以需要为基础的生化实验教学在医学教育中的应用

生物化学与分子生物学是医学教育中的重要专业基础课。以需要为基础的生化实验课程改革,突出学生的主体地位,在教学中培养出创造性的医学人才,以适应社会发展的需要。

人脐带间充质干细胞分化为胰岛β细胞的实验研究

目的探讨人脐带华尔通胶质来源的间充质干细胞(MSCs)分化为胰岛素分泌细胞的可能性。方法从足月剖宫产的新生儿脐带华尔通胶质中分离培养出MSCs,传至第5代用含尼克酰胺和β巯基乙醇的低糖达尔伯克必需基本培养基预诱导,以含尼克酰胺和β巯基乙醇的高糖达尔伯克必需培养基诱导其向胰岛素分泌细胞分化,应用免疫细胞化学法检测其胰岛素的表达,以双硫腙染色鉴定胰岛β细胞,并用放射免疫法检测诱导后细胞培养液中胰岛素水平,检测均以未诱导细胞作为实验对照。结果免疫细胞化学法检测结果显示,经尼克酰胺和β巯基乙醇联合诱导后的人脐带MSCs表达胰岛β细胞的标记胰岛素。双硫腙染色发现脐带华尔通胶质来源的MSCs经尼克酰胺和β巯基乙醇诱导后细胞内锌离子增加。通过胰岛素放射免疫法检测诱导前后细胞培养液中胰岛素水平,实验组和对照组分别为(6.63±1.80)U/L和(3.39±0.21)U/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论人脐带MSCs经尼克酰胺和β巯基乙醇联合诱导后可表达胰岛素β细胞的表面标记,增加细胞内锌离子水平,使之具备胰岛β细胞的特点,诱导后的细胞也可分泌胰岛素。用尼克酰胺和β巯基乙醇可诱导人脐带MSCs分化成为胰岛素分泌细胞,从而为1型糖尿病的细胞移植治疗提供新的细胞来源。

实时精子分离技术(王氏管法)的实验和临床应用研究

目的 :为临床不育症和优生优育提供一种安全、高效的精子分离技术。方法 :采用实时精子分离技术 (王氏管法 )对 2 0份正常精液和 40份感染精液标本进行了优质精子分离纯化和去除精浆的杂质和微生物 (如细菌、病毒、沙眼衣原体、解脲支原体等 )的效果 ;80例少、弱、畸形精子患者使用王氏管法筛选获得优质精子后对其配偶施行宫内人工授精 (IUI)获孕效果进行了观察 ;与上游法和 Percoll梯度法的分离效果和授精成功率进行了比较。结果 :王氏管法在筛选优质精子、去除精浆杂质和微生物以及使用筛选后的精子作配偶 IUI成功率均明显优于上游法和 Percoll密度梯度离心法。结论 :实时精子分离技术值得临床进一步研究和推广应用。

羟基磷灰石明胶修复骨缺损的实验研究

羟基磷灰石明胶修复骨缺损的实验研究汕大医学院附一院骨科（５１５０３１）郑承泽，苏国礼，林楚平，郭燕堂，黄忠录汕大医学院附一院病理科林莹汕大医学院电镜室张大鹏汕大医学院中心实验室陈耀文羟基磷灰石（Ｈｙｄｒｉｘｙａｐａｔｉｔｅ，简称ＨＡ。）是新近发展的较...

连接蛋白43在急性心肌缺血时不均一降解的实验研究

目的 :探讨急性心肌缺血时心肌细胞连接蛋白 4 3(Cx4 3)含量和分布模式的改变。方法 :2 0只犬随机分为 4组 ,通过结扎冠状动脉造成分别为 0、 1、 3、 6h的急性心肌缺血 ,应用激光共聚焦显微镜技术和双重标记的荧光免疫组织化学方法对缺血心肌Cx4 3含量和分布的改变进行定量研究。结果 :①对照组Cx4 3象素密度 2 2 5± 0 12 ;1h缺血组Cx4 3象素密度1 75± 0 15 ,较对照组减少了 2 2 2 % ;3h缺血组 1 35± 0 2 1,减少了 4 0 0 % ;6h缺血组 1 0 4± 0 14 ,减少了 5 3 8% ,各组间差异有统计学意义 ;②对照组心肌细胞端对端连接处Cx4 3含量约为侧对侧连接处的 1 36倍 ,缺血 6h后 ,侧对侧连接处Cx4 3含量反而为端对端连接处的 1 6倍 ;③对照组各层心肌细胞Cx4 3含量差异无统计学意义 ,缺血后中间层心肌Cx4 3含量较其他层心肌Cx4 3含量下降更明显 ,差异有统计学意义。结论 :急性短时间心肌缺血时Cx4 3已开始大量降解 ,分布也发生明显的改变 ,各层心肌Cx4

