肥大细胞与炎症性皮肤病关系的研究进展

肥大细胞参与皮肤病尤其是炎症性皮肤病的病理生理过程。近年来 ,人们对肥大细胞与炎症性皮肤病的关系更加重视并进行了较为深入的研究。本文就近年来肥大细胞在异位性皮炎、接触性皮炎、荨麻疹、银屑病、“屏幕皮炎”。

肥大细胞在支气管哮喘中的研究进展

支气管哮喘(哮喘)是呼吸系统的常见病和多发病,肥大细胞是其主要的反应细胞,目前关于肥大细胞在哮喘中作用的研究取得了新的进展,特别是肥大细胞蛋白酶及其抑制剂的深入研究和哮喘患者气道平滑肌束中肥大细胞数量明显增加并呈脱颗粒状态的发现,引起学者们极大的关注,本文将就肥大细胞在哮喘中的研究进展进行综述。

采用简并引物克隆葎草花粉过敏原全长同源cDNA

目的 :建立一套稳定可靠的方法 ,对过敏原性物种中的过敏原同源基因进行快速克隆。方法 :在分析生物信息数据库中积累的大量过敏原序列同源性的基础上 ,设计简并引物 ,基于高质量草花粉RNA ,逆转录合成cDNA。采用Touch down方式在cDNA池中进行选择性PCR扩增。同时借助梯度PCR程序 ,对引物扩增的简并性作进一步强化 ,并结合RACE技术获取全长cDNA ,进而对草花粉中的过敏原同源基因进行克隆。结果 :成功地获得 3个全长cDNA克隆。序列分析显示 ,这些基因与已知过敏原的基因序列相似性高达79%～ 85 % ,初步认定其为泛过敏原肌球蛋白抑制蛋白 (pro filin)的同源基因。对比RACE技术获得的相应基因的全长序列发现 ,这些序列在引物结合处与简并引物序列之间存在 4个碱基的差异 ,提示采用Touchdown方式的梯度PCR程序 ,可使引物的简并性得到进一步扩展。结论 :简并引物与Touch down梯度PCR相结合的方法 。

TLR1-TLR4在人嗜碱性粒细胞中的表达

目的分别在基因和蛋白水平上观察Toll样受体(Tolllikereceptor,TLR)家族成员中的TLR1、TLR2、TLR3和TLR4在人嗜碱性粒细胞系KU812中的表达。方法取1×106细胞,从细胞中提取总RNA后,用RT-PCR检测细胞中mRNA的表达;用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体和小鼠同型抗体行免疫荧光染色后,在流式细胞仪上检测TLR1-TLR4蛋白的表达。结果人嗜碱性粒细胞有TLR1-14mRNA的组成型表达。在流式细胞仪检测中,用抗人TLR1-TLR4单克隆抗体染色的细胞,其荧光强度均明显高于同型对照。结论嗜碱性粒细胞中有TLR-TLR4的组成型表达,提示嗜碱性粒细胞可作为一种免疫细胞对病原微生物进行识别。

组胺对肺上皮细胞Toll样受体表达的上调作用

目的：观察组胺对肺上皮细胞中Toll样受体（TLR）表达的影响．方法：体外培养人肺上皮细胞株A549，用RT-PCR和实时定量PCR检测静息状态或组胺作用下的A549细胞中TLR1～TLR10mRNA的变化，并用流式细胞术进一步确定组胺对TLR3表达的调节作用．结果：A549细胞有TLR1～TLR10 mRNA的组成型表达，组胺对TLR3 mRNA和蛋白的上调作用具有时间和剂量依赖性，并且H1受体阻断剂可抑制组胺对TLR3的上调作用．结论：组胺可上调肺上皮细胞中TLR3的表达，提示当呼吸道存在变态反应性病变时，增多的组胺可能会增加肺上皮细胞对病毒感染的敏感性．

人脐静脉内皮细胞体外培养与鉴定新方法探索

目的 :探讨人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)培养与鉴定新方法。方法 :Ⅰ型胶原酶消化、分离HUVEC ,含内皮细胞生长添加物 (12. 5mg/L)、肝素 (10 0mg/L)的体积分数 2 0 %胎牛血清_M199培养系统培养HUVEC。流式细胞术和免疫荧光法检测其endoglin(CD10 5 )、血小板源内皮细胞黏附分子_1(CD31)表达。结果 :HUVEC均表达CD10 5和CD31;HUVECCD10 5 + 百分率为 96 . 5 6 % ,CD31+ 90 . 4 2 %。结论 :该培养系统简便、可行 ,CD10 5和CD31有助于鉴定HUVEC的分离纯度。

