细粒棘球绦虫EgA31重组抗原与其它寄生蠕虫的免疫交叉反应

为了研究细粒棘球绦虫EgA31重组蛋白的抗原性 ,作者将细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原的cDNA克隆EgA31 3′端 5 0 0bp碱基片断亚克隆入pGEX 5X表达质粒 ,构建EgA31 GST重组蛋白原核表达系统 ,所制备的重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清 ;免疫试验表明该抗血清可识别EgA31 GST重组蛋白及细粒棘球绦虫 6 6kDa抗原 ,也可与多房棘球蚴、犬复孔绦虫、犬钩虫、日本血吸虫的成虫虫体总蛋白 6 6kDa抗原分子发生交叉反应 。

细粒棘球绦虫疫苗候选分子EgA31的GST融合蛋白原核表达及纯化

目的 :构建细粒棘球绦虫疫苗候选分子EgA31重组质粒 ,表达及纯化EgA31 GST融合蛋白 ,为疫苗的研究奠定基础。方法 :PCR扩增EgA31cDNA ,将得到的cDNA经限制性内切酶酶切 ,然后亚克隆入pGEX 5X 3质粒 ,转化BL2 1宿主菌 ,IPTG诱导重组质粒的表达 ,亲和层析纯化表达产物 ,Bradford法测定重组蛋白含量 ,用SDS PAGE和Westernblot进行分析鉴定。结果 :SDS PAGE显示分离纯化的EgA31 GST融合蛋白为 4 5kDa ,测序检验重组质粒中EgA31cDNA序列正确。EgA31 GST融合蛋白免疫豚鼠得到的抗血清可与细粒棘球绦虫原头蚴总蛋白在 6 6kDa处特异性反应。结论 :EgA31 GST融合蛋白获得高效表达 ,并成功纯化 ,初步实验证明具有良好的免疫原性 。

原生动物阴道毛滴虫的酵酶长寿保障基因LAG1同源基因克隆和序列分析(英文)

为了探讨寄生性原虫阴道毛滴虫细胞生长和衰老相关基因 ,作者从阴道毛滴虫的cDNA表达文库中分离出一具 91 0碱基对的cDNA克隆 ,其编码框长 834bp ,推测蛋白质序列有 2 77个氨基酸。序列分析显示该克隆与酵酶长寿保障基因LAG1同源性最高 ,其氨基酸序列中含有LAG1及其同源基因保守的Lag1结构域和TLC结构域以及 6个跨膜螺旋区和一个C 未端的内质网保留信号域。因此推测该克隆系酵酶LAG1的同源基因 ,该基因可能参与阴道毛滴虫的神经酰胺生物合成以及调解细胞的生命期或细胞衰老。该基因的基因组DNA与其cDNA序列一致 。

约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的 用针对鼠约氏疟原虫 (Plasmodium yoelii)侵入期的 8种单克隆抗体 ,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P .berghei )侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。 方法 间接免疫荧光实验 (IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位 ,SDS PAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。 结果 经上述两种方法检测发现 ,顶端复合体抗原成分复杂 ,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位 ,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分 ,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。 结论 疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位 ,也有各自的独特组分。

一种新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因(英文)

目的铁氧还蛋白系铁硫蛋白,在多种反应体系中起着传递电子的作用,也参与抗滴虫药物甲硝咪唑杀虫作用的激活。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫铁氧还蛋白基因,以便进一步探讨其生理功能。方法构建阴道毛滴虫cDNA表达文库,分离cDNA进行克隆、测序及序列分析。结果在分离出的cDNA克隆中发现一个新的铁氧还蛋白基因。该基因读码框全长312bp,相应蛋白质序列具103个氨基酸;在该蛋白质前体的N端带有10个氨基酸残基的氢酶体靶片段(MLSQCSPLRF)。序列分析显示该铁氧还蛋白(TvFd2)与已报道的阴道毛滴虫铁氧还蛋白(TvFd)有高度同源性(69%);TvFd2与铁氧还蛋白(2Fe-2S)的两大亚类(氧化酶铁氧还蛋白和光合铁氧还蛋白)均具较低的同源性;可与(2Fe-2S)结合的4个半胱氨酸排列成典型的铁氧还蛋白保守序列(-C-X5-C-X2-C-Xn-C-)。结论分析表明TvFd2是一新的阴道毛滴虫铁氧还蛋白,其功能有待进一步研究。

