靶点”网络以及GO、KEGG富集分析。利用Auto Dock Tools1.5.6等软件进行分子对接。体外实验采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7炎症细胞模型,分为对照组、模型组(LPS,5μg/mL),不同浓度文王一支笔干预组(LPS 5μg/mL+文王一支笔提取液25、50、100、200μg/mL),ELISA法和Western blot法检测文王一支笔提取液对相关细胞因子含量和蛋白表达的影响。结果药物与疾病的共有靶点318个,核心靶点为Src、HSP90AA1和PIK3CA。KEGG分析显示有癌症、PI3K/Akt、MAPK等信号通路。分子对接显示主要活性成分与核心靶点均能自发的结合。体外实验结果显示,文王一支笔提取液在100、200μg/mL浓度下明显抑制IL-1β(P<0.05),在50、100、200μg/mL浓度下明显抑制IL-6和TNF-α,在25、50、100、200μg/mL浓度下降低PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平(P<0.05)。结论文王一支笔可以作用于多个靶点、多条通路发挥抗炎作用,其作用机制可能与降低IL-1β、IL-6和TNF-α含量,下调p-PI3K、p-Akt蛋白的表达,进而影响PI3K/Akt信号通路减轻炎症反应有关。

土家族麝针疗法改善缺血性脑卒中模型大鼠认知能力缺陷的作用及机制

目的研究土家族麝针疗法对缺血性脑卒中模型大鼠认知能力缺陷的改善作用及机制。方法将44只大鼠随机分成假手术组、模型组、麝针治疗组、普通针刺组,每组11只。除假手术组外,其余各组大鼠采用改良线栓法构建缺血性脑卒中大鼠模型。造模成功后,麝针治疗组和普通针刺组大鼠分别利用土家族麝针(含人工麝香3 mg)和传统毫针干预缺血区对侧头皮运动区肌层,干预时长为3个疗程;假手术组和模型组大鼠不进行任何干预。记录大鼠神经功能缺损评分并进行Morris水迷宫行为学测试,观察大鼠脑皮质区神经元形态及缺血侧室管膜下区DCX/BrdU和NeuN/BrdU联合标记细胞的表达情况,检测大鼠血浆中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分显著升高,逃避潜伏期显著延长,通过平台次数显著减少(P<0.05);神经元结构明显破坏,周围尼氏小体数量减少;缺血侧室管膜下区DCX/BrdU和NeuN/BrdU联合标记的细胞数量显著增加,血浆中HIF-1α、VEGF水平显著升高(P<0.05)。与模型组比较,麝针治疗组和普通针刺组大鼠神经功能缺损评分、逃避潜伏期、通过平台次数均显著逆转(P<0.05);神经元结构明显改善,尼氏小体数量增多;缺血侧室管膜下区DCX/BrdU和NeuN/BrdU联合标记的细胞数量显著增加(P<0.05);血浆中HIF-1α、VEGF水平显著升高(P<0.05)。与普通针刺组比较,麝针治疗组大鼠血浆中HIF-1α水平降低(但差异无统计学意义),VEGF水平显著升高(P<0.05)。结论土家族麝针疗法可改善缺血性脑卒中模型大鼠的认知能力缺陷;其作用机制可能与促进缺血侧室管膜下区神经干细胞的迁移和分化,抑制HIF-1α过度释放,增加VEGF表达有关。

竹节参总皂苷中10种活性成分在正常、肥胖大鼠体内药动学比较

目的比较竹节参总皂苷中人参皂苷Re、Rg1、Rf、Rb1、Rg2、Rd,竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa,拟人参皂苷RT1在正常、肥胖大鼠体内药动学。方法大鼠随机分为正常组和肥胖组,灌胃给予总皂苷0.4%CMC-Na混悬液(0.8 g/kg),于0、0.08、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、24、48 h采血,UPLC-MS法测定各活性成分血药浓度,计算主要药动学参数。结果各活性成分C_(max)、AUC_(0~t)与其在总皂苷中的含量呈正相关。竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa为体内主要暴露成分,t_(1/2)、MRT_(0~t)更长。与正常组比较,肥胖组各活性成分C_(max)(除人参皂苷Rg1)、AUC_(0~t)(除人参皂苷Re、Rg1和拟人参皂苷RT1)降低,t_(1/2)、MRT_(0~t)、T_(max)无明显变化。结论肥胖可影响竹节参总皂苷中部分活性成分的体内药动学,竹节参皂苷Ⅴ、Ⅳ、Ⅳa可能是竹节参总皂苷改善肥胖的关键组分。