汕头市495名高中学生全血中叶酸浓度测定

目的 :测定高中学生全血叶酸浓度 ,为建立全血叶酸水平营养状况指标积累基础数据。方法 :用高效液相色谱———荧光检测法对汕头市区 4 95名高中生 (17～2 1岁 )进行全血叶酸浓度测定。结果 :男生 (2 4 9名 )全血中叶酸平均值 2 2 2nmol L ,女生 (2 4 9名 ) 2 18nmol L ;男、女生全血中叶酸水平无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论 :男。

慢性应激对大鼠海马锥体细胞形态结构的效应

为研究慢性应激相关精神障碍的发病机制 ,采用尼氏 (Nissl)染色法、高尔基 (Golgi)镀染法和透射电镜技术 ,探讨慢性应激对大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞形态结构的效应 .结果显示应激组大鼠海马CA1区锥体细胞形态结构较对照组无明显变化 .应激组海马CA3区锥体细胞数 (35 14± 3 85 )较对照组 (38 74± 3 5 4 )显著减少 (P <0 0 5 ) ;顶树突的总长度 (15 5 6 7μm± 33 32 μm)较对照组 (195 6 3μm± 34 6 1μm)显著缩短(P <0 0 5 ) ;应激组大鼠海马CA3区锥体细胞出现超微结构的改变 ,包括细胞固缩、体积缩小、核膜皱缩、线粒体变性和粗面内质网模糊不清 .这提示海马CA3区锥体细胞形态结构的改变 。

光敏化姜黄素诱导胃癌细胞凋亡

目的 :研究在光照下姜黄素诱导胃癌细胞凋亡的效应 ,探讨其作为光动力学治疗肿瘤新型光敏剂的可能性。方法 :体外培养的胃癌MGC80 3细胞加入姜黄素后光照处理 ;以台盼蓝拒染法计数细胞存活率 ,Giem sa染色观察形态变化并计数及统计凋亡指数 ,DNA琼脂糖电泳观察DNA片段化 ,流式细胞术检测细胞周期变化。结果 :光敏化姜黄素处理后 ,细胞存活率随药物浓度及处理时间依赖性下降 ,并呈现典型的凋亡细胞形态 ;5 μmol/L姜黄素光照处理细胞 2 4小时 ,即呈现典型凋亡梯形条带 ;经 2 5 μmol/L及 5 μmol/L光敏化姜黄素处理 ,细胞周期主要阻滞于G2 /M期 ,提示细胞的G2 /M期阻滞与光敏化姜黄素诱导MGC 80 3细胞凋亡有关。结论 :光敏化姜黄素具有显著诱导MGC 80 3细胞凋亡的作用 ,可望进一步开发成光动力学治疗肿瘤的新型光敏剂。

浊点萃取-石墨炉原子吸收法测定水样中痕量钴的研究

在pH 5～7 5的柠檬酸磷酸氢二钠缓冲体系中,水样中的痕量钴与加入的络合剂1 (2 吡啶偶氮)2 荼酚形成稳定的配合物。通过水浴6 6℃加热2h ,钴配合物被萃取到TritonX -10 0表面活性剂相并与水相分开。分离后的表面活性剂相用0 .5 %硝酸和0 .1%硝酸钯作基体改进剂,提高灰化温度,消除有机物的干扰,用氘(D)灯校正就可用石墨炉原子吸收法测定痕量钴。该方法萃取富集倍数可达10 0。样品检测下限(10σ)为0. 0 0 3μg·L-1。回收率为90 .5 %～10 6 %。用于矿泉水、河水、海水、饮用水中ng·L-1级的测定,结果令人满意。