蝇幼虫后气门结构的光镜和扫描电镜对照研究

本文应用光镜及扫描电镜对大头金蝇、家蝇等幼虫的后气门进行了对照观察,证明后气门由体壁层、气门极层及连接于其下的气管3部份组成,在体壁层与气门极层之间为潜在性的气门腔。在光镜下只能看到气门板层上的结构,而扫描电镜可看到体壁层,其上也有3个长条形的气门裂,表面光滑,中间有闭合的缝隙。在每个气门裂的外侧缘上及内、中气门裂之间,共有4组气门肌(原称气门腺)。体壁层在气门肌的作用下可开闭,使空气进入或防止水的侵入。不同蝇种后气门体壁层上的气门裂、钮孔及气门肌的形态、数量、分布基本相似,仅气门肌的分枝数有所不同,而与气门板上各种结构的位置及形态并不一定相同。本文也观察了大头金蝇及棕尾别麻蝇一龄幼虫的后气门,证明都有2个气门裂,但发育尚未完全。

应用ELISA和IHA法检测精神分裂症患者血清弓形虫抗体

应用ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ法检测精神分裂症患者血清弓形虫抗体汕头大学医学院寄生虫学教研室（５１５０３１）王绍渠，许世锷，骆建民，陈静卿汕头大学医学院精神卫生中心朱少毅，肖少雄，林勇强我们应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法同时采用间接红细胞凝集试验（ＩＨ...

三氯苯达唑体内外杀灭卫氏并殖吸虫的效果和虫体蛋白质、糖原及DNA含量测定

目的 探讨三氯苯达唑在家犬体内及体外培养中对卫氏并殖吸虫的杀虫效果 ,并取得大量死虫。探讨该药对虫体蛋白质、糖原及DNA含量的影响 ,为研究该药的杀虫机理奠定基础。方法 用卫氏并殖吸虫囊蚴感染家犬 ,至粪检查到虫卵后 ,用三氯苯达唑口服治疗观察疗效。将从对照犬获得的活虫培养于BME培养液内 ,观察体外杀虫效果。用Lowry法测定虫体蛋白质含量 ;用Johnson法测定还原糖含量 ;用二苯胺显色法测定DNA含量。结果 治疗犬于服药后 3天及 5天解剖 ,均可获得大量死虫 ,杀虫率达 10 0 %。在体外培养中 ,加入药物后虫体的平均存活时间为 2 39天 ,与对照组有显著差异。体内杀虫所取得的死虫较对照组的活虫 ,虫体显著缩小 ,重量减轻 ;体外培养中杀死的虫体 ,体积无明显缩小 ,但重量显著减轻。经测定体内外杀虫组与对照组之间 ,虫体蛋白质含量及DNA含量均有非常显著的减少 ;而虫体糖原的含量 ,体内杀虫组有非常显著的减少 ,而体外杀虫组则无显著差异。结论 三氯苯达唑在体内外对卫氏并殖吸虫有良好的杀虫效果。药物主要作用于虫体的蛋白质及核酸的合成或代谢 ,而对虫体糖原的合成与代谢影响不大。

细粒棘球绦虫EgA31疫苗的分子生物学特征

免疫预防是控制棘球蚴病经济、快速且有效的方法。近年来棘球蚴病的免疫学和疫苗研制方面均取得了很大进展,分子疫苗成为预防包虫病流行较理想的方法。其中细粒棘球绦虫EgA31疫苗是一有希望的疫苗候选分子,本文从EgA31抗原的基因结构和免疫特性等方面介绍了其分子生物学特征。

粤东平原和山区健康人群血清弓形虫抗体检测比较

目的 :了解粤东健康人群弓形虫病感染情况 ,分析丘陵山区和平原地区的感染差异。方法 :间接血凝试验 (IHA)和酶联免疫吸附试验 (ELISA)。结果 :共检测丘陵山区和平原地区健康人群 12 91人 ,阳性 15 1人 ,检出率为 11.7% ,其中丘陵山区为 15 .5 6 % ( 12 6 /810 ) ,平原地区为 5 .19% ( 2 5 /4 81)。结论 :粤东丘陵山区与平原地区弓形虫病感染率差异有显著性 (P <0 .0 1)。