革兰阳性菌肽聚糖对人嗜碱性粒细胞中TLR_3、TLR_9 mRNA的上调作用

目的:探讨Toll样受体(TLR)的配体肽聚糖(PGN)、聚肌苷酸_聚胞苷酸(PolyI_C)、脂多糖(LPS)和含有去甲基化的寡核苷酸序列(CpGDNA)对嗜碱性粒细胞中TLR2～4和TLR9mRNA表达的调节作用。方法:用实时定量_逆转录聚合酶链反应检测PGN、PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激人嗜碱性粒细胞系(KU812)后,TLR2～4和TLR9mRNA表达的变化。结果:PGN刺激KU812细胞后,TLR3和TLR9mRNA的表达与未刺激组比有统计学意义(P<0.05);而PolyI_C、LPS和CpGDNA刺激KU812细胞后,细胞中TLR2～4和TLR9的mRNA与未刺激组比无统计学意义(P>0.05)。结论:革兰阳性菌的感染可能增加人嗜碱性粒细胞对病毒或其它细菌感染的敏感性。

Tryptase阳性细胞在移植后不同时间段排斥肾中的分布

目的 了解Tryptase阳性肥大细胞在肾移植后不同时间段的排斥肾组织中的分布规律。方法 采用抗Tryptase单抗免疫组化染色法与甲苯胺蓝特殊染色方法 ,对移植后 8d～ 7a手术切除的排斥肾进行了染色。结果 在移植后的各个时间段的排斥肾中均见到较正常肾明显偏多的肥大细胞 ,且随着移植时间的延长呈增长的趋势。其中移植后 7a以上组的肥大细胞明显高于 1～ 2a组和 5～ 6a组 (P <0 .0 1)。甲苯胺蓝染色结果与Tryptase免疫组化结果相一致 ,但Tryptase免疫组化方法更为敏感。结论 肥大细胞可能参与了肾移植的排斥反应 。

人肥大细胞羧基肽酶的单抗2A9识别表位的预测和鉴定

目的：分析人肥大细胞羧基肽酶（hMC-CP）的单克隆抗体（mAb）2A9识别表位所在区域．方法：根据肥大细胞hMC-CP的二级结构、亲水性、表面可能性和抗原性指数，对hMC-CP的B细胞表位进行预测．依据预测结果，采用缺失突变的方法，分别扩增编码hMC-CPN端第1～111（P1P2），97～202（P3P4）和1～202（P1P4）位氨基酸的cDNA，并构建重组原核表达载体pET-44／P1P2、pET-44／P3P4和pET-44／P1P4．用IPTG诱导表达融合蛋白，并对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析．结果：B细胞表位预测结果显示，hMC-CP的N端第1～202位氨基酸含有多个潜在的B细胞表位．PCR扩增出的3个目的片段，其DNA序列同NCBI公布的序列完全一致．Western blot结果显示：E．coli BI21（DE3）表达的融合蛋白P3P4和P1P4均与mAb2A9反应；而融合蛋白P1P2与mAb 2A9不发生反应、结论：用多参数综合测评的方法，可获得满意的hMC-CPB细胞表位预测结果，本研究中mAb 2A9识别的表位位于hMC-CP的112-202位氨基酸区域．

关于癌症患者是否应该被告知真情的调查分析与解决策略

采用问卷形式 ,针对患者对所患疾病的了解情况和对此问题医生的态度调查了 6 6 9人 ,旨在回答面对癌症患者 ,医生是否告知真情 ?同时提出患者情况评估积分法 ,并对以上人群进行了调查 ,从实践的角度探讨该方法是否可行 ?最后根据调查结果 ,依据得分多少得出 3种做法。

肿瘤坏死因子-α和干扰素-γ对人嗜碱性粒细胞中Toll样受体基因表达的调节作用

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)对人嗜碱性粒细胞中Toll样受体(TLR)基因表达的调节作用。方法:用逆转录聚合酶链反应检测人嗜碱性粒细胞系(KU812)中,TLR1～10mRNA的组成型表达;用实时定量聚合酶链反应检测TNFα或IFNγ刺激KU812细胞后,TLR1～10mRNA表达的变化。结果:人嗜碱性粒细胞有TLR1～10mRNA的组成型表达,其中TLR1～6和TLR9的mRNA表达量较高,而TLR7,8和TLR10mRNA的表达量相对较少。TNFα可明显上调TLR2～4mRNA的表达,而IFNγ对TLR2和TLR9的mRNA表达有明显的上调作用。结论:人嗜碱性粒细胞不仅参与了天然免疫,而且其免疫功能还受到细胞因子的调节。