哮喘与非哮喘中肥大细胞脱颗粒的研究

目的 研究哮喘与非哮喘中肥大细胞脱颗粒。方法 2 9名轻度哮喘患者参加了本项研究。支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的细胞经冲洗后 ,加入抗IgE抗体或CI或缓冲液的试管中进行激发试验。组织中肥大细胞的悬浮过程由Ⅰ型胶原酶和Ⅰ型透明质酸酶在 37℃水浴箱中完成。BALF中的组胺采用酶联免疫反应试剂盒测定 ,而组织中的组胺则采用以玻璃纤维为基础的荧光方法来测定。结果 哮喘患者BALF中的肥大细胞对抗IgE抗体的敏感性要比非哮喘者至少敏感 10 0倍 ;对CI刺激的敏感性与非哮喘者的相似。

急性哮喘患者血浆白细胞介素-18、白细胞介素-16、白细胞介素-4及γ-干扰素水平的相关性研究及临床意义

目的探讨急性哮喘患者血浆白细胞介素18(IL18)、IL16、IL4及γ干扰素(IFNγ)水平的相关性及临床意义。方法急性发作期哮喘患者共60例(重度30例,中度30例),正常对照30例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(SELISA),检测血浆IL18、IL16、IL4及IFNγ水平。结果哮喘患者血浆IL16水平显著降低,正常对照组血浆IL16较中、重度哮喘组高3倍以上(P<005);IL18水平降低,但仅中度哮喘组与正常对照组相比有显著性差异(P=0015);IL4水平降低(P=0006),中、重度哮喘组与正常对照组相比,P值分别为0045和0043;IFNγ水平与正常对照组比较无显著性差异(P>005)。相关性分析表明IL18与IL16之间存在显著相关性(r=065,P<005),IFNγ与IL16之间也存在显著相关性(r=066,P<005),IFNγ与单核细胞计数存在相关性(r=039,P<005)。结论IL18、IL16、IL4和IFNγ均可能参与了哮喘病理生理过程,多年反复发作的中、重度发作期哮喘患者可无明显的Th1与Th2细胞因子失衡现象。

沈阳农村支气管哮喘临床特点与用药情况流行病学调查

目的 了解沈阳农村支气管哮喘临床特点与用药的流行病学情况。方法 以随机抽样方法 ,抽取 31 965人 ,根据病史、体征、肺功能检查诊断哮喘患者。单因素分析用于评价哮喘的危险因素。结果 人群总累积患病率为 1 933 % (61 8∶31 965) ,男女比例为 1∶1 58;农村哮喘患者的主要症状为阵发性喘息、咳嗽、夜间干咳和憋气 ;部分患者肺部可闻及哮鸣音 ,少数患者可闻及湿音 ;肺功能损害轻度、中度和重度分别为 31 1 %、33 0 %和 35 9%。 61 8名哮喘患者中 ,56 0 %服用平喘药 ,8 4%用青霉素等抗生素治疗 ;平喘药以喘静、茶碱和百喘朋为主 ,抗炎治疗则以含激素的七种药物粉末最为常见。

哮喘中IgE依赖性和非IgE依赖性肥大细胞激活的研究

目的 :研究哮喘中IgE依赖性和非IgE依赖性肥大细胞的激活。方法 :取 2 9例轻度哮喘患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞 ,经冲洗后 ,加入含抗IgE抗体、离子载体钙 (CI)、腺苷、腺苷衍生物 (NECA)或Hanks平衡盐溶液 (HBSS)的LP4 试管中进行激发试验。检测BALF中肥大细胞分泌的组胺和类胰蛋白酶水平。结果 :抗IgE抗体浓度低至 0 0 1%时仍可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放 2 1 1%的组胺 ,抗IgE抗体 0 33%可促进肥大细胞分泌类胰蛋白酶 ;CI 0 3μmol L即可促进肥大细胞分泌组胺和类胰蛋白酶 ;腺苷浓度仅在浓度高达 10 0 0 μmol L时方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约16 6 %的组胺 ,NECA的作用与腺苷相似 ;腺苷浓度在 10 μmol以上、NECA浓度从 0 1μmol L至 10 0 0 μmol L均可明显促进哮喘患者BALF中肥大细胞释放类胰蛋白酶。结论 :抗IgE抗体、CI、腺苷及NECA均可引起IgE依赖性或非IgE依赖性肥大细胞的激活 ,但不同的途径激活 。