基于UPLC-Q/TOF MS技术探讨竹节参总皂苷对HepG2细胞脂质代谢的改善作用

基于细胞代谢组学技术研究竹节参总皂苷改善HepG2细胞脂质代谢的机制。应用棕榈酸和油酸诱导HepG2细胞脂质沉积模型,竹节参总皂苷干预24 h后进行油红O染色和甘油三酯分析。采用改良的Bligh-Dy⁃er法将细胞内源性代谢物分为极性和非极性部位,运用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q/TOF MS)技术检测代谢物,结合多元统计分析和火山图筛选差异代谢物,并富集代谢通路。结果显示,竹节参总皂苷可显著改善HepG2细胞脂质沉积模型的脂质代谢。从极性部位鉴定了34个差异代谢物,主要为脂肪酸和氨基酸类成分;从非极性部位鉴定了28个差异代谢物,主要为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、神经酰胺类成分。差异代谢物在竹节参总皂苷干预后均有恢复至正常水平的趋势。该研究提示竹节参总皂苷改善HepG2细胞脂质沉积模型的脂质代谢与调控鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、脂肪酸代谢、炎症反应密切相关。

基于UPLC-Q/TOF MS技术的痛风患者血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q/TOF MS)对恩施土家族苗族自治州60例健康志愿者(对照组)和65例痛风患者(痛风组)的血清样本建立代谢图谱,基于主成分分析及正交偏最小二乘判别分析对所得数据进行模式识别,并结合变量权重投影分析及火山图筛选出痛风患者的血清代谢标志物。通过数据分析和数据库检索,共筛选出63种差异代谢物,其中27种代谢物显著上调(P<0.05),36种代谢物显著下调(P<0.05),主要包括甘油磷脂类、氨基酸类及胆碱等成分。首先,对以上差异代谢物进行受试者工作特征曲线(ROC)分析,其中曲线下面积(AUC)大于0.8的14种代谢物是诊断效能较好的代谢物;然后对筛选的63种差异代谢物进行代谢通路富集分析,以Impact>0.1且P <0.05为标准,得到影响最大的代谢通路主要有甘油磷脂代谢、醚性脂质代谢、亚油酸代谢、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、花生四烯酸代谢及戊糖和葡萄醛酸的互相转化等。综上,痛风患者和健康对照人群的血清代谢水平有明显差异,差异代谢物的鉴定为痛风的发病机制和早期筛查提供了实验依据。

基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱的结直肠腺瘤患者血清代谢组学研究

采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱结合主成分分析、正交偏最小二乘判别分析对46例结直肠腺瘤患者(年龄57.8±10.7岁)和45例健康人(年龄54.4±8.2岁)的血清样本进行分析,通过变量权重投影分析和火山图筛选结直肠腺瘤患者血清中的代谢标志物,利用受试者工作特征曲线(ROC)验证代谢标志物的诊断能力。结果表明,两组血清的代谢轮廓有显著差异,筛选并鉴定了20个生物标志物,涉及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸合成,花生四烯酸代谢、α-亚麻酸代谢、亚油酸代谢、氨酰-tRNA合成、鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、色氨酸代谢,其生物标志物16-羟基棕榈酸、花生四烯酸、肌酸、缬氨酸、亮氨酸、色氨酸、α-亚麻酸、牛磺鹅脱氧胆酸、LysoPC(20∶3)的ROC曲线面积(AUC)均大于0.90,特异性与灵敏度较高,对于结直肠腺瘤筛查具有较高的诊断价值和临床应用潜力。研究结果可为基于代谢组学的结直肠腺瘤筛查提供参考资料。

土家药三颗针对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响

本研究旨在探讨土家药三颗针对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠道菌群的影响,为其开发利用提供科学依据。60只c57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪组以及三颗针低、中、高剂量组,自由饮用7 d 2.5%的葡聚糖硫酸钠溶液构建小鼠UC模型,同时给予药物干预,连续10 d,记录小鼠体重变化、疾病活动指数(disease activity index,DAI)。采用苏木精-伊红染色观察小鼠结肠病理变化,基于16S rRNA基因测序技术分析三颗针对UC小鼠肠道菌群的组成和多样性的影响。结果显示,与模型组相比,三颗针组DAI评分显著降低(P<0.05),结肠病理损伤减轻,肠黏膜结构较完整,炎性细胞浸润减少。三颗针改善了溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群结构和多样性,且趋近于正常组。本实验揭示了调节肠道菌群多样性及菌群结构可能是三颗针干预UC的重要途径之一,通过肠道菌群的角度为三颗针的临床用药提供理论依据。

