肿瘤光动力疗法诱导细胞凋亡机制研究进展

肿瘤光动力疗法 (PhotodynamicTherapy ,PDT)是利用光敏剂分子接受光照后产生多种活性氧物质 (reactiveoxygenspecies ,ROS) ,使细胞结构和功能受到损伤 ,而导致细胞凋亡的一种独特的肿瘤治疗方法 ,已受到越来越多的重视。

苦瓜蛋白抗肿瘤作用及其分子机制

目的探讨苦瓜蛋白对荷瘤小鼠肿瘤生长的影响和荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及变化以及细胞因子白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法将清洁级ICR雄性小鼠按体重随机分成5组,建立肝癌H22皮下移植瘤模型,分为模型组、苦瓜蛋白高、中、低剂量(100、50、25mg/kg)组及环磷酰胺组(CTX,40mg/kg),各组均ip给药,观察苦瓜蛋白对肿瘤生长的影响;分离血清,明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化,ELISA检测细胞因子IL-6及TNF-α表达。结果苦瓜蛋白组与模型组相比,肿瘤质量明显减轻(P<0.01),小鼠体重也较模型组小鼠轻(P<0.01);苦瓜蛋白(100、50、25mg/kg)组及CTX组抑瘤率分别为85.81%、66.89%、52.05%、65.10%;各苦瓜蛋白组与模型组相比,MMP-2、MMP-9的活性降低,酶原表达下调(P<0.01);细胞因子IL-6及TNF-α表达明显下调(P<0.01),上述作用与苦瓜蛋白剂量相关。结论苦瓜蛋白具有较强的体内抗肿瘤活性;其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白抑制MMPs的活性及表达,以及调节IL-6及TNF-α等细胞因子的表达水平有关。

粘附分子CD_(54)、CD_(44)在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用

目的观察苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡时细胞粘附分子(CD54、CD44)表达水平的变化,探讨粘附分子在苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡中的作用。方法以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞;CCK-8试剂盒检测其对细胞生长的影响;流式细细术(An-nexinⅤ)、透射电镜等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细细术检测粘附分子(CD54、CD44)蛋白表达水平的变化。结果苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡;苦瓜蛋白处理组K562细胞中CD54、CD44表达分别为18.62%和1.32%,对照组分别为0.25%和0.17%,分别上调了18.37%、1.15%。结论苦瓜蛋白引起K562细胞凋亡的过程中,粘附分子CD54表达上调;CD54表达上调可能是苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一,其机制可能涉及细胞粘附依赖性细胞凋亡。

硒化合物与EGFR/MAPK信号传导相关性的初步研究

目的 :比较研究亚硒酸钠 (Na2 SeO3 )及硒 -甲基硒代半胱氨酸 (MSC )与EGFR/MAPK信号传导的相关性 ,初步探索这两种硒化合物可能的与MAPK信号传导相关的抗肿瘤作用机制。方法 :利用细胞形态学、丫啶橙 (acridineorange ,AO)荧光染色、免疫组化及免疫蛋白印迹等方法 ,观察分析Na2 SeO3和MSC在不同作用浓度与时间对人食管癌EC10 9细胞的细胞形态学改变以及EGFR、MAPK、act ERK1/2蛋白的表达。结果 :Na2 SeO3 及MSC这两种硒化合物对人食管癌EC10 9细胞EGFR及act ERK1/2蛋白表达均有低浓度 ( 1μg/mL)激活、高浓度抑制的作用 ;并均呈明显的时间和浓度的依赖性。但其区别表现在 :1)细胞形态学观察 :Na2 SeO3主要表现为细胞肿胀 ,出现胞质空泡及颗粒状物质增多等毒性改变 ,并随剂量增加毒性改变愈明显 ;MSC则主要呈现细胞固缩、凋亡小体形成 ,未见明显细胞毒性作用。 2 )MSC组对EC10 9细胞EGFR/act ERK1/2信号传导的抑制作用均明显高于相应浓度的Na2 SeO3组 ,P <0 0 1,但MSC 16μg/mL作用 2 4、48h时EGFR及act ERK1/2蛋白表达有很微弱回升。结论 :1)Na2 SeO3 和MSC对EC10 9细胞系细胞形态学影响与MAPK信号传导相关 ,且对EGFR/MAPK信号通路有抑制作用。 2 )与Na2 SeO3 比较 。