蛋白酶抑制剂对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响

目的 探讨蛋白酶抑制剂和组胺对肥大细胞类胰蛋白酶分泌的影响。方法 扁桃体组织经酶消化后 ,细胞成份用全HBSS重新悬浮。肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在 37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。结果 鱼精蛋白具有刺激人类扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶的作用 ,其分泌量可高达基础分泌量的5倍。高浓度TLCK和TPCK可抑制抗 IgE诱导的类胰蛋白酶释放。TLCK在有否预培养的情况下均能抑制钙离子导入剂 (cal ciumionophore ,CI)诱导的类胰蛋白酶释放 ,而TPCK则只有在 2 0min预培养后才能显示此作用。结论 TLCK和TPCK抑制IgE依赖性和非依赖性类胰蛋白酶释放提示具有胰蛋白酶和糜蛋白酶活性的酶参与肥大细胞的激活 分泌偶联过程。

哮喘患者痰中IL-18、IL-16、IL-8、嗜酸性粒细胞趋化因子水平和类糜蛋白酶活性的测定

目的探讨哮喘患者IL-18、IL-16、IL-8、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)的水平和类糜蛋白酶(chymase)活性。方法采用夹心ELISA法检测痰中IL-18、IL-16、IL-8、eotaxin水平。Chymase活性测定使用琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-硝基酰苯胺(SAAPP)作底物,采用酶标仪以410nm波长连续监测吸光度的变化。结果Chymase活性测定12/32(37.5%)的哮喘患者痰液中水解SAAPP的酶活性高于对照组,类糜蛋白酶抑制剂SBTI、α1-AT可分别抑制这种酶活性的71.9%和72.1%;急性期哮喘患者痰中IL-18、IL-16、IL-8和eotaxin值均高于对照组;相关性分析表明IL-8与IL-16(r=0.55,P<0.05)和eotaxin(r=0.41,P<0.05)之间存在弱正相关;IL-18与IL-16之间存在显著正相关(r=0.64,P<0.01);IL-18与IL-16均与eotaxin有显著正相关(r分别为0.66和0.64,P<0.01);eotaxin、IL-18、IL-16、IL-8与嗜中性粒细胞、上皮细胞、淋巴细胞和巨噬细胞均无明显相关性。结论哮喘患者痰液中IL-18、IL-16、IL-8、eotaxin水平及chymase活性增高,表明它们在哮喘发病机制中可能起到一定的作用。

哮喘患者血浆类胰蛋白酶、IL-8和嗜酸性粒细胞趋化因子水平与类糜蛋白酶活性测定及相关性分析

目的 :探讨哮喘患者血浆类胰蛋白酶 (tryptase)、白介素 8(IL 8)、嗜酸性粒细胞趋化因子 (eotaxin)水平和类糜蛋白酶 (chymase)活性及相关性 .方法 :分别取健康人、哮喘急性期中度和重度患者各 30例 ,静脉抽取抗凝血 .在UniCAP1 0 0全自动体外变应原检测仪上进行tryptase测定 ,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验 (SELISA)检测血浆IL 8,eotaxin水平 .Chymase活性测定 :使用琥珀酰 丙氨酸 丙氨酸 脯氨酸 苯丙氨酸 酰苯氨 (SAAPP)做为底物 ,采用酶标仪在 4 1 0nm连续监测吸光度的变化 .结果 :急性期哮喘患者血浆tryptase(2 .8μg/L)值与对照组 (1 .2 μg/L)比较明显升高 (P <0 .0 5 ) ;IL 8值 (1 4 1 .5 μg/L)显著高于对照组 (6 .5 μg/L) (P <0 .0 5 ) ;Eotaxin值 (1 5 4 .9μg/L)显著高于对照组 (4 9.9μg/L) (P <0 .0 5 ) .1 8.3%的哮喘患者血浆chymase活性[(1 0 9.9± 1 32 .0 )nkat]高于对照组 (0nkat) ,其活性可被类胰蛋白酶抑制剂SBTI和α1 AT分别抑制 87.0 %和 88.2 % .IL 8与Eotaxin之间存在弱相关性 (r=0 .4 ,P =0 .0 4 6 ) ;Tryptase ,Eotaxin ,IL 8与血涂片中的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞之间均无明显相关性 .结论 :肥大细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及其介质均参?