微酸量消化-石墨炉原子吸收光谱法测定大鼠组织中的钴

建立了微酸量消化 测定少量生物组织样品中钴含量的石墨炉原子吸收法 ,并测定了饮用水中不同浓度钴对大鼠各组织器官中钴含量的分布影响。组织样品于 110℃烘干 1h ,全血样品 6 0℃烘箱过夜干燥 ,在80℃水浴下HNO3 H2 O2 顺序消解 1h。消化后的组织样液 ,与加入 10 0 μL 1%Pd(NO3 ) 2 溶液的全血消化液 ,均用超纯水稀释到 10 0 0 μL。D2 灯校正背景 ,样品基体匹配标准曲线法测定。本法相对标准偏差 <5 % ;回收率为 88.6 %～ 98.1% ;方法检出限 (3σ) :全血 0 .0 3μg/L ,组织 0 .0 3ng/ g。测定结果表明 :各器官对低浓度范围的无机钴吸收缓慢 ,有一定的缓冲作用。但饮用水钴浓度达到mg/L级时 ,各器官钴含量会急剧升高。影响最小的是脑组织 ,最大的是肝组织。

电子废弃物回收拆解业工人健康调查

目的了解从事电子废弃物回收拆解业人群的健康状况,探讨电子废弃物对人体可能的危害。方法选择汕头市贵屿镇5个从事电子废弃物回收拆解业的自然村作为调查点,对226名电子废弃物回收拆解业工人(拆解业组)及172名非电子废弃物回收拆解人员(对照组)进行健康调查。结果拆解业组人员头痛头晕(47.7%)、皮疹瘙痒(15.0%)、恶心(11.1%)、失眠(9.7%)、记忆力下降(5.3%)、鼻塞(5.3%)、结膜充血(4.8%)等症状与体征的发生率高于对照组,且有工种差异。电路板回收处理组中,失眠发生率随工作年限的增长有上升的趋势(r=0.998)。结论不科学的电子废弃物回收拆解方式对从业人员健康有一定影响。

电子废弃物拆解地区儿童血铅水平

目的了解电子废弃物简易拆解地区——贵屿镇儿童血铅水平,探讨电子废物简易拆解业造成的环境污染对儿童健康的影响。方法于2004年9—11月在广东省贵屿镇选择当地出生并长期居住的165名1～6岁健康儿童(暴露组)以及毗邻贵屿镇的陈店镇61名儿童(对照组)测定血铅和血红蛋白水平,并对4个拆解工艺集中地区(元件拆解密集区、初级废塑回收区、元件拆解零散区、成品废塑加工区)分别进行了比较。结果暴露组儿童血铅水平的x±s为(153.0±57.9)μg/L,范围为44.0～302.5μg/L;血铅值≥100μg/L的有135人,占81.8%,其中轻度铅中毒占61.8%,中度铅中毒占20.0%,未发现重度以上铅中毒者。暴露组儿童血铅及铅中毒率均高于对照组,差别均有统计学意义(P<0.01)。暴露组儿童血铅水平随年龄增长呈现升高趋势,经方差分析,3个年龄组的儿童血铅水平差异有统计学意义(F=3.951,P<0.05),且元件拆解密集区>初级废塑回收区>元件拆解零散区>成品废塑加工区。暴露组男童血铅水平的x±s为(151.4±59.1)μg/L,铅中毒率为81.6%;女童血铅水平的x±s为(154.8±56.8)μg/L,铅中毒率为82.1%。男女儿童血铅均数和铅中毒率差别均无统计学意义(P>0.05)。暴露组铅中毒儿童血红蛋白含量的x±s为(127±17)g/L,低铅儿童血红蛋白含量的x±s为(129±20)g/L,二者差别无统计学意义(t=0.461,P>0.05)。结论简易、落后的电子废物回收拆解工艺造成的环境污染已影响当地儿童的血铅水平。