UPLC-ESI-MS法分析盆炎清栓主要成分

目的建立UPLC-ESI-MS法分析盆炎清栓(吲哚美辛、毛冬青提取物)主要成分。方法该药物甲醇提取液的分析采用Waters Acauity UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min;柱温40℃;电喷雾电离源;负离子模式。测定指标成分(芦丁、冬青苷O、毛冬青皂苷B 3、毛冬青皂苷B 2、毛冬青皂苷A 1、毛冬青皂苷B 1、吲哚美辛、冬青素A)的含量。结果共鉴定出91个化合物,包括54个三萜、22个苯丙素、9个黄酮、6个其他化合物,并验证37个化合物的结构。8种指标成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9990),平均加样回收率97.84%~103.04%,RSD 1.22%~3.39%。结论该方法稳定可靠,可用于盆炎清栓的质量控制。

三种子宫内膜增生大鼠模型的建立和评价

目的探讨子宫内膜增生大鼠模型的建立方法和评价体系。方法SD雌性大鼠60只,随机平均分为假手术组(A组)、去势组(B组)、雌激素负荷组(C组)、去势联合雌激素负荷组(D组)。B组和D组大鼠摘除双侧卵巢后第3天起分别以0.15 mL/100 g肌内注射高压灭菌麻油和1 mg/mL以高压灭菌麻油稀释的苯甲酸雌二醇注射液;C组仅以同剂量肌肉注射1 mg/mL以高压灭菌麻油稀释的苯甲酸雌二醇注射液;A组仅行开关大鼠腹部手术,同法同剂量注射高压灭菌麻油;均隔1天1次,共14次。采用吉姆萨阴道涂片染色法剔除B、D组有角化现象的大鼠。在末次注射24 h后,处死各组大鼠采集血清、子宫,采用ELISA检测血清中雌激素(E2)、泌乳素(prol)、孕激素(P)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平,HE染色法观察子宫形态、内膜厚度和面积。结果与A组比较:B组大鼠prol、LH和FSH明显升高,而E2、P明显降低;C组大鼠E2、LH和FSH明显升高(P<0.05),而P明显降低(P<0.05);D组大鼠prol、LH和FSH明显升高(P<0.05),而E2、P明显降低(P<0.05)。B、C、D 3组大鼠均出现了明显的子宫内膜萎缩,腺体增多,肌层变薄,肌纤维排列紊乱的现象,C组和D组子宫内膜可见嗜酸性粒细胞浸润。结论采用去势法、雌激素负荷法及两者联合的方法均可较好地诱导子宫内膜腺体增生大鼠模型;采用雌激素负荷法和去势联合雌激素负荷所建立的模型具有子宫内膜炎性增厚的特征。

湖北恩施土家族药物豆板还阳中3种成分含量测定研究

目的建立同时测定豆板还阳药材中3种成分含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为岛津InertSustain C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,检测波长为332 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。采用SPSS 21.0统计学软件对8批不同产地豆板还阳药材进行聚类分析。结果阿魏酸、槲皮素、石吊兰素在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.9997);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2.30%;平均加样回收率在101.37%~102.54%范围内,RSD为2.94%~3.27%(n=6);8批药材中阿魏酸、槲皮素、石吊兰素总含量介于0.147%~0.553%。经聚类分析,8批药材可分为三类。结论该方法操作简便,结果准确,重复性和稳定性均好,可用豆板还阳药材中3种成分的含量测定,且3种成分在不同产地的药材中含量差异较大。