腺苷和抗IgE抗体对哮喘患者BALF中肥大细胞分泌组胺的影响

目的 :研究支气管哮喘 (哮喘 )患者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肥大细胞的功能特性。方法 :2 9例轻度哮喘患者BALF中的细胞经冲洗后 ,加入含抗IgE抗体、腺苷、缓冲液或腺苷 +抗IgE抗体的LP4试管中进行激发试验。检测BALF肥大细胞中的组胺释放量。结果 :腺苷浓度达 10 0 μmol/L时 ,仍无明显刺激组胺释放的作用 ,仅在浓度高达 10 0 0 μmol/L时 ,方可诱导哮喘患者BALF中肥大细胞释放约 17%的组胺。抗IgE抗体的浓度大于 1× 10 -4g/L时对哮喘患者BALF中肥大细胞的释放组胺有明显的促进作用 ;仅 3× 10 -5g/L的抗IgE抗体与腺苷联合应用的实测值 ,明显高于对应的单独作用组的相加值。结论 :哮喘患者BALF中的肥大细胞对腺苷的刺激反应较差 ,但对抗IgE抗体刺激的反应性明显增强。仅低浓度的抗IgE抗体和腺苷具有协同作用。

哮喘支气管黏膜中类胰蛋白酶的表达增强

目的 观察含类胰蛋白酶的肥大细胞在豚鼠支气管黏膜的表达和分布特征。方法 Dunkin Hartley豚鼠随机分为哮喘组(A组)和生理盐水组(B组)。用100 mg/mL卵蛋白进行致敏,并于致敏后第5周行抗原特异性支气管激发试验。激发后2h取各组豚鼠支气管组织标本,免疫组化染色以抗人类胰蛋白酶(Tryptase)单克隆抗体(AA1)为一抗,过氧化物酶标记的绵羊抗鼠IgG为二抗,并用联苯二胺(Diaminobenzidine,DAB)显色。仅选择阳性染色细胞进行计数。结果 鼠抗人Tryptase单克隆抗体即可识别人支气管Tryptase又可识别豚鼠支气管Tryptase。哮喘支气管组织中Tryptase阳性细胞数明显多于正常支气管组织。相似地,支气管激发试验后的豚鼠支气管组织中的肥大细胞数要比生理盐水吸人组多出2.0倍以上。结论 抗人Tryptase单克隆抗体可以用于识别豚鼠支气管的肥大细胞。哮喘者和激发试验阳性的豚鼠支气管肺组织中的Tryptase阳性肥大细胞数明显多于正常支气管组织,表明肥大细胞在支气管哮喘发病机制中可能起重要作用。

特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒对肥大细胞分泌的调控作用

目的:研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒,对肥大细胞稳定性的影响。方法:扁桃体组织经酶消化后,将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液(HBSS)重新悬浮。肥大细胞 激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成。类胰蛋白酶水平用ELISA法测定。结果:同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒,可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放。仅1 mg/L(1.54μmol/L)的双苯甲脒,即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52％,10 mg/L则能抑制76％的释放。将预培养时间延长30 min,对双苯甲脒的抑制作用无明显影响。在培养到45 min时,双苯甲脒可抑制高达47％的基础类胰蛋白酶释放。与细胞培养15 min后,抗IgE抗体(1g/L)或钙离子导入剂(CI,1 μmol/L)引起的类胰蛋白酶释放的量,分别为基础分泌量的3.2和2.6倍。但是,当细胞与全HBSS预培养超过10 min后,肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低。结论:双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放。因此,有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂。

气道粘液、粘蛋白及其分泌调节

Mucus secreted mainly by epithelial goblet cells and submucosal glands covering the respiratory tract plays an important role in the protection from external aggressions, such as solid particles, pathogens and chemical agents by mucociliary clearance. The viscoelastic properties of mucus are mainly determined by the presence of extensively-glycosylated high molecular weight mucins. A lot of factors influence the expression and secretion of mucins in airway, lead to mucus overproduction, which is a distinguishing feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD) and causes disruption of the mucociliary clearance function, resulting in airway block, chronic infection and death.

哮喘患者血浆IL-17、IL-10水平的测定及临床意义

目的 :探讨哮喘患者血浆IL 17、IL 10的水平及临床意义。方法 :急性发作期哮喘患者共 60例 (重度3 0例 ,中度 3 0例 ) ,正常对照组 3 0例。采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验 (ELISA) ,检测其血浆IL 17、IL 10水平。结果 :急性期哮喘患者血浆IL 17值增高 (P =0 0 0 6) ,中、重度哮喘组与对照组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;血浆IL 10值明显降低 (P =0 0 0 3 ) ,中、重度哮喘组与对照组比较差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;相关性分析表明IL 17与IL 10之间无相关性 ,而且与血涂片中的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞之间均无明显相关性 ,嗜中性粒细胞和淋巴细胞之间存在显著负相关。结论 :IL 17、IL 10参与哮喘的慢性气道炎症过程。