核基质蛋白与膀胱癌相关性的初步研究

目的 :探讨膀胱移行细胞癌核基质蛋白 (nuclearmatrixproteins ,NMPs)与膀胱移行细胞癌的相关性。方法 :根据Wen等的方法改良制备膀胱移行细胞癌NMPs ;NMPs免疫家兔获得抗血清 ,利用免疫吸附法及硫酸铵沉淀法纯化抗血清 ;Westernblot及confocal分析膀胱移行细胞癌NMPs与其他对照组之间的差异性。结果 :膀胱癌NMPs具有 (2 0～ 4 0 )× 10 3 及 (6 0～ 90 )× 10 3 两富集蛋白条带区域 ,与对照组比较差异明显 ;膀胱移行细胞癌中NMPs主要表达于细胞核、核膜及部分胞质 ,而对照组织无明显特异性表达 ,差异有显著意义。结论 :膀胱移行细胞癌存在肿瘤相关的特异性NMPs ,为开发基于尿液或血液的免疫检测方法提供了实验基础。

基因工程抗体研究进展

基因工程抗体技术的发展十分迅速 ,其应用也极其广泛。本文将介绍核糖体展示。

慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病白细胞核基质蛋白研究

采用高盐抽提方法制备正常人、慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血白细胞核基质蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，发现不同来源的白细胞，其核基质蛋白表达存在显著差异，主要表现在分子量为１１０ＫＤ、１２０ＫＤ和１３５ＫＤ的条带上。该发现对于进一步研究慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病的发病机制有一定意义。

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。

食管癌p53基因突变的研究

应用非同位素PCR－SSCP方法分析30例食管瘤患者癌组织及相应癌旁组织p53基因第5～9外显子，结果发现8例癌组织存在p53基因突变；其中的4例为p53基因杂合性丢失（LOH）。部分癌旁组织亦检测到p53基因突变。实验结果表明，p53基因突变可能是食管癌癌变的早期遗传学损害，对食管癌的发生起重要作用。

细胞粘附分子与肝脏疾病

细胞粘附分子（cell adhesion molecule，CAM）是一组介导细胞与细胞、细胞与基质问相互作用的分子，它包括钙粘素、整合素、选择素、免疫球蛋白超基因家族和高分子碳水化合物等几大类。近年来，关于细胞粘附分子与肝脏疾病的研究越来越多，如CAM在肝脏癌症的侵袭和转移、肝脏炎症细胞的浸润、肝纤维化和肝硬化等的发生、发展中起着重要的作用。现就粘附分子在肝脏疾病方面的进展作一综述。

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响

目的观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性,探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制。方法以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时,CCK-8检测其对细胞生长的影响;流式细胞术(AnnexinⅤ)、细胞形态学(光镜及电镜)等方法检测细胞凋亡;同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用;流式细胞术及形态学观察(光镜及电镜)证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡,且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高。苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0.33%和98.36%,对照组分别为74.03%和97.63%。结论苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用,其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡,而不是抑制细胞增殖。苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中,Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用。

苦瓜蛋白的药用价值

苦瓜为葫芦科苦瓜属植物,从中提取的蛋白质成分包括蛋白酶抑制剂、核糖核酸酶、核糖体失活蛋白等,具有比较广泛的药理学作用。MAP30等可以通过使核糖体失活,抑制肿瘤细胞蛋白质的合成,抑制肿瘤细胞的生长;通过抑制T细胞的增长,抑制HIV病毒的复制,达到治疗艾滋病的目的。笔者着重对其抗肿瘤作用及抗艾滋病作用进行了综述,认为苦瓜蛋白成分的开发和应用给恶性肿瘤和艾滋病的治疗提供了新的思路,具有潜在的开发应用前景。

苦瓜蛋白抑制肿瘤基质金属蛋白酶的活性及表达

[目的]探讨苦瓜蛋白对H22荷瘤小鼠基质金属蛋白酶表达及其活性的影响。[方法]将清洁级ICR雄性小鼠随机分成5组,建立肝癌H22移植瘤模型,分为阴性对照组、高剂量组(T3)、中剂量组(T2)、低剂量组(T1)及阳性对照组(CTX,环磷酰胺处理组)。在普通饲料饲喂的基础上采用腹腔注射给药法分别予阴性对照组生理盐水;高、中、低剂量组分别给以不同剂量苦瓜蛋白;阳性对照组予环磷酰胺。观察苦瓜蛋白对抑瘤率的影响,明胶酶谱法检测荷瘤小鼠血清基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性及其变化。[结果]苦瓜蛋白组低、中、高剂量组及阳性对照组抑瘤率分别为52.05%、66.89%、85.81%及65.10%;各苦瓜蛋白干预组与阴性对照组相比,MMP-2、MMP-9的活性降低,酶原表达下调(P<0.01),上述作用与苦瓜蛋白剂量相关。[结论]苦瓜蛋白具有抑制基质金属蛋白酶表达及其活性的作用,其抗肿瘤作用可能与苦瓜蛋白具有抑制MMPs的活性及其表达有关。