阴道毛滴虫RRas同源基因的克隆和序列分析

目的克隆和分析阴道毛滴虫RRas同源基因,以探讨其在细胞内信号传导通路中的功能。方法从已构建的阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离得到一个与人类RRas同源的cDNA克隆,用PCR扩增该cDNA克隆TvRRas相对应的基因组DNA,并对cDNA克隆及其对应的基因组DNA进行测序。利用BLASTP,RPS-BLAST和ClustalW等工具进行序列分析。结果TvRRascDNA序列全长705对碱基,读码框含615对碱基,推测蛋白质序列具205个氨基酸。序列分析显示该基因的基因组DNA序列含有5′端ATG起始密码子和3′端的终止密码子,与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子;进一步分析表明该基因系RRas亚家族的同源基因,其氨基酸序列与人类和小鼠的RRas同源性最高(两者的一致性均为51%,相似性均为70%),同时拥有人类RRas基因高度保守的结合GTP的结构域和完全一致的效应结构域。进化树分析表明该基因与人类的RAS原癌蛋白基因分支及RRas分支聚类。结论获得了阴道毛滴虫RRas同源基因。

阴道毛滴虫Rac1蛋白的cDNA克隆和序列分析(英文)

目的 获得阴道毛滴虫Rac1蛋白的cDNA克隆 ,研究其在细胞周期中的调解作用。 方法 提取阴道毛滴虫总RNA ,构建cDNA表达文库 ,随机分离cDNA克隆并测序。用在线生物分析软件NCBIBLAST、ClustalW以及Treeview等程序进行序列分析。 结果 获得一株有 714bp的cDNA克隆。序列分析表明 ,该克隆开放阅读框具 60 0bp ,推测肽链具 2 0 0个氨基酸。该肽链与Rho家族中Rac1鸟苷三磷酸 (GTP)酶同源性最高 (>60 % ) ,并具多种RhoGTP酶的保守基序 ,如GTP结合部位、GTP酶激活蛋白作用基序、GTP分离抑制因子作用基序、鸟嘌呤核苷酸交换因子作用基序等。进化树分析显示该克隆属于Rac亚家族GTP酶 ,与原虫Rac1蛋白最接近。 结论 该克隆属RhoGTP酶的Rac亚家族 ,很可能是阴道毛滴虫的Rac1蛋白。

阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆及序列分析(英文)

目的 :获取阴道毛滴虫硫氧还原蛋白过氧化物酶的cDNA克隆 ,研究其还原烷基氢过氧化物和氢过氧化物的抗氧化作用 ,以及调节由氢过氧化物介导的信号转换。 方法 :提取阴道毛滴虫的总RNA ,用λTripIEx2噬菌体载体构建cDNA表达文库 ,阳性质粒cDNA克隆进行测序 ,并用生物软件RPS Blast,NCBIBlast和ClustalW等对 6个读码框架进行序列分析。 结果 :获得一株开放阅读框为 5 88对碱基的cDNA克隆 ,推测肽链有 196个氨基酸。序列分析表明 ,该肽链与衣滴虫过氧化物氧化还原酶 (Prx1蛋白 )及人的自然杀伤增强因子B分别有 5 6 %和 6 1%的同源性 ;除了两个高度保守的半胱氨酸作用基序外 ,还有蛋白激酶C磷酸化和酪氨酸激酶磷酸化作用基序 ,N 豆蔻酰化作用位点 ,脂质运载蛋白信号位点等。 结论 :该蛋白有 >5 6 %的可能性位于胞浆 ,和典型 2 CysPrx亚家族有很高 (5 6 %～ 6 2 % )的同源性 ,很可能是其中的一个新成员。