用免疫荧光标记对人组织中肥大细胞亚型的分选与形态观察

方法:利用中性蛋白酶成分、特征性酶抗体的免疫荧光染色和流式细胞仪确定分选肥大细胞亚型,以激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒。结果:三种免疫表型被确定:肥大细胞的类胰蛋白酶阳性(MCT)、类糜蛋白酶阴性;类糜蛋白酶阳性(MCC)、类胰蛋白酶阴性和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性(MCTC)。肥大细胞内分泌颗粒分散或聚集存在,分泌颗粒突起分泌或以分散的方式释放。分泌颗粒大范围释放后,肥大细胞的形态结构发生了改变。结论:利用肥大细胞的特征性酶抗体、免疫荧光标记和流式细胞仪可将人组织中的肥大细胞分选纯化为三种亚型;以共聚焦显微镜显示肥大细胞含有丰富的分泌颗粒,它说明肥大细胞具备了为人体I型变态反应提供快速反应的物质基础。

rIL-12和rIFN-γ可抑制气道肥大细胞的聚集与哮喘发作

目的 观察细胞因子IL 12和IFN γ对抗原诱发的过敏性哮喘及气道肥大细胞浸润的抑制作用。方法 将DunkinHartley豚鼠随机分为哮喘组 (A组 )、rIL 12干预组 (B组 )、rIFN γ干预组 (C组 )和正常对照组 (D组 ) ,并用 10 0g/L卵蛋白分别致敏各组豚鼠。于致敏后第 5周行抗原特异性支气管激发试验。A、B、C 3组在卵蛋白支气管激发试验前 2 4、12、和 2h分别用生理盐水、rIL 12和rIFN γ进行气道雾化吸入干预。激发试验后 1h取各组豚鼠支气管 肺组织标本 ,并用抗人类胰蛋白酶 (Tryptase)单克隆抗体 (AA1)进行免疫组织化学染色 ,计数阳性染色细胞。结果 支气管激发试验阳性率A组为 10 0 % ,B、C和D组均为 0 %。A组豚鼠支气管 肺组织中Tryptase阳性肥大细胞计数几乎高于B、C和D组的 3倍。结论 rIL 12和rIFN

组织中肥大细胞内F-actin对其不同亚型细胞分泌作用的影响

目的：研究细胞内丝状肌动蛋白的变化对不同亚型肥大细胞分泌作用的影响。方法：利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体和鬼比环肽的免疫荧光标记；以流式细胞仪检测分选人皮肤组织中肥大细胞的亚型；使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒和微丝的分布。结果：类胰蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内含有丰富的丝状肌动蛋白环，在质膜内层区域形成阻碍类胰蛋白酶释放的屏障；大量的类胰蛋白酶暂存于分泌泡中，少量的类胰蛋白酶因细胞内丝状肌动蛋白环的解聚使之从分泌泡中释放。而类胰蛋白酶和类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞及类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内少见或未见明显的阻碍蛋白酶释放的丝状肌动蛋白环；细胞形态膨胀，细胞内蛋白酶已释放。结论：人皮肤组织中肥大细胞内类胰蛋白酶和／或类糜蛋白酶的含量及其肥大细胞亚型与丝状肌动蛋白环相关联。

茶碱对哮喘患者支气管肺泡灌洗液中肥大细胞激活的影响

目的 :研究哮喘患者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中肥大细胞的功能特性。方法 :2 9名轻度哮喘患者参加了本项研究。BALF中的细胞经冲洗后 ,加入含抗IgE抗体、腺苷或腺苷 +茶碱、抗IgE抗体 +茶碱的LP4试管中进行体外激发 ,检测BALF肥大细胞中的组胺释放量。结果 :浓度为 3 0 0nmol L和 1μmol L的腺苷仅可刺激哮喘患者BALF中肥大细胞释放 3 %～ 5 %的组胺 ,1μmol L的腺苷与茶碱联合作用后可略降低腺苷的促进作用 ,抗IgE抗体浓度在 0 0 1%可促进哮喘患者BALF中肥大细胞释放2 3 6%的组胺 ,与茶碱联合作用能降低约 4%的组胺释放。结论 :哮喘患者BALF中的肥大细胞对腺苷的刺激反应较差 ,但对抗IgE抗体刺激的反应性明显增强 。

胚胎植入前非整倍体筛查

染色体非整倍体改变在体外受精胚胎中十分多见 ,是导致人类辅助生殖失败的常见原因。胚胎细胞染色体的非整倍体筛查 ,已成为胚胎植入前遗传学诊断的主要内容。体外受精后胚胎活检 ,进行荧光原位杂交 ,避免非整倍体胚胎移入母体宫腔 ,能起到显著提高着床率和改善受孕率的效果。