番茄红素体外对人食管癌细胞SHEEC36的初探

目的 探讨番茄红素对体外培养的人食管癌细胞的影响。方法 应用MTT法和流式细胞术手段 ,观察不同剂量的番茄红素对体外培养的人胚食管上皮癌细胞汕头株36代 (SHEEC36 )的增殖抑制及诱导凋亡作用。结果 MTT实验显示 ,番茄红素体外对SHEEC36细胞增殖有明显的抑制作用。结论 番茄红素体外能抑制SHEEC36增殖。

反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响

为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F

LC-MS法快速测定大鼠血浆五味子乙素及其药代动力学分析(英文)

目的建立LC-MS联用测定血浆五味子乙素的方法,观察五味子乙素在Wistar大鼠体内的药代动力学作用。方法提取五味子果实中的有效成分,给予大鼠一次性灌胃,其后在不同时间收集大鼠血液样品,通过LC-MS方法测定大鼠血浆中五味子乙素的浓度,分析大鼠血浆中五味子乙素的浓度-时间数据,应用3p97药代动力学分析软件计算大鼠体内五味子乙素的药代动力学参数。结果本法简单快速,可应用于不同样品中五味子乙素含量的测定。五味子乙素的保留时间为2.96min,血浆平均最大浓度为1.01μg/mL,灌胃后达峰时间为5.65hr,浓度时间曲线下的平均面积为15.98mg/h.L,平均清除率为0.94μg/h。结论本方法可应用于不同样本中五味子乙素的检测和实验动物体内五味子乙素的药代动力学分析。

阿魏酸等五种酚类物质对DNA氧化损伤的影响

背景与目的用单细胞凝胶电泳法研究阿魏酸、咖啡酸、香草酸、阿司匹林(乙酰水杨酸)和水杨酸五种酚类物质对DNA损伤的影响。材料与方法取正常人外周血淋巴细胞与不同浓度(0、50、100、500μmol/L)阿魏酸、咖啡酸、香草酸、阿司匹林、水杨酸五种酚类化合物于37℃下共同孵育30min后用或不用H2O2于4℃下处理10min,采用单细胞凝胶电泳法对DNA损伤进行分析、比较。结果分别用五种酚类化合物对淋巴细胞进行预处理后,经过H2O2处理,与阳性对照组相比,彗星尾距都有不同程度的缩短,其中阿魏酸、香草酸的作用最明显,并随着剂量的增加,尾距有减小的趋势(各浓度组之间没有显著差异),而咖啡酸、阿司匹林、水杨酸在浓度为500μmol/L时,尾距较低浓度组(50、100μmol/L)有所增加,以咖啡酸最为显著。用500μmol/L咖啡酸、阿司匹林、水杨酸与细胞共同孵育30min后(未经H2O2处理),咖啡酸可以导致DNA的明显断裂损伤,与对照组之间的差异有统计学意义,而阿司匹林、水杨酸与对照组相比,其彗星尾距没有显著变化。结论上述五种酚类物质均表现出了一定的保护DNA抗氧化活性,其中以咖啡酸保护DNA的作用最弱,而且咖啡酸单独与细胞作用时,可以产生DNA断裂损伤;阿司匹林和水杨酸在高浓度组其尾距较低浓度组又有所缩短,阿魏酸和香草酸抗氧化效果较好。

大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用

目的探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15 d取远断端组织行电镜结构观察。结果轴突在第0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,神经膜细胞(Schwann cell, 施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞,1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞,内有吞噬泡。结论大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除,施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。

高效液相色谱-质谱-质谱法测定脑组织中氨基酸类神经递质

建立测定大鼠脑海马组织中氨基酸类神经递质的高效液相色谱-质谱-质谱(LC-MS-MS)分析方法.海马组织匀浆后,匀浆液经盐酸正丁醇衍生化反应形成氨基酸丁酯,利用LC-MS-MS测定γ-氨基丁酸(GABA)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)的含量.GABA及Asp在0.1～0.8 μmol·mL-1,Glu在0.4～1.2μmol·mL-1浓度范围内线性关系良好.GABA、Asp、Glu的回收率分别为95%、112%、109%.本法具有特异性高、灵敏度好、测定快速等优点,适用于海马组织中的氨基酸类神经递质的测定.