阴道毛滴虫沉寂信息调节因子Sir2同源基因克隆和蛋白表达

目的克隆并分析阴道毛滴虫(Trichomonasvaginalis)沉寂信息调节因子Sir2基因,构建原核表达重组载体,表达重组蛋白,并制备抗体进行相关功能的研究。方法从阴道毛滴虫cDNA表达文库中分离获得阴道毛滴虫Sir2同源基因的cDNA克隆、测序,并采用相关在线程序及软件进行序列分析。将cDNA部分片段亚克隆到原核表达载体pET-41a,转化宿主菌E.coliBL21,IPTG(isopropylthio-β-D-galactoside)诱导表达,亲和层析法纯化表达产物并对表达产物进行SDS-PAGE鉴定之后,用纯化重组蛋白免疫豚鼠获得抗血清,对重组蛋白和滴虫总蛋白进行蛋白质印迹鉴定。结果在阴道毛滴虫cDNA文库中获得一株1034bp的cDNA克隆,序列分析表明,该序列开放阅读框有912bp,推测肽链具有304个氨基酸,等电点(PI)5.5。该肽链与酵母SIR2p蛋白及其同源物一致性高达30%～47%,并具有SIR2p及其同源蛋白的三个高度保守的特征性结构域。进化树结果显示,TvSIR2p接近线虫的SIR2蛋白,与同时克隆到的基因组TvSir2比较序列一致,证明该TvSir2基因组DNA不含内含子。PCR扩增出890bp片段,植入表达载体pET-41a;经酶切鉴定后取阳性克隆用IPTG诱导表达,产生融合蛋白产物经SDS-PAGE鉴定相对分子质量为62000,与预期分子质量相符。用该融合蛋白免疫豚鼠得到的抗体,经Westernblotting检测其与相应融合蛋白发生特异性反应,同时在33000处也能识别滴虫虫体全蛋白。结论推测该克隆是阴道毛滴虫Sir2的同源基因,该基因没有内含子,它可能参与阴道毛滴虫的组蛋白去乙酰化作用及调节衰老和寿命。阴道毛滴虫Sir2基因可以在大肠杆菌中得到表达,并获得了相应的抗血清,为进一步研究其功能奠定了基础。

广州血管圆线虫成虫的扫描电镜观察

应用扫描电镜对广州血管圆线虫的成虫进行了全面观察。该虫头部顶面有一个口腔,周围有两圈感觉乳突,每圈6个,但外圈的已退化而不很明显。在内圈侧乳突的外侧,有一对头感器开口。体壁表面有环状横纹,两横纹间有纵行皱襞。雄虫尾部两根交合刺的形态结构明显不同,根据其形态特征,我们分别称之为管状交合刺及槽状交合刺。当管状交合刺被包于槽状交合刺中时,外观似为一根:而当其从槽中脱出时,则外观为两根。此外,对雄虫的交合伞及雌虫尾部的结构也进行了描述。

鞭虫成虫的扫描电镜观察

用扫描电镜观察人鞭虫成虫的体表超微结构，并与前人用光学显微镜所观察的结果作了比较，认为鞭虫体表展现了它的独特性。首次描述了头端口周的唇样结构，围绕着口孔环形排列着８个头孔和一对头感器。发现鞭虫体表散布着表皮孔，认为与排泄有关。对雄虫的交合刺鞘和交合刺的特征也进行了详细的描述。

阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶cDNA克隆和序列分析(英文)

目的近年研究表明Rab11鸟苷三磷酸酶在调节各种真核细胞的膜转运通道中发挥着重要作用。但是,对于原生动物毛滴虫膜转运系统的研究仍甚少。本研究旨在克隆和分析阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶基因,以便进一步探讨其功能。方法使用SMARTcDNA文库构建试剂盒构建阴道毛滴虫cDNA表达文库,用生物信息学进行TvRab11同源分析,鉴定TvRab11基因,用PCR方法扩增基因组DNA,TA克隆TvRab11cDNA、测序及序列分析。结果在分离出的cDNA克隆中发现一个Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因。该cDNA序列长710bp,读码框含636bp,推测蛋白质序列具211个氨基酸。序列分析表明该基因系Rab11亚家族的同源基因,其推测肽链与拟南芥Rab11c的同源性最高(一致性60%,相似性79%),与人类Rab11b次之(一致性58%,相似性78%)。该氨基酸序列拥有Rab鸟苷三磷酸酶家族的所有保守结构域和特异性Rab结构域(RabF1-5)。进化树分析也表明该基因系Rab11的同源基因。序列分析还显示该基因的基因组DNA序列与cDNA序列完全一致,提示该基因无内含子。结论分析表明该基因是阴道毛滴虫Rab11鸟苷三磷酸酶同源基因,其功能有待进一步研究。