人免疫缺陷病毒TAT蛋白转导肽与人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F/3G串联锌结合域的融合表达

目的:分析载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白质3F和3G(APOBEC3F/3G)的蛋白基序,获得具有细胞转导潜力的抗病毒基序融合蛋白。方法:用MotifScan软件对APOBEC3F/3G进行生物信息学分析,找出APOBEC3F/3G中的锌结合域(ZBRs)。通过PCR及多步酶切克隆得到APOBEC3F/3G的3个串联ZBRs基因片段,并将其与人免疫缺陷病毒(HIV)的TAT蛋白转导域基因克隆至原核表达载体(pET32a),转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。结果:酶切和测序鉴定,得到含有HIV-TAT和3个ZBRs基因的重组质粒;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析,融合蛋白在BL21(DE3)中获得表达,占菌体总蛋白的20%。结论:获得含HIV-TAT和3个ZBRs的融合表达重组蛋白,为进一步研究APOBEC3F/3G抗病毒机制,也为其在抗病毒治疗中的应用打下基础。

人天然免疫分子Tetherin基因的克隆表达及其对流感病毒增殖的影响

目的:研究人天然免疫分子Tetherin的抗流感病毒作用。方法:从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆Tetherin基因并构建真核表达质粒,经限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定后,脂质体转染法将Tetherin导入犬肾上皮细胞(MDCK),间接免疫荧光检测Tetherin细胞中的定位。利用流感病毒H1N1(PR8)病毒空斑形成实验检测Tetherin与流感病毒增殖的关系。结果:RT-PCR扩增出543 bp片段,成功克隆Tetherin;免疫荧光结果表明Tetherin定位于细胞膜。PR8空斑形成实验提示在转染与未转染Tetherin的MDCK中,病毒空斑没有明显形状大小或数量的区别。结论:Tetherin不能有效抑制流感病毒增殖。