不同保存方法对羊膜生物学性能影响的比较研究

目的观察不同保存方法对羊膜生物学性能的影响。方法取10例健康剖宫产产妇胎盘,剥离羊膜,将羊膜平铺于无菌滤纸片上,上皮面朝上,剪成20 mm×20 mm小块,随机分为3组,分别采用Hank’s平衡盐/甘油溶液深低温(-80℃)保存、纯甘油4℃保存、冷冻干燥常温保存。分别于保存3、6、12个月取羊膜进行HE染色光镜观察、胶原蛋白酶Ⅳ降解速度测定和细胞因子含量放射免疫测定,并与新鲜羊膜进行对照。结果①新鲜羊膜及3种方法保存的羊膜均可见到羊膜的5层组织结构,自内向外依次为上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维母细胞层、海绵层。新鲜羊膜的上皮细胞形态完好、排列较整齐紧密,其下可见厚而连续的基底膜,致密层、纤维母细胞层、海绵层结构紧密。冷冻干燥常温保存3个月,羊膜组织形态特征与新鲜羊膜基本相似,上皮细胞结构完整、排列紧密,连续的基底膜、致密层、纤维母细胞层、海绵层清晰可见;保存6个月,上皮细胞形态基本完好、排列整齐,但基底膜略显模糊,纤维母细胞层、海绵层相对疏松;保存12个月,上皮细胞形态基本完好但核上移,基底膜模糊,纤维母细胞层、海绵层疏松变薄,其内出现空泡。Hank’s平衡盐/甘油溶液深低温保存3个月,羊膜上皮细胞形态基本完好,基底膜略显模糊,致密层、纤维母细胞层、海绵层相对疏松;保存6个月,上皮细胞结构基本完整,连续排列但细胞间隙较为模糊,基底膜更显模糊,致密层、纤维母细胞层、海绵层进一步疏松;保存12个月,上皮细胞皱缩,上皮层连续性中断,基底膜及致密层基本完整,但各层结构模糊不清。纯甘油4℃保存3个月,羊膜上皮细胞皱缩,细胞间隙加大,基底膜及致密层基本完整,各层结构依稀可见;保存6个月,部分上皮细胞破裂,基底膜完整,致密层、纤维母细胞层、海绵层疏松;保存12个月,羊膜上皮细胞部分脱落,基质层厚度变薄,基底膜、致密层模糊不清,部分纤维母细胞层和海绵层缺失。②与新鲜羊膜相比,保存羊膜在胶原酶Ⅳ溶液中降解速度均有所加快。其中纯甘油4℃保存羊膜降解速度最快,冷冻干燥保存羊膜降解速度最慢。③冷冻干燥保存羊膜中被检测的8种细胞因子残存量均超过40%;Hank’s平衡盐/甘油溶液深低温保存和纯甘油4℃保存羊膜中8种细胞因子残存量均低于20%,明显低于冷冻干燥保存之羊膜细胞因子存留量(P<0.05)。结论 3种方法中以冷冻干燥常温法保存羊膜效果最好,纯甘油4℃保存方法效果最差。冷冻干燥常温羊膜保存时限以不超过1年、Hank’s平衡盐/甘油溶液深低温保存不超过6个月、纯甘油4℃保存不超过3个月为宜。