泛影葡胺对糖尿病肾病大鼠心肌细胞内皮素受体A表达的影响

目的 :观察造影剂泛影葡胺对糖尿病肾病大鼠心肌细胞内皮素受体A (endothelinreceptorA ,ETAR)表达的影响。方法 :应用链脲佐菌素 (STZ)腹腔注射建立SD大鼠糖尿病肾病模型。设对照组、模型组、泛影葡胺组 ,BQ1 2 3 +泛影葡胺组 ,利用RT PCR和westernblot方法检测心肌组织ETAR表达的变化。结果 :与对照组比较 ,各组糖尿病大鼠心肌ETAR表达上调 ,CM组上调尤为明显(P <0 .0 5) ,注射BQ1 2 3后 ,可见其表达下调。结论 :有糖尿病肾病基础病史时 ,泛影葡胺可引起心肌组织ETAR表达变化 ,从而影响心脏功能 ;预防性使用选择性ETAR拮抗剂BQ1 2 3 ,可下调ETAR蛋白表达 。

外周血白细胞核基质蛋白检测在造血系统恶性肿瘤中的应用

采用高盐抽提方法制备正常人、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病及恶性组织细胞病患者外周血白细胞核基质蛋白，经SDS—PAG电泳分析，发现不同来源的白细胞，其核基质蛋白表达存在显著差异，主要表现在分子量为210KD、135KD、110KD、46Kn和21KD的条带上。该方法简便，对于研究造血系统恶性肿瘤外周血白细胞核基质蛋白有显著意义。

核基质与肿瘤标记物

核基质蛋白参与染色质构成、DNA复制、转录及蛋白质翻译等一系列重要事件 ;核基质蛋白具有组织细胞特异性和肿瘤相关性。本文主要就核基质蛋白在肿瘤学上的应用作一综述。

恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达

目的 :克隆表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株 4 7kDa表面蛋白的成熟肽 ,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从 OtKarp株菌种基因组DNA中扩增出 4 7kDa成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建成重组质粒pQE30 4 7,转化大肠杆菌 (E coli) ,经IPTG诱导表达 ,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达。结果 :①获得长约 12 72bp的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因 ;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E coli有一相对分子量约为 4 3× 10 4 的独特蛋白带 ;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30 4 7中插入的基因片段的序列与已报告的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因序列基本一致 ,并与已知序列相同。结论 :获得了OtKarp 4 7kDa蛋白基因 ,并在E coli中实现了表达 。

人膀胱移行细胞癌EGFR基因片段与核基质蛋白的相关性

背景与目的:研究人膀胱移行细胞癌中表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因片断与核基质蛋白(nuclear matrix proteins,NMPs)的相关性。材料与方法:分别提取培养细胞和膀胱癌组织标本的核基质蛋白及其全细胞蛋白,同时抽提组织标本的基因组DNA和核基质DNA,根据EGFR cDNA序列合成两对PCR引物,分别以基因组DNA和各核基质DNA为模板,PCR扩增其结合片断;并对引物Ⅰ产物进行序列测定;以引物Ⅱ的产物制备探针,southwestern杂交进一步检测EGFR基因片断与核基质蛋白结合情况。结果:110 bp PCR(引物Ⅱ)产物见于基因组DNA和各核基质DNA(NM DNA0,NM DNA25,NM DNA50,NM DNA100);940 bp PCR(引物Ⅰ)产物出现在基因组DNA和除NMDNA100外其他核基质DNA中。940bp序列与EGFR基因DNA序列完全一致。Southwestern blot检测结果表明,全细胞蛋白及核基质蛋白中出现特异的分子量约为60kD的DNA-蛋白阳性杂交条带。结论:人膀胱移行细胞癌中,EGFR活性转录基因片段与核基质及核基质蛋白结合,NMPs可能和EGFR基因转录或转录后翻译等基因调控事件相关,核基质对EGFR在膀胱癌中高表达可能具有重要的调控作用。