基于指纹图谱-网络药理学-分子对接技术的知母质量标志物预测分析

目的:预测知母的质量标志物(Q-Marker)。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法建立不同产地知母指纹图谱特征,色谱柱:InertSustain C18(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱;流速:1.0 ml·min^(-1);柱温:30℃;进样量:10μl;N2流速:3 L·min^(-1);漂移管温度:100℃。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》,设定时间为平均值±0.5 min,采用Mark峰匹配,建立其HPLC指纹图谱,并进行相似度评价筛选出Q-Marker候选成分;然后对筛选出的Q-Marker候选成分进行网络药理学分析,构建“知母Q-Marker候选成分-靶点-通路”网络,预测知母的皂苷类Q-marker,再采用分子对接方法验证其Q-Marker生物活性。结果:10批不同产地的知母饮片中共筛选出6个Q-Marker活性成分,分别为芒果苷、知母皂苷E、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷A2、知母皂苷A3,进一步网络药理学分析显示知母皂苷B-Ⅲ、知母皂苷B-Ⅱ、知母皂苷A2为知母皂苷类成分的Q-Marker,“活性成分-作用靶点-通路”网络构建结果表明关键作用靶点为丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)10、MAPK1、MAPK8,分子对接结果表明核心化学成分知母皂苷A2与MAPK10以及知母皂苷A2与MAPK1有较高的结合活性。结论:建立的知母指纹图谱分析方法简便可行,结合网络药理学-分子对接技术发现知母3个活性成分与其功效属性密切相关,为知母饮片的质量控制提供参考,同时也为知母抗炎作用机制的探索奠定了基础。

中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病的meta分析、序贯分析及潜方分析

目的 评价中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病的临床疗效及安全性,为合理用药提供循证依据。方法 计算机检索中国知网(CNKI)、万方、维普、PubMed数据库,检索时间为建库起至2021年7月20日,检索关于中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病的相关研究。由3名研究者共同完成文献筛选、质量评价和资料提取,采用RevMan5.4软件对纳入的文献进行meta分析。对有效率的结果进行序贯分析,对纳入研究的中药组方采用中医传承辅助平台(V2.5)软件进行潜方分析。结果 共纳入17篇文献,患者1 889例。meta分析结果显示,中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病的有效率优于单用二甲双胍[RR=1.25,95%置信区间(95%CI=1.19~1.32),P<0.05]。与对照组比较,试验组在空腹血糖(MD=-1.43,95%CI=-2.16~-0.70,P<0.05)、餐后2 h血糖(MD=-1.35,95%CI=-1.71~-1.00,P<0.05)、空腹胰岛素指数(MD=-2.60,95%CI=-3.73~-1.48,P<0.05)、糖化血红蛋白(MD=-0.76,95%CI=-1.00~-0.51,P<0.05)、胰岛素抵抗指数(MD=-0.57,95%CI=-0.62~-0.52,P<0.05)、甘油三酯(MD=-0.57,95%CI=-1.09~-0.04,P<0.05)、低密度脂蛋白(MD=-0.68,95%CI=-1.07~-0.30,P<0.05)、总胆固醇(MD=-0.67,95%CI=-1.04~-0.31,P<0.05)等方面的降低效果及对高密度脂蛋白(MD=0.37,95%CI=0.15~0.58,P<0.05)的升高效果更优,且中药复方联合二甲双胍不会提高不良反应发生率(RR=0.64,95%CI=0.40~1.04,P>0.05)。序贯分析显示,中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病疗效优于单用二甲双胍。通过复杂系统熵聚类分析提取出2种核心组合,其潜在新方为牡丹皮、葛根、山萸肉、茯苓。结论 中药复方联合二甲双胍治疗2型糖尿病疗效显著,不会增加不良反应,优于单用二甲双胍。

UPLC-Q/TOF-MS法同时测定竹节参及其总皂苷中13个指标成分

目的 建立测定竹节参及其总皂苷中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rb1、竹节参皂苷V、人参皂苷Rb2、拟人参皂苷RT1、人参皂苷Rb3、竹节参皂苷IV、竹节参皂苷IVa、人参皂苷Rd含量的超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q/TOF-MS),用以控制药材的质量。方法采用Waters UPLC HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速0.4 mL/min, Waters Xevo G2 Q-Tof质谱仪,ESI负离子模式采集数据,采用一级质谱定量。结果 13个成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数均大于0.999 0,精密度、重复性、稳定性良好,平均加样回收率97.27%~100.86%,RSD<2.99%。13种成分在9批次竹节参药材中的含量依次为0.70~7.71、0.77~10.77、0.07~1.23、0.06~1.08、0.01~2.97、0.75~5.04、43.99~95.06、0.02~0.08、0.49~27.86、0.05~0.22、18.74~61.40、2.40~30.83、0.03~1.74 mg/g,在竹节参总皂苷中的含量依次为37.93、28.63、5.87、2.43、0.83、26.27、363.14、0.39、5.91、1.50、238.25、51.56、11.24 mg/g。结论 所建立的UPLC-Q/TOF-MS法可用于竹节参药材及总皂苷的指标成分的快速测定与质量评价。